丘脑束旁核-纹状体神经元轴突终末的超微结构证实

目的研究丘脑束旁核(PFn)-纹状体神经元轴突终末的分布和超微结构特征,以及与纹状体神经元之间的形态学联系。方法借助于神经示踪剂BDA10K注射方法顺行标记PFn神经元,光镜和电镜下观察和计数阳性纤维在纹状体内的数量和分布形式以及超微结构特征,实验资料借助于SPSS软件统计处理分析和体视学观察。结果①PFn神经元轴突终末在纹状体内呈散在不均匀分布;背侧区显著多于腹侧区(P<0.001),而外侧区与内侧区之间差异无统计学意义(P=0.387)。②光镜高倍镜观察显示大量的BDA阳性纤维与纹状体不同类型神经元(包括NeuN阳性、Darpp-32阳性以及Parv阳性神经元)的胞体和突起在形态学上存在明显的相邻关系。③电镜观察和测量结果显示BDA阳性终末平均直径为(0.648±0.288)μm,同时发现它们与纹状体神经元之间主要形成兴奋性(非对称型)突触连接;阳性轴突终末的65.18%与树突形成兴奋性突触,其直径为(0.651±0.304)μm;剩余的34.82%[平均直径为(0.642±0.257)μm]与树突棘形成兴奋性突触连接。结论丘脑PFn-纹状体神经元轴突终末主要分布于纹状体的背侧区,并与纹状体不同类型的神经元显示相邻关系,电镜超微结构下证实其突触形式主要为轴-树兴奋性突触连接,结果提示丘脑PFn神经元对纹状体不同类型的神经元的影响可能具有选择性和特异性。     

大鼠脑缺血区局部炎症反应的实验探查

目的:研究脑缺血区血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)表达和单核/巨噬细胞浸润与脑缺血的病理联系。方法:运用免疫组化染色方法和局部脑缺血/再灌流模型探查40只SD大鼠脑缺血区VCAM-1阳性血管和单核/巨噬细胞的数量变化及其变化发生的时程。结果:大鼠脑缺血区微血管内皮细胞VCAM-1表达发生在脑缺血1h,并在16h的再灌流期间,其表达逐渐增加,显示明显的时间依赖性变化。单核/巨噬细胞在脑缺血区的浸润发生在脑缺血1h/再灌流2h,并随再灌流时间的延长,其数量逐渐增加,在再灌流16h,其数量最多,其浸润也显示明显的时间依赖性变化。脑缺血区血管内皮细胞VCAM-1表达的时相与单核/巨噬细胞浸润的时相基本一致。结论:脑缺血诱导缺血性血管内皮细胞表达VCAM-1和诱导单核/巨噬细胞在脑缺血区浸润。此结果提示VCAM-1和单核/巨噬细胞可能参与缺血性脑损伤的病理过程。     

脑缺血性半影区胶质细胞和神经元重组的形态学观察

【目的】观察大脑皮质缺血性半影区星形胶质细胞和小胶质细胞以及神经元的反应模式和时程以及相关蛋白表达概况 ,以探讨半影区胶质细胞之间以及与神经元之间及其与梗死灶修复之间的联系。【方法】采用大脑中动脉缺血模型和组化及免疫组化染色方法探查 2 4只成年雄性SD大鼠 (分成假手术对照、缺血 3d和 2周组 ,每组 8只 )脑梗死灶半影区的星形胶质细胞、小胶质细胞和神经元的形态学变化及其相关蛋白的表达。【结果】大脑皮质半影区的星形胶质细胞发生显著的形态学变化 :表现为胞体肥大、染色加深、突起增粗、变长 ,细胞的变化显示为明显的时间依赖性 ,脑缺血 3d时尤为显著。反应型星形胶质细胞的GFAP、巢蛋白 (nestin)和S10 0蛋白的反应性增强 ,在脑缺血 3d时尤为显著 (+++～ ++++)。半影区小胶质细胞也显示肥大和增生 ,在脑缺血 2周时更为显著 ,其补体 3型受体抗原和MHCⅡ类抗原呈渐进性高表达 ,脑缺血 2周时最显著 (+++～ ++++)。半影区神经元随缺血时间延长 ,由急性期损伤逐渐趋于稳定。脑缺血 3d时 ,半影区出现大量神经元死亡 ,神经纤维断裂 ,排列紊乱 ,密度下降 (+)。半影区神经元GAP43呈高表达 (++++)。脑缺血 2周时 ,半影区神经元的死亡减轻 ,神经纤维密度增加 (++) ,染色加深 ,GAP43表达减弱 (++     

尾壳核与大脑皮质缺血区炎症细胞反应的比较

目的：观察尾壳核和大脑皮质缺血区炎症细胞的反应模式,探讨尾壳核对缺血反应敏感的病理机制。方法：采用局灶脑缺血模型和组化,免疫组化染色方法,观察尾壳核和大脑皮质缺血区ED1、OX6和CD3阳性细胞的反应。结果：HE染色显示缺血尾壳核的组织病理学变化呈明显的团块状坏死区,T淋巴细胞和单核/巨噬细胞却显示明显的团块状排列,同时,缺血尾壳核小胶质细胞亦发生强烈的激活反应,并高表达免疫分子MHCⅡ类抗原,炎症细胞在尾壳核与在大脑皮质缺血区的反应形式不同。结论：单核/巨噬细胞,小胶质细胞和T淋巴细胞在缺血尾壳核的反应和分布特征与该区的组织病理学变化明显一致。提示这些因素可能与尾壳核对缺血的敏感性有关。     

CEPO对6-OHDA诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨氨甲酰化促红细胞生成素(CEPO)对6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)诱导PC12细胞损伤及凋亡的保护作用及其可能机制。方法借助CCK8、流式细胞(Flow cytometry,FCM)、Western-blotting和逆转录PCR(RT-PCR)技术检测PC12模型细胞相关指标的变化,实验数据以SPSS15软件统计分析。结果 CCK8结果显示6-O-HDA处理能够显著降低PC12模型细胞的存活率,而CEPO处理对其变化显示抑制作用;FCM技术探察结果显示,6-OHDA处理能够明显诱导PC12模型细胞的损伤与凋亡,而CEPO预处理能够减轻PC12模型细胞的损伤与凋亡(P<0.05);借助Western-blotting技术探察显示6-OHDA+CEPO处理组的PC12细胞的Cleaved caspase-3蛋白表达量显著低于6-OHDA处理组(P<0.05);RT-PCR结果显示,6-OHDA处理明显降低PC12模型细胞的Bcl-2 mRNA的表达(P<0.05)以及上调PC12模型细胞的Bax mRNA的表达(P<0.01),而CEPO处理明显上调Bcl-2 mRNA的表达水平(P<0.05)以及抑制Bax mRNA的表达(P<0.05)。结论CEPO处理能够显著抑制6-OHDA所诱导的PC12细胞的损伤及凋亡,其作用机制可能与其上调Bcl-2,并下调Bax和Caspase-3的表达有关。     

成年大鼠纹状体nNOS阳性神经元的形态特征及其对DA剥夺的反应

目的探讨成年雄性大鼠纹状体nNOS中间神经元对6OHDA诱导性DA剥夺的反应。方法选取60只成年雄性SD大鼠,随机分成正常对照组、生理盐水注射组、6OHDA处理组。实验借助6OHDA模型、免疫组化、免疫荧光、免疫印迹技术探察证实纹状体n NOS阳性中间神经元对DA剥夺的反应,实验数据用SPSS 20.0统计软件进行分析。结果免疫荧光双标记结果显示,nNOS阳性中间神经元与NPY神经元存在极高的共存率(98.5±0.1)%,其与C AT阳性中间神经元也存在较低的共存率(2.4±2.0)%。nNOS阳性神经元与Cr和Parv阳性中间神经元之间未观察到共存关系。免疫组化资料显示,n NOS阳性神经元胞体呈现梭形、圆形,nNOS胞体大小和主树突数量在对照组[分别为(13.4±1.3)μm、2.00±0.94)与6OHDA组[分别为(13.4±1.8)μm、1.77±0.73)之间差异无统计学意义(P≥0.05)。但6OHDA处理组n NOS阳性神经元胞体的数量(1.48±0.19)%显著多于对照组(0.77±0.13)%(P0.05)。Western blot技术探测显示,6OHDA组(0.98±0.07)的n NOS蛋白量表达量也显著高于对照组(0.56±0.04;P0.05)。结论 6OHDA诱导性DA剥夺明显导致纹状体n NOS阳性神经元的特征性反应及其蛋白高表达,此提示n NOS阳性神经元可能牵涉到DA剥夺诱导纹状体损伤的病理过程。     

利用神经通路示踪方法证实大鼠纹状体神经元的连接

Using neural pathway tracing and immunohistochemical technique, the striato-direct pathway (BDA3 kDa injected into the rat lateral globus pallidus) and striato-indirect pathway (BDA3 kDa injected into the substantia nigra pars reticulata) neurons were specifically labeled, and then subjected to double-labeled immunohistochemistry for mu-OPIOID Receptor (specifically-labeled striatal patch compartment), D1, and D2, respectively. The experimental findings showed that there are no statistically significant differences in the soma diameter and the number of primary dendrites between the striato-direct (substantia nigra pars reticularis) and indirect (globus pallidum externum) neurons labeled retrograde by BDA3 kDa. In addition, these two kinds of projection neurons revealed no obvious coexistence. This evidence indicates that as a highly sensitive neural pathway tracer, BDA could yield reliably and exquisitely detailed labeling of target neurons and synaptic structures. The variance of the morphologic structures and the localization of neurons were not statistically significant between the striato-substantia nigra pars reticularis and the globus pallidum externum projection neurons. Mesencephalic and thalamic neurons correlated with striatal neurons in morphology. Especially the latter which make typical excitatory synaptic contacts with striato-direct and -indirect neurons. Thus, this evidence suggests that thalamic neurons may extensively excite striatal neurons.     

肠缺血再灌注对大鼠脑的影响

目的 评价肠缺血再灌注对大鼠脑的影响.方法 健康雄性成年SD大鼠64只,采用随机数字表法,将其随机分为2组(n=32):假手术组(S组)和肠缺血再灌注组(II/R组),采用Morris水迷宫实验测定认知功能,随后II/R组采用夹闭肠系膜上动脉90min后再灌注的方法制备肠缺血再灌注模型,S组仅分离肠系膜上动脉,不夹闭.于再灌注2、6、12、24 h时各组随机取8只大鼠,经心脏取血2ml后,取肠及脑组织,光镜下观察病理学结果,采用改良Chiu评分法评价肠粘膜损伤程度,采用ELISA法测定血浆TNF-α和IL-6浓度,采用TUNEL法检测皮层脑组织细胞凋亡情况;于再灌注24 h时采用Morris水迷宫实验测试认知功能.结果 S组大鼠肠及脑组织镜下结构未见异常,II/R组再灌注6 h后可见明显肠道和脑损伤.与S组比较,II/R组再灌注2、6、12和24 h时Chiu评分、血浆TNF-α及IL-6浓度升高,再灌注6、12和24 h时细胞凋亡数增加,再灌注24 h时大鼠潜伏期、游泳距离增加,穿越平台次数减少(P＜0.05或0.01),游泳速度差异无统计学意义(P＞0.05).结论 肠缺血再灌注损伤可诱发大鼠脑损伤,引起认知功能减退,可能与炎性介质的释放及神经细胞凋亡有关.

Abstract：

Objective To investigate the effects of intestinal ischemia-reperfusion (I/R) on the brain in rats. Methods Sixty-four healthy male SD rats weighing 250-300 g were randomly allocated to one of 2 groups (n = 32 each): sham operation group (S) and intestinal I/R group (I/R). Intestinal I/R was produced by occlusion of superior mesenteric artery (SMA) for 90 min followed by reperfusion. Eight animals were sacrificed at each of the following time points: 2, 6, 12 and 24 h of reperfusion (T1-4) in each group. After a median sternotomyblood samples were taken from left ventricle for measurement of plasma TNF-α and IL-6 (by ELISA). Intestine and brain tissue was harvested for microscopic examination and detection of apoptosis ( by TUNEL). The cognitive function was tested using Morris water maze at 24 h. Results No abnormality was found in intestine and brain tissue in group S. Intestinal damage and neurodegeneration were detected in group I/R. Intestinal I/R significantly increased cerebral apoptosis in group I/R compared with group S. Plasma TNF-a and IL-6 concentrations were significantly higher at T1-4 in group I/R than in group S. The escape latency and swimming distance were significantly increased, while the number of crossing the platform was decreased in group I/R compared with group S. There was no significant difference in the swimming speed between the 2 groups. Conclusion Intestinal I/R can induce brain injury and lead to cognitive dysfunction. I/R-induced release of inflammatory mediators and neuronal apoptosis are involved in the underlying mechanism.     

大鼠脊髓钙调蛋白Parvalbumin和Calbindin-28KD阳性神经元的形态与分布特征

目的 观察证实钙调蛋白Parvalbumin( PV)和Calbindin-28KD (CB)阳性神经元在大鼠脊髓不同节段不同区域内的形态及分布特征.方法 成年雄性SD大鼠常规灌注固定,取第5～8颈髓、3～6胸髓和1～5腰髓节段;振动切片之后进行免疫组化PAP单标记;光镜观察阳性神经元的形态和分布特征、并进行计数和测量;用Excel软件对阳性神经元数量、胞体大小、突起数量进行统计处理.结果 PV阳性神经元主要存在于后角的Ⅱ层和胸核、中间带外侧、中间内侧核、前角的Ⅷ层;CB阳性神经元主要存在于后角Ⅰ～Ⅱ层、中间带,前角的Ⅷ～Ⅸ层之间.后角细胞较中间带及前角细胞数量多,胞体小,突起少.在不同区域,两种阳性神经元的细胞数量,胞体大小,突起数目都存在统计学差异(P＜0.05);而在不同节段同一区域的比较中,只有腰前角PV阳性神经元的胞体比较大(P＜0.05).结论 PV阳性神经元在胸核及中间内侧核的聚集以及阳性纤维在薄楔束和后角Ⅱ层胶状质内的密集分布提示其与机体痛觉传入、本体感觉及内脏感觉的联系;CB阳性神经元在前角Ⅷ～Ⅸ层之间的特征性分布说明其与闰绍细胞功能有关;两种钙调蛋白在脊髓不同节段之间的形态及分布基本无差别提示它们的功能并没有特异地对应于躯体或内脏.     

大鼠脑缺血区非特异性酯酶阳性细胞的分布和定量研究

目的　探查非特异性酯酶阳性细胞的变化和与脑缺血的病理联系。　方法　用酶组织化学方法对４０只ＳＤ大鼠脑局部缺血／再灌流损伤区非特异性酯酶阳性细胞的分布和数量进行了观查。　结果　脑缺血区非特异性酯酶阳性细胞的数量增加发生于脑缺血１ｈ 再灌流２ｈ,随后逐渐增加,在脑缺血１ｈ 再灌流１６ｈ 达到高峰。阳性细胞的增加显示明显的时间依赖关系。阳性细胞主要位于小血管和微血管的壁内及其周围。在缺血侧基底节区非特异性酯酶阳性细胞比皮质缺血区多。　结论　非特异性酯酶阳性细胞对脑缺血刺激反应敏感,在缺血侧基底节区,其反应更为强烈,此因素可能是基底节区易发生中风的原因之一。