揭示神经病理性疼痛机制：坐骨神经分支选择性损伤模型的研究进展

目的：为研究神经病理性痛的机制，能够模拟神经病理性痛的临床特点的实验动物模型显得尤为重要。综述了近几年发展起来的坐骨神经分支选择性损伤(spared nerve Injury，SNI)所致神经病理性痛的研究进展。资料来源：应用计算机检索Pubmed1990-10／2004-1-期间的相关文章，检索词“neuropathologic pain，nerve injury”，再利用检索词“spared nerve injury”进行检索，文章语言限定为English。同时手工或计算机检索万方数据库1990-10／2004-10期间的相关文章，限定文章语言种类为中文，检索词“神经病理性痛、周围神经损伤”。资料选择：对资料进行初审，选取与周围神经损伤所致病理性痛密切相关的研究。纳入标准：研究对象为动物，包括坐骨神经的松散结扎／慢性挤压、部分坐骨神经紧密结扎、腰L5-6脊神经根切断术和SNI等研究内容。重点选取与SNI研究相关的文献。排除标准：综述性论文。资料提炼：共收集到85篇相关文献，其中与SNI直接相关的文献8篇，间接相关的文献25篇，排除重复的12篇，共21篇用于资料的综述。资料综合：对选取的文献进行阅读、归纳及综合。综合的结果显示．SNI模型的手术易于操作可重复性好，术后动物的行为表现能够模拟部分神经病理性痛的特点且持续时间长，不同镇痛药物对SNI诱导的神经病理性痛行为反应作用不同。结论：SNI模型具与其他病理性痛模型不同的特点，是研究神经病理性痛机制的又一个新模型。     

Wnt/β-catenin信号参与慢性痛引起的小鼠海马神经元发生减少

目的:研究小鼠慢性痛模型中海马神经元发生减弱的现象,并从Wnt/β-catenin信号的角度探索相关机制,以及过表达β-catenin对慢性痛小鼠学习记忆能力的影响。方法:采用选择性坐骨神经损伤(spared nerve injury,SNI)模型,利用Brd U/DCX免疫荧光双标研究神经元发生;采用Wnt信号报告基因Topgal小鼠研究Wnt信号的改变;利用条件性过表达β-catenin的Nestin-Cre ER:β-catenin EX3~(loxp/+)小鼠研究过度激活Wnt信号对慢性痛小鼠海马神经元发生及学习记忆的影响;利用Morris水迷宫评估小鼠的空间学习记忆能力。结果:SNI后小鼠的机械和热痛阈显著下降,持续至少3周。Brd U/DCX免疫荧光双标显示SNI小鼠海马神经元发生明显减弱。Wnt信号报告基因β-gal在海马神经干细胞的表达降低。在SNI小鼠的成年神经干细胞中过表达β-catenin可显著促进海马神经元发生,并增强小鼠的空间记忆能力。结论:Wnt/β-catenin信号参与介导慢性痛引起的海马神经元发生减弱,增强Wnt信号可改善SNI小鼠海马的神经元发生及其学习记忆能力。     

小鼠脊髓神经元内脑啡肽与1型囊泡膜谷氨酸转运体的共存

目的:以PPE-GFP转基因小鼠为研究工具,观察绿色荧光蛋白(GFP)阳性的脑啡肽(ENK)能神经元与1型囊泡膜谷氨酸转运体(VGLUT1)在脊髓的分布及共存情况。方法:利用免疫组织化学和原位杂交双标染色的方法。结果:GFP标记的ENK能神经元主要位于脊髓背角,在I-ⅡI层最为密集,背角深层内侧部及中央管周围呈中等密度分布,散在分布于前角。VGLUT1 mRNA阳性细胞广泛分布在脊髓各层。GFP/VGLUT1双标细胞主要分布在脊髓背角,I-ⅡI层双标细胞占GFP阳性细胞的22.95±1.10%,占VGLUT1阳性细胞的27.91±2.42%;IV-VI层中21.49±4.99%GFP阳性细胞表达VGLUT1,10.35±2.81%VGLUT1阳性细胞表达GFP;前角双标细胞占VGLUT1阳性细胞的1.07±0.37%,占GFP阳性细胞的32.08±13.15%。结论:双标结果表明脊髓内部分ENK能神经元表达1型囊泡膜谷氨酸转运体,推测ENK能神经元可能通过调控谷氨酸的释放发挥感觉信息调控作用。     

蛛网膜下腔出血致脑血管痉挛兔海马组织蛋白激酶B磷酸化的时相变化

目的:观察蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛模型中海马组织内蛋白激酶B及其磷酸化的时相变化特点,初步探讨脑血管痉挛导致缺血性脑损伤时的神经保护机制。方法:实验于2004-04/08在第四军医大学基础医学部解剖学教研室实验室进行。选择健康新西兰白兔12只,随机分为两组:蛛网膜下腔出血组(n=9)和正常对照组(n=3)。建立家兔蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的实验模型,用Westernblot方法检测兔蛛网膜下腔出血后不同时间点海马组织内蛋白激酶B和磷酸化蛋白激酶B蛋白的表达变化。结果:12只动物均进入结果分析,Westernblot结果显示,在正常兔海马组织中检测到了蛋白激酶B,磷酸化蛋白激酶B和actin蛋白的表达,其中蛋白激酶B和actin有较高的表达水平,而磷酸化蛋白激酶B仅微弱表达。蛋白激酶B在蛛网膜下腔出血组各时间点的海马组织内的表达保持相对恒定。磷酸化蛋白激酶B的表达水平在蛛网膜下腔出血组1d时即明显升高(P<0.05),4d时达高峰,7d时仍维持较高水平,与正常组比差异显著(P<0.01),分别是其在正常组海马中表达水平的2.1,4.4和3.1倍。结论:蛋白激酶B信号通路的激活与海马缺血损伤的程度在时程上有伴行关系,从而发挥了对蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛所造成的海马神经元损伤的神经保护作用。     

大鼠神经系统内谷氨酸受体2／3亚型的定位分布

用特异性抗体的免疫细胞化学染色技术观察谷氨酸受体 2 / 3亚型 (GluR2 / 3)在大鼠神经系统的定位分布。结果显示GluR2 / 3样阳性神经元主要分布于大脑皮质、尾壳核、苍白球、隔核、海马CA1～CA4区、齿状回、乳头体、小脑Purkinje细胞层、动眼神经核、滑车神经核、臂旁核、三叉神经运动核、上橄榄复合体、三叉神经脊束核、面神经核、疑核、迷走神经背运动核、舌下神经核、楔束核、薄束核、延髓和脊髓背角I～Ⅱ层、背根节、三叉神经节等。本研究结果表明GluR2 / 3样阳性结构广泛分布于大鼠神经系统 ,为Glu发挥兴奋效应提供了作用位点。     

大鼠脑干中缝核群EP3受体阳性神经元向脊髓背角的投射

目的 观察大鼠脑干中缝核群前列腺素E受体EP3亚型（EP3R）阳性神经元向脊髓背角的投射。方法 荧光金（FG）逆行追踪和EP3R免疫荧光组织化学染色相结合的双标记方法。结果 将FG注入一侧脊髓背角浅层，FG逆标神经元主要见于中脑导水管周围灰质（PAG）、脑干中缝核群、巨细胞网状核α部（GiA)、延髓网状结构、外侧网状核、三叉神经脊束核尾侧亚核和孤束核。EP3R阳性神经元主要见于PAG、脑干中缝核群和网状结构。FG标记并呈EP3R阳性的双标神经元主要见于脑干中缝核群和GiA。结论 脑干中缝核群和GiA向脊髓背色投射的部分神经元含EP3R，前列腺素E2可能通过EP3R对这些下行投射神经元发挥调控作用。     

神经病理性痛条件下前额叶皮质内代谢型谷氨酸受体第5亚型的表达及分布变化

目的:观察慢性神经病理性痛状态下内侧前额叶皮质(medial prefrontal cortex,mPFC)内代谢型谷氨酸受体第5亚型(metabotropic glutamate receptor 5,mGluR5)表达与疼痛及其伴随情绪反应之间的关系。方法:采用雄性SD(Sprague Dawley)大鼠40只,随机分为5组(正常组和手术后1、3、5、7 d组)。应用免疫荧光组织化学染色、Western Blot和行为学方法,观察腰5脊神经结扎(L5 spinal nerve ligation,SNL)术后1、3、5、7 d大鼠的情绪反应和mPFC内mGluR5的表达情况。结果:大鼠神经病理痛模型制作成功后,其50%机械性缩足阈值(paw withdrawal threshold,PWT)显著下降,且伴有焦虑样行为。免疫荧光组织化学染色结果显示:术后7 d大鼠mPFC内mGluR5在细胞内的分布发生改变,与正常组大鼠相比,mGluR5被募集到细胞突起中。Western Blot结果显示:术后7 d,mPFC内mGluR5的表达量减少,与正常对照组相比,有统计学差异(P0.05)。结论:慢性神经病理性痛伴随焦虑样症状可导致大鼠mPFC内mGluR5的表达减少,分布发生改变。     

大鼠神经系统内5-羟色胺_(1A)受体亚型的定位分布(英文)

应用免疫组织化学技术观察了大鼠神经系统内 5 -羟色胺 1A受体亚型 ( 5 -HT1 AR)免疫阳性结构的分布。结果显示 :5 -HT1 AR免疫阳性结构主要分布于梨状皮质、隔核、丘脑腹后核、丘脑网状核、杏仁基外侧核、Purkinje细胞层、红核、面神经核、斜方体核等 ;在海马、额叶皮质、丘脑背内侧核、脚间核、三叉神经中脑核、中缝背核、三叉神经脊束核、脊髓背角浅层、背根神经节和三叉神经等结构内有中等强度的分布 ;在嗅球、尾壳核、苍白球、斜角带核、终纹床核、缰核、黑质、上橄榄等部位有弱的分布。本文的结果提示 5 -HT1 AR阳性结构广泛地分布在大鼠神经系统 ,它们可能介导 5 -HT在神经系统中的多种生理功能     

面口部炎症刺激增强CGRP mRNA、PPTA mRNA及NOS在大鼠三叉神经节中的表达

为了研究ＣＧＲＰｍＲＮＡ、ＰＰＴＡｍＲＮＡ和ＮＯＳ在伤害性刺激后大鼠ＴＧ中合成和表达的变化，将４％鹿角菜胶（ＣＡＲ）溶液注射到大鼠一侧口周皮下作为伤害性刺激模型，用ＮＡＤＰＨ－ｄ组织化学法结合ＣＧＲＰ、ＰＰＴＡｍＲＮＡｓ原位杂交组织化学法对此进行了观察。结果显示：对照组大鼠ＴＧ中约有３２．２％、１６．２％和１０％的神经元分别呈ＣＧＲＰｍＲＮＡ、ＰＰＴＡｍＲＮＡ和ＮＯＳ阳性。ＣＡＲ刺激后，在刺激侧ＴＧ、ＣＧＲＰｍＲＮＡ、ＰＰＴＡｍＲＮＡ和ＮＯＳ阳性神经元的数量均增多，其阳性率分别达到了３８．６％、２２．８％和１４．２％。ＴＧ中约有６．８％和７．３％的神经元同时呈ＮＯＳ和ＣＧＲＰｍＲＮＡ或ＮＯＳ和ＰＰＴＡｍＲＮＡ阳性，ＣＡＲ刺激使得两种双标神经元的数量也明显增多，双标细胞占ＴＧ细胞总数的百分比分别达到了１１．０％和１０．９％，而且刺激后增加的ＮＯＳ阳性神经元主要为双标神经元。上述结果提示ＣＧＲＰｍＲＮＡ、ＰＰＴＡｍＲＮＡ和ＮＯＳ阳性神经元，尤其是共存神经元可能在面口部伤害性信息的传递和调节中起重要作用，伤害性刺激所诱导的ＮＯＳ合成的增加与ＣＧＲＰｍＲＮＡ和ＰＰＴＡｍＲＮＡ表达的增强可能有密切的关系。     

创伤后应激障碍小鼠海马恐惧记忆消退相关神经元的异常激活

目的:分析创伤后应激障碍(PTSD)小鼠恐惧记忆消退过程中海马各亚区神经元的激活及差异。方法:使用两种即刻早期基因蛋白标记策略,对PTSD小鼠条件性恐惧记忆消退相关神经元进行标记。第一组利用免疫荧光染色技术,使用野生型小鼠对海马区域神经元Arc蛋白进行标记并观察;第二组使用Fos-CreER^T2;Ai9转基因小鼠,在恐惧记忆消退前23 h注射他莫昔芬诱导荧光蛋白表达,标记相关神经元并观察。通过对标记的海马神经元数量及树突分支结构进行分析,对比海马神经元激活水平和神经元树突的可塑性变化。结果:两组实验观察发现Arc和Fos阳性神经元主要分布在背侧海马,其中Arc蛋白显色在CA3和DG亚区呈富集分布,CA1、CA2亚区的分布则较为散在,而Fos阳性神经元在海马DG亚区表达富集,散在分布于CA1、CA2和CA3亚区。与对照组对比,PTSD组海马各亚区表达Arc蛋白神经元数目没有明显差异;而PTSD组海马中CA1、CA3、DG亚区的Fos阳性神经元数量显著增加(P<0.01)。利用Fos-CreER^T2;Ai9小鼠对两组小鼠海马区域神经元树突分...