美姑大风顶自然保护区连香树种群年龄结构研究

通过对连香树种群的年龄结构、大小结构进行分析和比较,得出美姑大风顶连香树种群中Ⅳ 级以上的苗最多，达到整体的65.5％，其中Ⅷ级苗占了17.2％；而Ⅱ ~ Ⅲ级苗占了35.5％，其中Ⅱ级苗 占了13.8％，Ⅰ级苗占了0％。此外本次调查中发现美姑大风顶连香树自然种群中个体较少，仅发现 29 株。说明大风顶连香树种群年龄结构呈现为倒金字塔型，其种群年龄结构处于衰退阶段。因此,加 强大风顶连香树种群的保护是当务之急。     

‘琼引1号’菠萝蜜高效组培增殖技术

以‘琼引1号’菠萝蜜长约0.50 cm单芽为外植体材料,通过正交试验和单因素试验,探讨了无机N总量、硝态氮与铵态氮比值、6-BA浓度和AgNO_3对菠萝蜜增殖效果的影响。结果表明,无机N总量为26.67 mmol·L~(-1),硝态氮与铵态氮比值为2,6-BA浓度为3 mg·L~(-1)时,外植体增殖效果和状态最佳,1月内增殖系数可达4.21;培养基中继续添加0.50～1.00 mg·L~(-1)的AgNO_3,能显著提高增殖效果和改善外植体长势,1月内增殖系数达6.15,外植体新叶嫩绿且生长势强。试验初步建立了菠萝蜜高效组培增殖技术体系。     

原核表达番木瓜环斑病毒NIa-Pro及其双重酶活鉴定

番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)编码的核内涵体蛋白a蛋白酶(Nuclear inclusion body a proteinase,NIa-Pro)是一种多功能病毒非结构蛋白,在病毒侵染宿主及病毒与宿主互作中起着重要作用。本研究利用以麦芽糖结合蛋白(MBP)为融合表达框架的原核表达系统构建了表达NIa-Pro的重组载体pMAL-c5xNP,并转化大肠杆菌,经IPTG诱导和Ni~(2+)-NTA-琼脂糖亲和层析纯化获得了可溶的重组融合蛋白MBP-NIa(N端和C端分别融合MBP和His标签),然后利用蛋白酶Factor Xa切去重组融合蛋白中的MBP,再通过直链淀粉树脂亲和层析纯化获得了可溶的重组蛋白NIa-Pro。活性检测结果表明,重组蛋白PRSV-NIa-Pro具有非特异的双链DNA酶和特异的蛋白酶双重活性。     

番木瓜蛋氨酸亚砜还原酶B1(PaMsrB1)的真核表达及其活性检测

在生物和非生物逆境下,植物蛋氨酸亚砜还原酶B1(methionine sulfoxide reductase B1,MsrB1)具有修复叶绿体中被氧化蛋白的功能。本研究首次利用毕赤酵母真核表达系统,胞外分泌表达了番木瓜MsrB1(PaMsrB1)重组蛋白,并通过Ni2+-NTA-琼脂糖亲和层析柱获得了纯化蛋白。Western blot结果显示,在预期大小(22.7 kD)出现特异性条带,表明表达纯化的蛋白为PaMsrB1重组蛋白。通过H2O2氧化胁迫和薄层层析实验,从体内和体外证明了获得的重组PaMsrB1具有抗氧化能力和还原酶活性。研究结果可为进一步研究PaMsrB1在番木瓜叶绿体中抗氧化机制奠定了基础。     

番木瓜环斑病毒CP基因dsRNA原核表达载体的快速构建

重点介绍了一种快速构建dsRNA原核表达载体的方法。以番木瓜环斑病毒外壳蛋白基因（PRSV-CP）3＇端-279 bp保守区段为基础,通过OZ-LIC法构建861 bp,432 bp和279 bp 3种不同长度的发卡结构,再通过XhoⅠ和ClaⅠ双酶切,将其连接到pSP73原核表达载体上,构建成PRSV-CP基因dsR...     

3个番木瓜品种组培苗在云南元谋地区的种植试验

对种植在云南元谋地区的青优、青皮和苏鲁3个番木瓜品种的组培苗进行生长性状的测定及病虫害发生情况的调查,获得了有价值的试验数据及结果.不仅有效地验证了组培苗的适应性和耐病性,而且为扩大推广种植番木瓜组培苗规模以及今后的抗病育种工作奠定了理论基础.     

PRSV运动相关病毒蛋白的Sos恢复系统诱饵载体构建及白激活效应检测

为研究与番木瓜环斑病毒运动相关的病毒蛋白（CP、HC-Pro、CI）互作的寄主因子,构建以Sos恢复系统为原理的胞质酵母双杂交系统的3个病毒蛋白诱饵载体,并检测其自激活作用来验证是否适用于后续的文库筛选。通过RT-PCR从番木瓜环斑病毒海南分离物中扩增出这3个病毒蛋白的片段,按正确方向将目标片段分别插入诱饵载体pSos中,并将重组质粒导入酵母温度敏感酵母菌株cdc25H,检测其表达产物对酵母Sos恢复系统Ras信号通路的激活作用而产生的细胞温敏特性影响。结果表明,这3个含番木瓜环斑病毒运动相关的病毒蛋白的诱饵载体构建正确,对酵母菌株cdc25H的Sos恢复系统无激活作用,激活试验为阴性。     

不同品种柱花草中单宁含量的比较

采用F-D法测定10个柱花草品种营养期单宁的含量。结果发现,所测10个柱花草品种中单宁含量均小于1%,907柱花草中单宁含量最高,为0.853%,CIAT11362柱花草中单宁最低,为0.405%。实验数据在单宁含量方面可为以柱花草为主的饲料营养配方提供参考依据。     

番木瓜pds基因时空表达的荧光定量PCR分析

以番木瓜黄果肉品种Dwarf solo和红果肉品种Sunrise solo为材料,利用实时荧光定量PCR技术,对2个番木瓜品种的不同组织器官以及果实发育成熟过程中5个时期的八氢番茄红素脱氢酶基因(pds)表达进行分析.结果表明,在2个番木瓜品种的果实、花、叶片中,pds转录水平上均有表达,但不同组织部位pds表达量存在差异,在成熟果实中最高,其次为花、叶;在2个番木瓜品种的果实成熟过程中,pds的表达逐渐增加,以在红果中的增加变化更为明显,且pds在红果肉中的表达量高于黄果肉.因此,pds基因可能在调控番木瓜果肉颜色形成中起重要作用.今后将对番木瓜果实中psy、zds、lcy-e等基因的表达进行分析,以全面研究番木瓜类胡萝卜素合成及果肉颜色形成的机理.