系统性硬皮病表观遗传学发病机制的进展

表观遗传学是研究DNA序列未发生改变的情况下,基因表达的可遗传变异的一门学科,其涉及的机制主要包括DNA甲基化、组蛋白修饰和MicroRNA等.系统性硬皮病是一种累及皮肤及多种器官的自身免疫性结缔组织疾病,其发病机制复杂.近年来,有关系统性硬皮病表观遗传学机制的研究取得一定进展,特别是DNA甲基化、组蛋白修饰参与系统性硬皮病自身抗体的产生和胶原合成异常,如有研究发现,患者CD4+T细胞基因调控序列甲基化水平的降低导致CD70和CD40L表达升高,从而参与系统性硬皮病发病;Flil基因启动子区域组蛋白的异常修饰导致Fli1表达下降,胶原合成增加.基因低甲基化、组蛋白低乙酰化和MicroRNA修饰可能会成为系统性硬皮病早期生物学标记和治疗目标.     

肌钙蛋白T与肿瘤坏死因子α对脑梗死诊断与预后判断的临床价值

目的 评价肌钙蛋白T(cTnT)与肿瘤坏死因子α(TNF-α)联合检测对脑梗死诊断与预后判定的临床价值。方法 纳入2011年2月~2015年2月我院诊断为脑梗死的患者168例为研究对象(研究组),根据中国脑卒中临床神经功能缺损程度评分量表评分再分为3个亚组:轻型组34例、中型组68例和重型组66例; 对照组为同期来我院进行健康体检的正常人66例。比较对照组与研究组入院时的血压、血脂、cTnT及TNF-α水平; 同时比较轻型组、中型组和重型组发病后24h、发病第5d的cTnT及TNF-α水平。结果 1对照组与研究组入院时收缩压、舒张压、胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白比较,差异无统计学意义(t为0.67、0.22、0.14、0.05和0.63,均P>0.05)。2对照组与研究组cTnT及TNF-α水平差异有统计学意义(t分别为6.34、6.59,均P<0.05)。3发病后24h轻型组、中型组与重型组间cTnT及TNF-α水平比较有差异(F分别为8.56、6.98,均P<0.05); 发病后第5d轻型组、中型组与重型组间cTnT及TNF-α水平亦有差异(F分别为7.36、6.25,均P<0.05)。发病后第5d轻型组、中型组和重型组cTnT较发病24h时均有明显下降,差异有统计学意义(t分别为5.82、7.25、6.21,均P<0.05),发病后第5d轻型组、中型组和重型组TNF-α较发病24h时有明显下降,差异亦有统计学意义(t分别为7.01、6.93、8.43,均P<0.05)。结论 脑梗死患者血清cTnT和TNF-α明显高于健康正常人群,而且随着疾病治疗的好转,cTnT和TNF-α呈逐步下降趋势。因此,cTnT与TNF-α联合检测对脑梗死的诊断与预后判断具有重要的临床意义。     

栀子苷改善大鼠非酒精性脂肪性肝病游离脂肪酸代谢的机制研究

观察栀子苷改善非酒精性脂肪性肝病的效果,从游离脂肪酸探讨栀子苷调节非酒精性脂肪性肝病的作用机制。健康雄性Wistar大鼠40只,随机分为4组:正常组、模型组、栀子苷组和血脂康组,每组大鼠10只,正常组大鼠给予正常大鼠饲料喂养,其余3组大鼠均采用高脂饲料喂养以诱导非酒精性脂肪性肝病,造模时间为8周,从第5周起至第8周末,栀子苷组和血脂康组分别灌服相应的药物。记录大鼠体重、肝湿重、脂肪质量;用相应方法检测肝组织TG,FFA,FAS,AMPK,ACCase及Malonyl-Co A含量,血清CHO,LDL-C的含量,血清AST,ALT的活性;观察肝脏组织肉眼及病理变化(HE染色法)。结果显示,与正常组相比,模型组大鼠的体重;肝湿重;脂肪重;血清CHO,LDL-C,ALT,AST;肝组织TG,FFA,FAS,ACCase及Malonyl-Co A含量皆显著升高(P0.01);肝组织AMPK活性显著降低(P0.01),肝组织肉眼外观及病理切片脂肪变性明显,并出现炎症损伤;与模型组相比,栀子苷组大鼠体重、脂肪质量、肝组织FFA含量、血清ALT,AST活性均显著降低(P0.01),肝湿重,肝组织TG,FAS,ACCase及Malonyl-Co A含量明显降低(P0.05),肝组织AMPK活性明显增多(P0.05),肝脏肉眼外观及病理学表现均有所改善;与模型组相比,血脂康组大鼠的肝湿重、脂肪质量、肝组织TG,FFA和血清LDL-C水平明显降低(P0.05);与血脂康组相比,栀子苷组大鼠的体重、脂肪质量、肝组织FFA含量均显著降低(P0.01),其他方面无明显差异。结果表明,栀子苷具有显著的改善高脂饮食诱导的大鼠非酒精性脂肪性肝病的药理效应;其改善大鼠非酒精性脂肪性肝病的游离脂肪酸代谢是通过调节"AMPK-ACCase-Malonyl-Co A-FFA"轴来实现的。     

双清平化方对代谢综合征大鼠骨骼肌自噬通路蛋白表达的影响

目的 观察双清平化方对代谢综合征大鼠Lee''s指数、血糖、血脂及骨骼肌哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、自噬效应蛋白1(Beclin1)、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein1 light chain 3,LC3)蛋白表达的影响,探讨其改善糖脂代谢的作用机制。方法 大鼠给予高脂饲料加10%果糖水溶液喂养,并联合应用N-硝基-L-精氨酸甲酯(N-nitro-L-arginine methyl ester,L-NAME)及链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导代谢综合征模型。代谢综合征大鼠给予双清平化方或二甲双胍干预8周,实验前后定期测量大鼠体质量、体长、腹围、血压、糖耐量、糖化血红蛋白(glycated hemoglobin,GHb)、胰岛素(insulin,INS)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C),计算葡萄糖曲线下面积(OGTT-AUC)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);采用苏木素-伊红(HE)染色观察骨骼肌组织病理形态学变化;采用Masson染色观察骨骼肌纤维形态变化;采用免疫组化法检测骨骼肌组织中LC3蛋白表达;采用Western blotting检测骨骼肌组织中mTOR、Beclin1和LC3蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、餐后2 h血糖(2 h postprandial glucose,PG2h)、OGTT-AUC、HOMA-IR、INS、GHb、TC、TG及LDL-C水平均显著升高(P<0.01),HDL-C水平显著降低(P<0.01);骨骼肌组织中mTOR蛋白表达显著上调(P<0.01),Beclin1、LC3蛋白表达显著下调(P<0.01)。与模型组比较,双清平化方组FBG、PG2h、OGTT-AUC、HOMA-IR、INS、GHb、TC、TG及LDL-C水平均显著降低(P<0.05、0.01),HDL-C水平显著升高(P<0.01);骨骼肌组织中mTOR蛋白表达水平显著上调(P<0.01),Beclin1和LC3蛋白表达显著下调(P<0.01)。结论 双清平化方可以改善代谢综合征大鼠胰岛素抵抗,改善糖脂代谢水平,抑制骨骼肌病理变化,其作用机制可能与调节骨骼肌自噬,激活骨骼肌组织自噬通路中mTOR、Beclin1、LC3蛋白表达有关。     

系统性硬皮病CD4~+ T细胞中CD70 mRNA及蛋白表达水平的观察

目的:研究系统性硬皮病(SSc)患者外周血CD4+ T细胞中CD70的表达水平。方法:应用密度梯度离心法分离17例SSc患者(女性12例,男性5例)和13例对照者(女性8例,男性5例)的外周血单个核细胞,磁珠分选CD4+ T细胞。RT-PCR检测CD4+ T细胞中CD70 mRNA的表达水平;流式细胞术检测CD70蛋白在CD4+ T细胞的表达水平。结果:与对照组相比,SSc患者CD4+ T细胞中CD70mRNA和CD70蛋白表达均明显升高(P=0.001;P=0.007)。结论:CD70在SSc的发生发展中可能起着重要作用。     

大剂量丙种球蛋白治疗婴儿巨细胞病毒感染性肝炎的临床分析

目的:观察大剂量丙种球蛋白治疗婴儿巨细胞病毒(CMV)感染性肝炎的疗效。方法:将60例CMV感染患儿随机分成两组。对照组(n=28例)予常规保肝及更昔洛韦5mg/kg静脉滴注治疗。治疗组(n=32例)在常规治疗基础上,加用大剂量丙种球蛋白400mg/kg,1次/d,连用5d。结果:治疗组血清总胆红素、丙氨酸氨基转移酶、CMV-IgM转阴率均明显优于对照组。治疗组总有效率为84.3%,对照组总有效率71.4%,两组比较差异有显著性意义(P<0.05)。结论:联合大剂量丙种球蛋白治疗先天性CMV感染肝炎疗效较好,值得临床推广。     

补肾益气方药对心衰大鼠胰岛素抵抗及PKB、脂联素蛋白表达的影响＊

目的 探讨补肾益气方药对充血性心力衰竭大鼠胰岛素抵抗及PKB、脂联素蛋白表达的影响。方法 选用健康雄性Wistar大鼠60只，对照组10只，其余50只均用阿霉素腹腔注射，建立充血性心力衰竭大鼠模型。造模成功后将Wistar雄性大鼠随机分为模型组、卡托普利组（25 mg/kg·d）、补肾益气方药低剂量组（4 g/kg·d）、中剂量组（6 g/kg·d）、高剂量组（8 g/kg·d）。葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖（Fasting Blood-Glucose, FBG）；放射性免疫法测定空腹胰岛素（Fasting inshulin, FIS），计算胰岛素敏感性指数（Insulin Sensitivity Index，ISI）；Western Blot 技术检测PKB、脂联素蛋白表达，RT-PCR 方法检测PKB、脂联素的mRNA表达。结果 与空白对照组相比，模型组FBG、FIS显著增加（P < 0.01），ISI显著降低（P < 0.01）；与模型组比较，补肾益气方药高剂量组FBG显著降低（P < 0.05），卡托普利组及补肾益气方药各剂量组FIS明显降低（P < 0.05），卡托普利组及补肾益气方药中高剂量组ISI显著升高（P < 0.05）。与空白对照组相比，模型组心脏、肝脏与骨骼肌组织PKB、脂联素mRNA与蛋白表达均显著下降（P < 0.01）；与模型组比较，卡托普利组及补肾益气方药各组可呈剂量依赖性显著增加PKB、脂联素mRNA与蛋白表达（P < 0.05）。结论 补肾益气方药可能通过增加PKB、脂联素基因转录与及其蛋白表达，改善充血性心衰大鼠胰岛素抵抗，保护心肌细胞，改善心功能。     

白癜风皮损旁黑素细胞自噬相关蛋白表达的研究

目的通过比较体外培养的白癜风黑素细胞与正常黑素细胞中自噬标志物微管相关蛋白轻链3（LC3II/I）、自噬相关蛋白p62、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）和自噬相关基因5（Atg5）的表达差异,分析其在白癜风发病中的可能作用。方法分离并原代培养来自于泛发型白癜风患者皮损旁皮肤的黑素细胞（白癜风黑素细胞组）以及正常志愿者皮肤的黑素细胞（正常对照组）,采用免疫印迹法分别检测不同来源黑素细胞中自噬标志物LC3II/I、自噬相关蛋白p62、mTOR和Atg5的表达,同时以改良的多巴氧化法测定细胞中的酪氨酸酶活性。结果LC3II/I及Atg5的表达在白癜风黑素细胞组中明显高于正常对照组（t=10.36、13.01,均P＜0.01）,而p62、mTOR蛋白水平及酪氨酸酶活性在白癜风黑素细胞组中明显低于正常对照组（t=5.12、7.22、36.51,均P＜0.01）。结论体外培养的白癜风黑素细胞存在自噬的活化及上调并伴有黑素细胞黑素合成功能的下降,提示自噬可能与白癜风的发病有关。