团头鲂微卫星标记的快速制备

采用磁珠富集法与放射性杂交相结合开发团头鲂（Megalobrama amblycephala）基因组微卫星资源。以团头鲂基因组DNA为材料，经Sau 3AⅠ限制性内切酶消化后，选取400～900bp的片段进行PCR全基因组扩增，并利用生物素标记的（CA）15探针进行微卫星片段的富集。将得到的片段与T载体连接后转入DH5α大肠杆菌中，然后利用γ-32P标记的放射性同位素探针进行第二轮杂交。结果表明，共获得微卫星基因组文库2000个菌，杂交前菌落PCR检测阳性克隆率为50％；杂交后得到的阳性克隆为230个，占11．5％。从得到的230个阳性克隆中挑出120个进行测序，有94个克隆含有重复次数大于5次的微卫星序列，其中46个（48．94％）有随机侧翼区，可以设计引物；14个缺乏足够的侧翼序列。在得到的微卫星序列中，重复单元除CA／GT外，还观察到CT、AG、CG、CAA、CTCA等重复单元。在单一型标记中，完美础占53．15％，非完美型为37．84％；混合型标记占9．01％。另外，微卫星重复次数主要集中在5-30次，占75．68％。本研究旨在对团头鲂基因组资源的开发利用起到一定的促进作用，并为团头鲂养殖品系的优化、遗传多样性的检测及遗传图谱的构建等奠定基础。     

鲤野生和养殖群体遗传多样性分析中的微卫星(SSLP)分析

采用7个微卫星标记,研究了鲤(Cyprinus carpio)、高寒鲤和荷包红鲤抗寒品系(Cyprinus carpio var.wananensis)三个群体的遗传变异。结果显示,鲤野生群体、高寒鲤、荷包红鲤抗寒品系的平均杂合度分别为0.276、0.147、0.0952,平均无偏倚杂合度期望值为0.431、0.355、0.305。鲤野生群体的杂合度明显高于其他两个养殖品种,说明其较其他两个养殖品种的遗传多样性丰富。     

应用荧光标记通用引物检测鲤鱼(Cyprinus Carpio)微卫星基因型

应用荧光标记通用引物检测微卫星是一种省成本、省时间、高效精确的基因型检测方法。本文介绍了该方法的基本原理和操作流程,并首次应用此方法检测鲤微卫星标记的基因型。结果显示,除位点HLJ179未检测到有效数据外,其它14个位点都采集到相应的基因型。该方法在鲤微卫星基因分型上的成功应用,为今后鲤大规模连锁分析提供了一种更经济有效的检测方法。     

瓦氏雅罗鱼达里湖群体和乌苏里江群体的遗传多样性和遗传结构分析

选用5个瓦氏雅罗鱼(Leuciscus waleckii Dybowski)微卫星标记和13个草鱼微卫星标记,对分别采自内蒙古境内的达里湖和乌苏里江抚远江段的各15尾野生瓦氏雅罗鱼个体进行STR-PCR分析。结果显示,18个微卫星标记共检测到111个等位基因,平均每个基因座扩增得到6.1667个等位基因,观测杂合度(H o)0.1000～0.9333,平均为0.5315;期望杂合度(H e)0.0966～0.9328,平均为0.6298;多态信息含量(PIC)0.0905～0.9113,平均为0.5774;乌苏里江群体的平均等位基因数和平均观测杂合度分别为5.5556和0.5778,达里湖群体的平均等位基因数和平均观测杂合度均低于乌苏里江群体的平均等位基因数和平均观测杂合度,分别为4.3889和0.4852。2个群体间的遗传距离(D c)为0.2550。个体聚类结果显示,达里湖雅罗鱼所有个体聚为一簇,乌苏里江雅罗鱼所有个体聚为一簇。群体间的遗传分化指数(F st)为0.0855,数值介于0.05～0.15,N m值为2.6749,表明这2个群体处于中等分化,存在一定程度的基因交流。对2个群体的基因型进行了Hardy-Weinberg平衡的卡方检验,结果表明两群体均在一定程度上偏离了平衡。     

转大麻哈鱼生长激素基因鲤食用安全——生殖毒性分析

以转大麻哈鱼生长激素基因鲤和普通鲤鱼肉(受试物)作为小鼠的饲料基础蛋白成分,以10%、5%、2.5%的比例掺入饲料喂饲小鼠,并以常规大鼠饲料为阴性对照,采用二代繁殖试验法观察受试物对实验动物生殖周期全过程的影响,检测转基因鲤作为食物对实验动物小鼠生殖过程的毒性作用.结果表明,对各代各剂量组试验小鼠全部生殖毒性指标的检测...     

微卫星分析四个大黄鱼群体的遗传多样性

为保护人工养殖大黄鱼的种质资源,用15对微卫星标记对来自浙江沿海地区的四个大黄鱼养殖群体共171个个体进行了遗传多样性分析.结果显示,这些标记在四个群体中均表现出丰富的多态性;共检测到206个等位基因;各基因座观测等位基因数7～23个,平均等位基因数13.73,大小在88～318bp之间.四个群体的平均观测杂和度(Ho)为0.5981～0.6893,期望杂和度(He)为0.7319～0.7944,多态信息含量(PIC)0.7138～0.7836,表明四个养殖群体在所检测位点均具有较好的多态性.对遗传距离的计算结果表明闵粤东群体与反交群体较近,聚类结果中首先聚到一起.本研究首次选择微卫星标记评估人共选育大黄鱼群体的遗传多样性,并采用高精度的377 DNA测序仪进行检测,将对大黄鱼的种质资源保护提供科学依据.     

瓦氏雅罗鱼slc26基因家族的鉴定、表达与进化分析

为探究瓦氏雅罗鱼(Leuciscus waleckii) slc26基因家族在Cl^–、HCO₃^–等阴离子转运过程中的作用机制,基于瓦氏雅罗鱼基因组及转录组数据,结合生物信息学方法对slc26家族进行了基因鉴定、表达及进化分析。利用同源比对的方法,从瓦氏雅罗鱼基因组中共鉴定到10个slc26基因家族成员,分布在瓦氏雅罗鱼的6条染色体上,分别命名为slc26a1、slc26a2、slc26a3.1、slc26a3.2、slc26a4、slc26a5、slc26a6、slc26a6l、slc26a10和slc26a611。系统发育和模体分析显示,slc26a3.1、slc26a3.2和slc26a4同源性较高,slc26a5、slc26a6和slc26a6l同源性较高,slc26a1、slc26a2和slc26a10同源性较高,而slc26a11与其他9个基因的同源性相对较低,单独聚类;RNA-seq和实时荧光定量分析显示,50 mmol/L Na HCO₃碱度胁迫下瓦氏雅罗鱼slc26家族不同成员呈现出...     

瓦氏雅罗鱼鳃细胞系的建立及其耐碱生长特性初探

瓦氏雅罗鱼（Leuciscus waleckii）作为盐碱水域中生存的自然优势种，是耐盐碱渗透压调节机制研究的理想模型。为进一步探究其耐盐碱离子调节机制，本研究采用胰蛋白酶消化法从中建立了鳃细胞系（LWG细胞系），并进行耐受实验以对其在盐碱生境中的生长特性进行论证，确定了该类细胞原代及传代培养的最优培育条件，意在构建耐盐碱适应条件下模式生物细胞系作为后续研究的稳定实验材料。结果表明：瓦氏雅罗鱼鳃细胞原代培养采用含有10% FBS(fetal bovine serum,胎牛血清)的DMEM培养基（Dulbecco''s modified eagle medium）可获得良好稳定的培养效果，细胞生长明显优于Leibovitz''s L-15培养基(Cell Culture Medium IscoveL-15)和MEM培养基(Minimum Eagle''s medium)；启动原代培养的36-72 h鳃细胞生长代谢旺盛；0.25%胰蛋白酶消化法适合瓦氏雅罗鱼鳃细胞的分离；鳃细胞增殖规律符合经典“S”生长曲线；现已证实，环境水域变化时鳃细胞将启动渗透压胁迫应答机制，以缓解盐碱离子对鱼体造成的损伤。本研究对LWG细胞系进行梯度耐受实验并检测其细胞活性和功能后发现：瓦氏雅罗鱼鳃细胞耐受时间为3 h，耐受浓度为25~50 mmol/L NaHCO3时为最佳条件；高浓度盐碱胁迫条件会导致细胞产生凋亡现象。LWG细胞可耐受25~50 mmol/L NaHCO3高浓度盐碱生境，且该生存条件对其功能及活性皆可产生一定程度上的影响。由此推断，LWG细胞具有较强的盐碱渗透压耐受性，该细胞系的建立将有利于对瓦氏雅罗鱼耐盐碱机制的研究深入至细胞学领域，并对其盐碱胁迫渗透压应答机制和相关基因功能的研究提供实验材料。     

绥芬河三块鱼属“银滩头”洄游群体的分子鉴定

绥芬河三块鱼属洄游群体中“银滩头”的分类地位一直存在争议。利用DNA条形码COⅠ和基因标记（fst和mitfa）分析相结合的方法，对采自我国绥芬河的珠星三块鱼（Tribolodon hakonensis，40尾）、三块鱼（T.brandtii，38尾）和“银滩头”（34尾）及采自日本宇曾利山湖的珠星三块鱼（3尾），共计115尾个体进行了种质鉴定。线粒体COⅠ基因扩增结果显示，共获得单倍型11种，其中，珠星三块鱼独享5种，三块鱼独享5种，珠星三块鱼日本群体独享1种（Hap6），“银滩头”群体与珠星三块鱼共享1种，与三块鱼共享3种，聚类分析不支持“银滩头”群体为一个独立种。基因标记扩增结果显示，“银滩头”群体中兼具珠星三块鱼和三块鱼两种基因型。结合以上两种分析结果发现“银滩头”中存在珠星三块鱼与三块鱼的杂交个体。明确了“银滩头”群体的分类地位，即“银滩头”是由珠星三块鱼、三块鱼及二者的杂交个体组成的一个混合群体。研究结果为三块鱼属鱼类的分类、种质资源保护和野外增殖放流提供了科学依据。