微小RNA-221对结直肠癌中CDKN1C/P57表达调控的研究

目的 观察结直肠癌组织和细胞中微小RNA-221（miR-221）和CDKN1C/P57表达情况,并探讨特异性miR-221抑制剂对癌细胞增殖、凋亡及CDKN1C/P57表达的影响.方法 应用实时荧光定量PCR检测34例结直肠癌组织和相应癌旁组织、以及4种人结直肠癌细胞系HT-29、Lovo、SW-480、Caco2中miR-221表达情况;采用半定量RT-PCR和Western-blot法分析CDKN1C/P57mRNA及蛋白表达情况;将miR-221和anti-miR-221寡核苷酸通过脂质体转染Caco2细胞系,通过MTT法及流式细胞仪观察细胞的增殖及凋亡情况.结果 miR-221在结直肠癌组织中的相对表达量为2.041±1.401,明显高于癌旁组织（0.806±0.341,P＜0.01）;同样,miR-221在4种人结直肠癌细胞系中的表达亦高于正常对照细胞.CDKN1C/P57 mRNA水平在结直肠癌与癌旁组织中差异并不显著;但其蛋白相对表达量结直肠癌组织显著高于癌旁组织（3.019±1.708比0.972±0.316,P＜0.01）.癌细胞转染anti-miR-221后,CDKN1C/P57蛋白表达上调,细胞增殖受抑,细胞凋亡率增高,G0/G1期细胞比例增加同时S期细胞比例下降,差异均有统计学意义（P＜0.01）.结论 miR-221可能通过转录后基因沉默机制使CDKN1C/P57蛋白表达水平下降,从而促进结直肠癌发生发展;anti-miR-221可通过抑制细胞增殖同时诱导细胞凋亡,以抑制结直肠癌细胞生长;miR-221有可能成为结直肠癌生物治疗的新靶点.     

Anti-microRNA-221通过上调PTEN蛋白表达增加结直肠癌细胞的放射增敏性

目的探讨下调microRNA-221（miR-221）表达对人结直肠癌细胞的放射敏感性的影响及其分子机制。方法常规培养人
结直肠癌Caco2细胞系,以脂质体转染反义miR-221（anti-miR-221）后,应用实时荧光定量PCR（Real-time Q-PCR）检测Caco2
细胞中miR-221和PTEN mRNA表达水平,应用Western-blot分析肿瘤细胞中PTEN蛋白表达变化;不同处理组的肿瘤细胞经
照射后,流式细胞仪检测各处理组细胞的死亡情况。结果Real-time Q-PCR显示转染anti-miR-221后miR-221的表达水平明显
下调（P<0.05）,同时PTEN蛋白表达增高（P<0.05）;流式细胞仪检测可见anti-miR-221转染组及anti-miR-221转染联合照射组
死亡细胞比例均明显增多（P均<0.01）,转染anti-miR-221可明显提高Caco2细胞的放射敏感性,且此效应能被PTEN-siRNA部
分但不完全阻断。结论Anti-miR-221可通过上调PTEN蛋白表达增加结直肠癌细胞的放射敏感性。
     

X线辐射剂量对结直肠癌细胞中microRNA-221和p57kip2表达的影响

目的 探讨不同剂量X线辐射对人结直肠癌Caco2细胞系中microRNA-221（miR-221）和p57^kip2表达的影响。方法 常规培养Caco2细胞系并分为5组,分别给予不同剂量X线（0、2、4、6和8 Gy）照射,24 h后提取细胞总RNA和蛋白质,应用real-time Q-PCR检测细胞中miR-221和p57^kip2 mRNA的表达水平,Western blot检测p57kip2蛋白的表达变化。结果 Caco2细胞系在不同照射剂量下,miR-221表达水平随着照射剂量的增加而增加,而p57kip2蛋白表达水平则随着照射剂量的增加而逐步降低,且呈剂量依赖效应,两者差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论 放射线辐射剂量可影响结直肠癌细胞中miR-221/ p57^kip2调控通路,抑制miR-221表达可能会提高结直肠癌细胞的放射敏感度。     

特异性miR-221抑制剂对结直肠癌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨miR-221在结直肠癌细胞中的表达状况及特异性miR-221抑制剂对癌细胞增殖和凋亡的影响。方法应用实时荧光定量PCR(real-time Q-PCR)检测四种人结肠癌细胞系HT-29、Lovo、SW-480、Caco2中miRNA-221表达状况,并以人脐静脉内皮细胞HUVEC作为正常对照;设计并合成miR-221、anti-miR-221(微小RNA抑制剂)寡核苷酸,以脂质体转染Caco2细胞系,以Real-time Q-PCR再次检测转染后细胞中miR-221表达状况,并通过噻唑蓝(MTT)比色法及流式细胞仪观察细胞的增殖和凋亡状态。结果与正常细胞相比,4种人结肠癌细胞系中miR-221表达均显著增高,差异具有统计学意义(P<0.01);癌细胞转染anti-miR-221后,G0/G1期细胞比例明显增加,而S期细胞比例显著下降,并可见细胞凋亡的发生(P<0.01)。结论 miR-221特异性抑制剂可通过抑制细胞增殖同时诱导凋亡而抑制结直肠癌细胞生长,提示miR-221作为结直肠癌生物治疗有效靶点有进一步研究价值。     

肠缺血再灌注损伤后肠上皮RSpo1表达及其意义

目的 探讨R-Spondinl(RSpol)在肠缺血再灌注损伤后肠道的表达及其意义.方法 健康雄性昆明小鼠50只,分为对照组(10只)和实验组(40只).对照组小鼠仪作剖腹手术,实验组小鼠麻醉后夹闭肠系膜动脉20min后松夹,分为再灌流6 h(A组)、12 h(B组)、24 h(C组)和48 h(D组).采用ELISA和RT-PCR方法检测小肠组织RSpol的表达.结果 RT-PCR和ELISA结果均显示RSpol在肠缺血再灌注损伤后6h表达较对照组显著降低(P<0.05),12 h表达逐渐增加,在24 h达到最高并显著高于对照组(P<0.05),随后其表达迅速下降,在48 h显著低于对照组(RT-PCR:P<0.05:ELISA:P<0.01).结论 缺血再灌注损伤能抑制肠道内分泌细胞早期RSpol表达,诱导中期RSpol表达,RSpol能促进肠道上皮干细胞增殖分化,参与肠黏膜受损后的修复过程.     

肠外瘘152例临床治疗分析

目的 探讨肠外瘘的综合治疗措施.方法 对我院1992年1月～2007年12 月间收治的152例肠外瘘患者的临床资料进行回顾性分析.结果 致瘘的主要原因为腹部手术后并发症(127例,83.6%),其余为腹部外伤、炎症性肠病、腹部肿瘤等;经基本治疗后瘘口自愈64例(42.1%),58例行确定性手术治愈,总治愈率80.3%,确定性手术成功率96.7%,全组死亡率7.9%.结论 肠外瘘应采取综合治疗,包括充分引流、控制感染、营养支持、生长抑素、生长激素的序贯应用和适时的确定性手术.     

大剂量5-FU致肠黏膜严重损伤时肠上皮细胞PCNA的表达

目的探讨大剂量5-FU致肠黏膜严重损伤时肠上皮细胞增殖细胞核抗原（PCNA）的表达及其意义。方法成年C57BL／6J小鼠40只,分为对照组（n=8）和实验组（n=32）。对照组给予腹腔注射PBS,实验组给予腹腔注射大剂量5-FU（150mg／kg．d,连续五d）,分别于处理后第1、3、5天,剖杀小鼠取小肠,常规HE染色,免疫组化检测PCNA的表达。结果与对照组比较,腹腔注射大剂量5-FU后,小鼠肠黏膜遭受严重破坏,黏膜萎缩,绒毛、隐窝结构消失;免疫组化结果显示PCNA表达增加,PCNA指数显著增高（P〈0．01）。结论腹腔注射大剂量5-FU后。肠黏膜细胞中表达PCNA的肠上皮细胞比例增加．可能与肠黏膜榻伤后修复有密切的关系．     

L-精氨酸对严重腹腔感染大鼠肠上皮细胞凋亡的影响

目的 了解L-精氨酸对严重腹腔感染大鼠肠上皮细胞凋亡的影响.方法 18只Wistar大鼠随机分为CLP组(n=6)、ARG组(n=6)和对照组(n=6),CLP组和ARG组均采用大鼠盲肠结扎加穿孔(CLP)制作严重腹腔感染模型;ARG组术后于腹腔注射L-精氨酸(300 mg/kg·d),CLP组术后注射等量生理盐水,对照组仅行剖腹术.各组均于术后24 h取小肠组织,采用原位末端标记法计数各组凋亡细胞.结果 与对照组大鼠比较,CLP组和ARG组小肠黏膜上皮细胞凋亡细胞数量显著升高(P＜0.001);与CLP组比较,ARG组小肠黏膜上皮细胞凋亡细胞数量显著降低(P=0.038).结论 严重腹腔感染可导致大鼠肠黏膜上皮细胞凋亡增多,应用L-精氨酸可减少肠黏膜上皮细胞凋亡.     

外科进修医师临床科研能力培养现状调查与分析

对我院近 4年来 2 3 0名外科进修医师进行了问卷调查。结果发现 ,进修医师学习结束后 ,90 %以上没有得到科研训练 ,临床科研能力明显不足。因此 ,积极为其开设科研选修课程和讲座、提供临床科研训练、指导撰写科研论文是加强外科进修医师临床科研能力的有效途径和方法。