大鼠心肌缺血再灌注模型建立方法的改进

【目的】改进大鼠心肌缺血再灌注动物模型制作方法。【方法】雄性Sprague-Dawley大鼠麻醉开胸后，用310医用单丝线穿过冠状动脉，在结扎线下垫聚乙烯管，结扎缝线缺血30min，剪断缝线再灌注120min。可省却呼吸机。【结果】24只SD大鼠，行单纯冠状动脉结扎术模型组大鼠存活率为10／12，再灌注后模型组存活率为9／12。假手术组存活率为12／12。经过氯化三苯基四氮唑（TIE）染色，梗死心肌和正常心肌组织分界清晰。Nagar Olsen心肌组织特殊染色，光镜下对照组心肌组织染成黄色，而模型组心肌组织可见大片红染的阳性反应区。【结论】采用本方法制作大鼠心肌缺血／再灌注损伤模型成功率较高，且操作简单、创伤小。     

miR-199a在妊娠糖尿病中的表达及参与胰岛素抵抗的作用机制研究

目的　探究微小RNA（miR）-199a在妊娠糖尿病（GDM）中的表达及调控沉默信息调节因子1（SIRT1）/叉头盒转录因子O1（FOXO1）通路参与胰岛素抵抗（IR）的机制。方法　GDM孕妇56例为GDM组,正常孕妇60例为正常孕妇组,实时荧光定量PCR（qPCR）检测2组胎盘中miR-199a水平;计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）;Pearson相关分析miR-199a与HOMA-IR的相关性。体外培养人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo并建立IR模型。miR-199a功能验证：细胞依处理方式不同分为模型组、miRNA inhibitor NC组、miR-199a inhibitor组、miRNA mimic NC组、miR-199a mimic组;qPCR检测各组细胞中miR-199a表达情况,蒽酮法检测细胞内葡萄糖吸收量,试剂盒检测超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平,Western blot检测SIRT1、FOXO1、乙酰化（Ac）-FOXO1蛋白水平,双荧光素酶报告基因实验鉴定miR-199a与SIRT1的靶向关系。结果　与正常孕妇组比较,GDM组胎盘中miR-199a、HOMA-IR水平升高（P＜0.05）;GDM组miR-199a水平与HOMA-IR呈正相关（P＜0.05）。棕榈酸、胰岛素共同作用细胞24 h成功建立IR模型。与模型组和miRNA inhibitor NC组比较,miR-199a inhibitor组miR-199a、MDA水平降低,葡萄糖吸收量、SOD水平、SIRT1蛋白水平升高（P＜0.05）。与模型组和miRNA mimic NC组比较,miR-199a mimic组miR-199a和Ac-FOXO1蛋白表达升高、MDA水平升高,葡萄糖吸收量、SIRT1蛋白水平降低（P＜0.05）。Tarbase数据库分析显示,miR-199a与SIRT1存在互补的结合位点,并经双荧光素酶实验证实。结论　GDM患者胎盘中miR-199a高表达,升高的miR-199a可通过靶向下调SIRT1而促进FOXO1乙酰化,导致IR。     

陈志刚治疗多系统萎缩临床经验

多系统萎缩是一种发病率逐年增高、进展较快、生存期短的神经系统变性病,其治疗是神经科的一大难题,目前西医方面尚无特异性的治疗方法,主要以对症治疗为主。陈志刚教授经过多年临床实践,认为本病与先天不足、久病过劳、饮食不节等病因有关,病机主要为"肾精不足、阳气虚颓",治疗当注重滋阴助阳、益髓健脑,并以地黄饮子及还少丹为基础,首创多系统萎缩经验方,临证加减治疗该病疗效显著。     

急性脑卒中APACHE Ⅱ评分的应用价值

目的探讨APACHE Ⅱ评分在预测急性脑卒中严重程度和预后中的作用。方法采用APACHE Ⅱ评分系统对153例急性脑卒中患者进行评分分析。结果急性脑卒中患者APACHE Ⅱ评分为8~40(15.60±8.97)分,其分值病残程度4~7级者高于1~3级者,死亡组高于存活组(P均0.01)。随着分值增高,脑卒中的预测死亡风险率和实际病死率呈上升趋势(P0.01),且后两者之间呈正相关关系(r=0.91,P0.01)。结论APACHE Ⅱ评分系统对评估脑卒中患者病情程度及预后具有参考价值。     

以精神障碍为主要表现的散发性脑炎26例报告

散发性脑炎系一组无明显地区性、季节性与感染密切相关的急性脑病,是我国神经科常见的一种中枢神经系统感染性疾病。神经系统早期症状和体征常无特异性,精神异常为最常见。由于这种以精神异常为主要表现的脑炎酷似功能性精神病,易误诊,我院1999年6月～2009年6月就诊的散发性脑炎患者中,有26例以精神障碍为主要     

加压交锁髓内钉治疗下肢长骨干骨折不愈合及延迟愈合

目的 分析下肢长骨干骨折不愈合及延迟愈合的原因,评价加压交锁髓内钉治疗下肢长骨干骨折不愈合及延迟愈合的效果. 方法 1998年2月-2006年12月,对21例股骨和胫骨干骨折不愈合及延迟愈合者采用加压交锁髓内钉治疗.其中股骨13例,胫骨8例,3例未植骨,仅扩髓加压,5例同时行膝关节松解. 结果 随访11.4～36个月,平均13.6个月,全部患者均骨性愈合,平均愈合时间8.7个月,无畸形、感染及再骨折出现.采用Klemm分级标准,优19例,良2例. 结论 下肢长骨干骨折不愈合及延迟愈合主要原因是手术适应证选择不当,手术内固定使用不当,断端血运和骨折愈合生物环境破坏.加压交锁髓内钉治疗下肢长骨干骨折不愈合及延迟愈合具有固定可靠,便于膝、踝早期功能活动,肢体可早期负重等优点.手术应用联合骨移植,扩髓及膝关节松解,可促进骨愈合,改善膝关节功能.     

蕨麻对大鼠缺血心肌的保护作用及其血清差异蛋白表达的影响

【目的】研究蕨麻乙醇提取物对大鼠结扎冠状动脉所致急性心肌缺血损伤的保护作用及其差异蛋白质表达谱的影响。【方法】选取雄性SD大鼠随机分为手术对照组,模型组,盐酸地尔硫卓组(diltiazem,30 mg/kg),蕨麻乙醇提取物7.2、3.6、1.8 g/kg干预组。连续灌胃10 d后,结扎在体大鼠冠状动脉致急性心肌缺血损伤模型。缺血时间持续30 min。记录各处理组动物心电图,左心室收缩压LVSP,左心室舒张末期压LVEDP及左室内压最大变化速率(±dp/dt max);取血清检测乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)含量;用强阴离子交换芯片(SAX-2)及弱阳离子交换芯片(WCX-2)结合表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术分析大鼠急性心肌缺血损伤后不同处理组血清中蛋白质表达谱的改变。【结果】冠状动脉结扎致心肌缺血后,心电图ST段出现抬高,蕨麻醇提物7.2和3.6 g/kg组显著抑制了急性心肌缺血损伤导致的大鼠心电图ST段升高(P<0.05)。蕨麻醇提物各剂量组的各项心功能指标[左心室收缩压LVSP,左心室舒张末期压LVEDP及±dp/dt均优于模型组(P<0.05)]。心肌缺血后,血清中LDH和CK含量显著升高,蕨麻醇提物各剂量组血清中LDH和CK均显著降低(P<0.05)。蛋白质芯片结果显示:WCX-2芯片共获得338个血清蛋白质峰;SAX-2芯片共获得348个血清蛋白质峰。缺血30 min,模型组质/荷(M/Z)比为4 972 Da的蛋白质相对含量明显高于对照组(P<0.01),蕨麻干预后,该蛋白质峰随药物浓度升高而降低,至高剂量组时降至对照组水平,呈现出明显的剂量依赖关系,提示4 972Da蛋白质可能是蕨麻抗心肌缺血损伤的药物作用靶点之一,有待进一步研究证实。【结论】蕨麻乙醇提取物能够显著保护急性心肌缺血所致心肌损伤,改善心脏功能。不同剂量蕨麻干预后,心肌损伤后异常表达的蛋白质(4 972 Da)剂量依赖性下降。     

VSD复合对流冲洗治疗大面积软组织缺损的临床实验研究

目的探讨负压封闭引流（vacuum sealing drainage,VSD）敷料结合对流冲洗技术治疗大面积软组织缺损的临床实验效果。方法 2008年9月-2010年4月间收治的43例皮肤软组织缺损的患者随机分组,清创后创面分别予单纯VSD（单纯VSD组）和VSD复合对流冲洗（VSD复合对流冲洗组）治疗,并于术后定期行引流液细菌培养,首次植皮前取创面肉芽组织行病理及免疫组化检查。对比两组植皮手术前住院时间、总住院时间、植皮或皮瓣转移存活以及引流管堵塞率、引流液细菌培养阳性率、两组处理方法肉芽组织中表皮生长因子（epidermal growth factor,EGF）表达强度的差异。结果 VSD复合对流冲洗组引流管堵塞率较单纯VSD组低（P〈0.05）,两组引流液细菌培养阳性率差异无统计学意义（P〉0.05）,单纯VSD组植皮前住院时间以及总住院时间较VSD复合对流冲洗组长（P〈0.01）,植皮及转移皮瓣成活率两组差异无统计学意义（P〉0.05）;免疫组化显示,植皮前VSD复合对流冲洗组肉芽组织中EGF表达强度较单纯VSD组增高（P〈0.05）。结论 VSD复合对流冲洗可降低VSD引流管堵塞率,促进肉芽组织局部EGF表达,有利于创面修复。     

河南汉族人群PentaD和PentaE基因座的遗传多态性

目的调查分析PentaD和PentaE 2个5核苷酸短串联重复序列遗传标记在河南汉族人群中的遗传多态性分布。方法酚氯仿法提取河南汉族群体155名无关个体血样本基因组DNA,PentaD和PentaE用PowerPlexTM16试剂盒进行扩增,AB13130xl全自动遗传分析仪检测聚合酶链反应产物。结果 PentaD和PentaE 2个基因座的等位基因及基因型频率在河南汉族群体中分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05)。PentaD基因座观察到9个等位基因和29个基因型;PentaE基因座观察到20个等位基因和82个基因型。PentaD、PentaE 2个基因座的杂合度、个体识别率、非父排除概率分别是0.845 2和0.916 1,0.943 0和0.984 0,0.685 0和0.828 0;累积非父排除概率和累积个体识别率分别是0.945 8和0.999 1。结论 PentaD和PentaE在河南汉族群体中具有较高的遗传多态性,在法医学个体识别中具有应用价值。     

蕨麻对缺氧诱导心肌细胞凋亡的影响

目的观察蕨麻(Potentilla anserina L.)对缺氧诱发乳鼠心肌细胞凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法采用原代培养的SD乳鼠心肌细胞建立缺氧损伤实验模型,分为正常对照组、缺氧模型组、蕨麻醇提物干预组,通过HE染色、双苯并咪唑-碘化丙锭荧光染色及透射电镜技术,观察细胞镜下结构的改变,并通过免疫组织化学染色观察细胞内P53蛋白表达水平。结果与缺氧模型组和正常对照组比较,蕨麻醇提物干预组可有效减轻缺氧导致的心肌细胞肿胀变形、细胞质空泡化及DNA凝集等损伤变化,并可显著降低P53蛋白的表达(P<0.01)。结论蕨麻能有效抑制缺氧诱导的心肌细胞凋亡损伤,其机制之一可能是通过调节P53蛋白的表达实现的。