40001/大鼠掺锶冻干骨的制备及体内植入生物相容性研究

摘要 背景：同种异体冻干骨是良好的骨移植材料,但在制备过程,其天然活性成分有所丢失或部分失活,成骨活性下降。努力改善冻干骨成骨活性,希望研制出一种能克服上述缺点的新型材料运用于临床。 目的：观察掺锶冻干骨植入大鼠体内的生物学活性。 方法：按照标准的冻干骨加工程序制备大鼠股骨髁冻干骨材料,采用氯化锶溶液浸泡方法制备掺锶冻干骨。将27只健康成年SD大鼠随机分为3组,每组9只。SD大鼠钝性分离肌肉,造成股部肌袋,双侧均行手术。植入掺锶冻干骨作为实验组,同法植入未掺锶的普通冻干骨作为对照组。空白对照组双侧均不植入任何材料。分别于植入后4,8,12周处死各组动物3只,行大体观察、组织学观察,并依据炎性浸润及组织纤维化程度进行组织学评分。 结果与结论：采用氯化锶溶液浸泡方法制作掺锶冻干骨,锶相对钙元素掺入摩尔浓度为4.2%时在骨质内层锶元素浓度分布比较均匀。实验组和对照组植入材料周围均可见炎性细胞、肉芽组织和血管生成,并随着时间推移,炎性浸润程度明显降低,而周围纤维组织包绕增加。空白对照组炎性浸润程度轻,少量组织纤维化。实验组和对照组与空白对照组相比,炎性浸润程度及组织纤维化程度组织学评分差异有显著性意义(P < 0.05)。说明通过温和的锶-钙离子交换方法可以在冻干骨中有效的掺入锶元素,获得一种掺锶冻干骨材料;该掺锶冻干骨具有良好的生物组织相容性,与普通冻干骨比较无明显差异。 关键词：冻干骨;锶元素;制备;体内植入;大鼠;生物相容性 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2011.12.015     

RNF185的克隆及过表达对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响

目的克隆RNF185全长基因,构建真核表达载体,检测其蛋白表达和亚细胞定位,并探讨RNF185过表达对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响。方法 TRIzol法提取人胚肾HEK293T细胞的总RNA,经RT-PCR反应扩增出RNF185基因,并通过酶切连接将其构建到真核表达载体pCMV-Myc和pEGFP-N1上,阳性克隆经PCR及酶切鉴定后测序。测序正确后抽提质粒作为模板扩增N端截短体,构建其真核表达载体。转染MC3T3-E1检测其蛋白表达及亚细胞定位情况。采用碱性磷酸酶染色法分析RNF185过表达对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响。结果①完成了RNF185的分子克隆,构建的真核表达载体pCMV-Myc-RNF185测序正确,所获得的序列与GenBank中收录的序列完全一致,N端截短体测序正确;②成功转染至MC3T3-E1细胞,蛋白相对分子质量大小与预期一致,全长形式定位于质膜;③RNF185及其N端截短体过表达均可抑制MC3T3-E1细胞的成骨分化。结论 RNF185过表达可抑制MC3T3-E1细胞的成骨分化。     

掺锶冻干骨体内植入的生物相容性

背景：同种异体冻干骨是良好的骨移植材料,但在制备过程,其天然活性成分有所丢失或部分失活,成骨活性下降。努力改善冻干骨成骨活性,希望研制出一种能克服上述缺点的新型材料运用于临床。 目的：观察掺锶冻干骨植入大鼠体内的生物学活性。 方法：按照标准的冻干骨加工程序制备大鼠股骨髁冻干骨材料,采用氯化锶溶液浸泡方法制备掺锶冻干骨。将27只健康成年SD大鼠随机分为3组,每组9只。SD大鼠钝性分离肌肉,造成股部肌袋,双侧均行手术。植入掺锶冻干骨作为实验组,同法植入未掺锶的普通冻干骨作为对照组。空白对照组双侧均不植入任何材料。分别于植入后4,8,12周处死各组动物3只,行大体观察、组织学观察,并依据炎性浸润及组织纤维化程度进行组织学评分。 结果与结论：采用氯化锶溶液浸泡方法制作掺锶冻干骨,锶相对钙元素掺入摩尔浓度为4.2%时在骨质内层锶元素浓度分布比较均匀。实验组和对照组植入材料周围均可见炎性细胞、肉芽组织和血管生成,并随着时间推移,炎性浸润程度明显降低,而周围纤维组织包绕增加。空白对照组炎性浸润程度轻,少量组织纤维化。实验组和对照组与空白对照组相比,炎性浸润程度及组织纤维化程度组织学评分差异有显著性意义(P < 0.05)。说明通过温和的锶-钙离子交换方法可以在冻干骨中有效的掺入锶元素,获得一种掺锶冻干骨材料;该掺锶冻干骨具有良好的生物组织相容性,与普通冻干骨比较无明显差异。     

可注射含钙骨基质材料的制备及骨修复评价

目的 制备一种可注射含钙骨基质(injectable calcium-containing bone matrix,ICBM),评价其骨修复效果,并分析用于临床治疗的可行性。方法 将甘油和明胶作为赋型剂,与其制备的含钙骨基质(calcium-containing bone matrix,CBM)粉进行混合,得到ICBM;通过测定骨粉、赋型剂和ICBM的pH值、钙含量,以及赋型剂、ICBM的注射推力情况,对ICBM进行初步表征;通过体外L929细胞增殖实验对ICBM进行体外生物相容性评价;在昆明小鼠和白化豚鼠体内分别植入ICBM评价其体内安全性;进一步用裸鼠进行体内骨诱导验证;最后采用兔股骨髁缺损模型进行体内骨缺损修复,评价ICBM的有效性。结果 骨粉pH值为6.51±0.32、钙含量为(26.24±1.25)%;赋型剂pH值为5.56±0.28,注射推注力为(1.23±0.16) N;ICBM pH值为6.44±0.47,钙含量为(5.32±0.73)%,注射推注力为(10.87±1.53) N。ICBM组细胞相对增殖率为(104.25±3.39)%,细胞毒性为0级;ICBM未对昆明小...     

生物降解吸收型钙磷陶瓷材料

生物降解吸收型钙磷陶瓷材料衷鸿宾综述侯春林审校自本世纪七十年代以来，世界各国相继开发出与骨无机组成、结构相似的钙磷陶瓷（ｃａｌｃｉｕｍＰｈｏｓｐｈａｔｅＣｅｒａｍｉｃｓ简称ＣＰＣ）人工骨材料，如羟磷灰石、磷酸三钙等。它具有良好的生物相容性和表面活性，...     

选择性脊神经后根切断术治疗痉挛性下肢瘫痪初步报告

脑性瘫系先天或后天原因致大脑损害而引起的肢体运动障碍,其中痉挛性瘫痪约占60～70％。以往常规手术治疗方法效果多不确切及巩固,极易复发。本世纪初Foerster用切断脊神经后根的方法解除下肢痉挛但感觉功能亦丧失。70年代,Fasano创用选择性腰骶神经后根切断术(selective posteriorrhizotomy SPR)治疗痉挛性脑瘫,通过电刺     

石膏指夹板治疗掌骨颈骨折26例

自 2 0 0 0年 10月～ 2 0 0 2年 5月 ,应用闭合复位石膏指夹板外固定治疗掌骨颈骨折 2 6例 ,效果满意。报告如下。1　临床资料1 1　一般资料　本组 2 6例 ,2 0例 ,女 6例。年龄 17～ 4 8岁 ,平均 30 3岁。第 2掌骨骨折 9例 ,第 5掌骨骨折 17例。左侧 9例 ,右侧 17例。掌侧骨皮质有缺损 18例。掌击伤 18例 ,体育运动伤 4例 ,跌倒时握掌着地 2例 ,交通事故伤 2例。伤后至就诊时间 0～ 7d,平均 3d。1 2　治疗方法　取 2 0号铁丝 (约常用铅笔芯粗细 )折成“U”形 ,长 2 5～ 30cm ,宽 1 5～ 2 0cm。用 15cm宽的单层石膏绷带剪成比“U”形铁丝…     

巴氏法对异体骨中HIV病毒灭活效果的研究

目的 研究巴氏消毒法对异体骨材料中污染的人免疫缺陷病毒的灭活效果.方法 对连续3批异体骨材料进行浸泡染毒,用巴氏消毒法处理染毒异体骨材料,采用细胞培养法测定处理后的病毒滴度,并对样品进行细胞盲传3代,观察细胞病变情况.结果 用巴氏消毒法处理,染毒异体骨材料中HIV-1 IIIB毒株病毒滴度至少降低了5.67log,对检测标本盲传3代均未出现细胞病变.结论 巴氏消毒法能够有效灭活异体骨材料中污染的人免疫缺陷病毒.     

人类去细胞同种异体神经移植物化学萃取方法的研究

背景：研究表明：应用化学消化剂处理同种异体神经可以有效地清除细胞、髓鞘而不出现宿主免疫排斥反应，但目前这种方法仅在小动物及低等哺乳类实验中取得成功，离临床应用尚有差距。目的：清除人类周围神经中的细胞和髓鞘，萃取粗大和长段的去细胞神经移植物。设计：非随机非对照实验研究。地点和对象：实验在解放军第三O四医院骨科完成，对象为急性脑外伤死亡者，男，26岁，体质量75kg，死者家属同意遗体捐献。干预：切取年轻男性遗体捐献者的长段尺神经，以Triton X-100和脱氧胆酸钠溶液按一定浓度和程序进行化学处理。萃取神经及新鲜神经行HE染色、髓鞘染色及纤维素染色，以观察细胞、髓鞘及神经基底膜；免疫组织化学染色以显示许旺细胞基底板层；行半薄切片及超薄切片透射电镜检查，观察超微结构。主要观察指标：去细胞神经的物理形状，组织学观察和超微结构。结果：去细胞神经的延展性及神经外膜的韧弹性良好。细胞和髓鞘被彻底清除，神经基底膜被保留；许旺细胞基底板层保留完好；去细胞神经为一种没有细胞髓鞘及其碎片的空的神经基质管。结论：Triton X-100及脱氧胆酸钠化学处理方法，可有效清除人类周围神经中的细胞及髓鞘，萃取粗大和长段的去细胞神经；该神经移植物保持了网管柱状组织结构，保留了许旺细胞基底板层及其主要成分—板层素。