STAT1过表达慢病毒载体的构建及其在MHCC97L细胞中的表达

目的：构建STAT1基因过表达慢病毒载体并实现其在人肝癌细胞MHCC97L中的表达。方法：根据人STAT1基因mRNA序列,全基因合成STAT1基因,构建至过表达载体并转化至感受态细胞DH5OC,进行测序验证。在脂质体介导下转染293T细胞,包装生产慢病毒。慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L,用荧光定量PCR和Westernblot检测原始细胞株（MHCC97L）,稳转细胞株（MHCC97－statl）中STAT1的表达情况,确定STAT1过表达的有效性。结果：测序证实STAT1基因过表达载体构建成功。过表达慢病毒包装成功。慢病毒转染人肝癌细胞MHCC97L48h后,STAT1基因在mRNA水平和蛋白质水平上表达显著增加。结论：STAT1基因过表达慢病毒载体构建成功,并实现其在人肝癌细胞MHCC97L中的表达。     

人VEGF基因慢病毒介导RNA干扰有效靶点的设计及筛选

目的:设计并筛选人血管内皮生长因子(VEGF)有效RNA干扰片段,构建VEGF慢病毒表达载体。方法:对人VEGF基因编码区分析,筛选序列3条,阴性对照序列l条,通过连接线性化的plenti6.3-MIR载体,构建miRNA慢病毒载体质粒,并转化至感受态细胞DH5α,进行测序验证。在脂质体介导下转染293T细胞,包装生产慢病毒,测定其滴度。慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L,用Real-time PCR检测干扰效果。结果:测序证实3个VEGF基因RNAi慢病毒载体质粒构建成功。慢病毒载体经293T细胞包装成功,测定病毒的滴度分别为3.23×109、3.30×109、3.73×109TU/mL。3个慢病毒载体转染人肝癌细胞MHCC97L后,VEGF基因在mRNA水平受到抑制,其中miR-200序列效果最佳,对VEGF基因表达的干扰效率可达72%。结论:成功构建并筛选了人VEGF基因RNAi慢病毒载体及有效靶点,为进一步深入研究VEGF基因与抗肿瘤药物药效关系提供实验基础。     

辣椒辣素对糖尿病大鼠模型视网膜血管通透性的影响

目的 探讨辣椒辣素对糖尿病大鼠(DM)视网膜血管通透性及新生血管的影响。方法 选取8周龄雄性SD大鼠24只,随机分为4组(n=6):正常对照组(NC)、糖尿病组(DM)、糖尿病3 mg/kg辣椒辣素处理组(CAP3)、糖尿病6 mg/kg辣椒辣素处理组(CAP6)。3组糖尿病组大鼠均采用高脂饲料(HFD)+小剂量链脲佐菌素(STZ)联合诱导,建立2型糖尿病大鼠(T2DM)模型。监测4组大鼠体质量和空腹血糖。检测血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)浓度;伊文思蓝造影观察视网膜血管通透性改变;免疫荧光检测视网膜辣椒辣素受体1(TRPV1)分布;Western blot检测视网膜TRPV1、血管内皮生长因子(VEGF)、闭锁蛋白(occludin)水平。结果 与DM组相比,生化指标提示CAP3、CAP6组大鼠血清中TC、TG、LDL浓度降低(P<0.01);造影结果提示DM组大鼠视网膜血管通透性增高,存在多处强荧光渗漏区域,CAP3、CAP6处理组渗漏减轻;免疫荧光显示,CAP3、CAP6组视网膜神经节细胞层、内核层及外核层TRPV1...     

基于诺丁斯关怀理论临床护士人文关怀能力评价指标体系的构建

目的基于诺丁斯关怀理论构建临床护士人文关怀指标体系,为评估临床护士人文关怀能力提供方法和策略。方法在诺丁斯关怀理论的基础上,结合文献研究法和质性访谈法,并选取来自安徽省的29名专家进行2轮德尔菲专家咨询,以确立临床护士人文关怀能力评价的指标体系。结果2轮德尔菲专家咨询的积极系数分别为96.67%和100%,专家权威程度系数为0.86、0.87,第一轮专家函询的Kendall协调系数为0.282,第二轮为0.276;各指标赋值均数为4.69~4.93;变异系数为0.052~0.169,分值均符合要求。经过2轮德尔菲初步构建了一套4个一级指标、12个二级指标、92个三级指标的临床护士人文关怀能力评价的指标体系。结论运用德尔菲法构建的临床护士人文关怀能力评价指标体系,其函询结果可靠,专家的积极程度、权威程度、协调程度及集中程度均较高,可作为临床护士人文关怀能力的评价工具。     

三维重建结合3D打印技术在腔镜甲状腺手术中的临床应用

目的:探讨三维重建结合3D打印技术在腔镜甲状腺手术中的临床应用。方法:回顾分析125例经胸乳入路腔镜甲状腺切除术的临床资料,其中116例行常规腔镜甲状腺手术(A组);9例应用强化CT三维重建结合3D打印技术行腔镜甲状腺手术(B组)。结果:两组手术均获成功,无一例中转开放,均未损伤喉返神经及甲状旁腺。B组较A组手术时间短,出血减少,与患者沟通更容易,两组相比差异有统计学意义(P0.05);术后并发症发生率及随访患者满意度两组相比差异无统计学意义(P0.05)。结论:两种术式的美容优势均较明显,将三维重建结合3D打印技术应用于腔镜甲状腺手术前手术预演、精准诊疗及与患者沟通等方面,可减少手术及与患者沟通的时间、术中出血量,降低手术难度,提高手术安全性,具有较广阔的应用前景。     

人Kv1.3通道基因转染人胚胎肾细胞的研究

目的:建立表达人Kv1.3通道的细胞模型,为临床研究提供帮助。方法:Lipofactamine2000脂质体将人Kv1.3通道基因转染人胚胎肾细胞(HEK293),通过荧光显微镜和全细胞膜片钳技术观测人Kv1.3通道基因的表达。结果:pcDNAHKv1.3真核表达载体转染HEK293细胞2 d后,荧光显微镜可观察到人Kv1.3通道表达;3 d后全细胞膜片钳技术记录到人Kv1.3通道基因编码的通道电流。结论:pcDNAHKv1.3真核表达载体转染HEK293细胞为人Kv1.3通道的研究提供良好的真核细胞表达系统和细胞模型,有利于指导治疗自身免疫性疾病新药的开发。     

中药薰洗及温针灸法治疗膝关节骨性关节炎临床观察

目的:观察中药薰洗结合温针灸法治疗膝关节骨性关节炎的临床疗效.方法:将73例膝关节骨性关节炎的患者随机分为治疗组和对照组.其中治疗组38例,共52膝;对照组35例,共46膝.治疗组采用中药薰洗及温针灸法治疗,对照组采用戴芬内服.分别观察并比较其临床综合疗效及镇痛、消肿和改善关节功能的效果.结果:治疗组在临床综合疗效及镇痛、消肿和改善关节功能方面明显优于对照组(P＜0.05).结论:中药薰洗结合温针灸法治疗膝关节骨性关节炎临床疗效显著,适应证广,且副作用少,值得临床推广应用.     

压宁定抢救高血压急症30例临床观察

高血压急症会给患者带来突然的危险,病人可能在几小时内死亡,组织器官发生不可逆的严重损害。所以对待每例这类患者均应立即进行抢救,使血压迅速降至理想水平。然而,目前现有的降压药不是降压速度偏慢,就是副作用大或用药剂量不易掌握,不适应现代急救需求。压宁定(Ebrantil)为近年引进的一种新型降压药,研究表明该药具有明显的降压作用。1999年11月至2001年12月作者选择压宁定治疗30例高血压急症留观病人,取得满意疗效,现报道如下: