OK-432联合IL-2对Lewis肺癌及c-fos蛋白表达的抑制作用

 目的　研究OK 4 32与IL 2抑制近交系小鼠C57BL/6Lewis肺癌 (LLC)的生长及c fos蛋白的表达。方法　以C57BL/6荷瘤LLC小鼠为模型 ,观察OK 4 32联合IL 2对肿瘤发生、生长转移的影响 ,及用抗鼠c fos单克隆抗体进行SABC免疫组化技术半定量测定c fos在Lewis肺癌原发灶中的表达。结果　二者联用对肿瘤体积和重量的抑制作用明显增强 (P <0 0 1) ,增强抑瘤率 (P <0 0 1) ,肺转移灶数目明显减少。光镜下显示肿瘤灶中出现许多凋亡细胞 ;肿瘤组织电镜观察 ,瘤细胞核染色质浓集成块 ,在核膜内呈新月形或环形排列 ,核膜清楚 ,瘤细胞内质网扩张 ,线粒体肿胀。c fos在联合用药组与对照组比较明显减少 (P <0 0 1)。结论　OK 4 32与IL 2有明显的协同抗肿瘤活性 ,部分原因可能阻抑c fos基因的表达 ;提示OK 4 32联合IL 2可望为临床治疗癌症患者提供一种有效的生物治疗方法。     

OK-432联合IL-2抑制C_(57)BL/6小鼠Lewis肺癌的生长及PCNA的表达

研究了ＯＫ-432与ＩＬ-2抑制Ｃ57ＢＬ/6小鼠Ｌｅｗｉｓ肺癌(ＬＬＣ)生长及增殖细胞核抗原(ＰＣＮＡ)的表达。选用40只Ｃ57ＢＬ/6荷瘤ＬＬＣ小鼠,雌雄各半,分4组,分别用生理盐水、ＯＫ-432与ＩＬ-2处理,观察用药后对肿瘤生长的抑制及用抗鼠ＰＣＮＡ单克隆抗体进行ＳＡＢＣ免疫组化技术半定量测定ＰＣＮＡ在Ｌｅｗｉｓ肺癌原发灶中的表达。结果:二者联用后明显增强抑瘤率(Ｐ<0.05),对肿瘤体积的抑制比二者单独用药更明显(Ｐ<0.01),ＰＣＮＡ在用药组中表达与对肿瘤生长抑制情况一致,二者联用后增殖活性明显下降(Ｐ<0.01)。我们认为,ＯＫ-432与…     

SETD4敲除对小鼠巨噬细胞功能及免疫细胞分化影响的初步研究#br#

目的　探讨SETD4（SET-domain containing protein 4）基因敲除对小鼠腹腔巨噬细胞（peritoneal macrophages,pMφ）分化成熟、功能的影响以及对小鼠外周血、脾脏免疫细胞分化,胸腺和脾脏发育的影响。 方法　(1)利用流式细胞术检测腹腔灌洗液中pMφ表面CD31分子的表达情况;(2)用液相芯片技术检测和比较SETD4-/-和SETD4+/+小鼠pMφ在受到脂多糖（LPS）刺激后对细胞因子TNF-α、IL-6释放的影响, 流式细胞术检测SETD4基因敲除对巨噬细胞吞噬细菌能力及Transwell检测对巨噬细胞迁移能力的影响;(3)流式细胞术分析和比较两组小鼠外周血及脾脏主要免疫细胞的数量及比例的差异;(4)HE染色对比两组小鼠胸腺和脾脏组织结构的差异。 结果　（1）与SETD4+/+小鼠相比,SETD4-/-小鼠pMφ受到LPS刺激后TNF-α、IL-6的释放明显减少,但是两组小鼠pMφ的比例及分化成熟程度无明显差异;（2）吞噬细菌能力和迁移能力两组无明显差异;（3）两组小鼠外周血及脾脏主要免疫细胞的数量及比例无明显差异;（4）SETD4基因敲除对小鼠胸腺和脾脏的结构无明显影响。 结论　（1）SETD4能促进炎性细胞因子TNF-α、IL-6的产生,但对pMφ的分化成熟及细菌吞噬、迁移能力无明显影响;（2）SETD4基因敲除对小鼠外周血及脾脏免疫细胞的分化没有明显影响,对胸腺和脾脏组织的发育无明显影响。     

基因芯片技术

基因芯片 (又称ＤＮＡ芯片、生物芯片 )是随着人类基因计划的逐步实施和分子生物学的迅猛发展应运而生的。基因芯片技术综合了分子生物学、半导体微电子、激光、化学染料等领域的最新科学技术〔1〕,是当今世界高度交叉、高度综合的前沿科学与研究热点。基因芯片是将预先设计好的寡核苷酸或基因(ｃＤＮＡ)片段有序地高密度地 (点与点之间的距离一般小于 5 0 0 μｍ)排列在玻璃、硅或尼龙膜载体上 ,采用高速打印或光刻合成技术制成的ＤＮＡ微点阵〔1～ 4〕。样品ＤＮＡ/ＲＮＡ通过ＰＣＲ扩增、体外转录等技术掺入荧光标记分子 ,与微阵列杂交后…     

教学中必须培养学生自学能力

1　问题的提出于今 ,科学技术发展迅速 ,知识的周期越来越短 ,为了适应市场的需要 ,人们必须获得新的知识和新的技术 ,变学历教育为终身教育[1] 。因此高等学校教学除了突出专业基本知识、基本理论的传授和基本技能的训练外 ,还应注意培养学生的自学能力 ,使学生逐步具备稳定的学习个性的心理特征 ,以满足社会的需求。培养自学能力 ,还有助于增强在校期间学生的学习兴趣 ,提高课堂教学效果。当前 ,大学生在自学能力的发展上存在不少问题。教师方面 ,普遍存在着“三多三少”的现象 ,即传授知识多 ,培养能力少 ;理论教学多 ,实践环节少 ;讲课…     

OK-432联合IL-2对C_(57)BL/6小鼠Lew is肺癌的抑制作用及p21的表达

目的　研究 OK- 432与 IL - 2抑制近交系小鼠 C5 7BL / 6 L ewis肺癌 (L L C)的生长及 p2 1的表达。　方法　以 C5 7BL / 6荷瘤 L L C小鼠为模型 ,观察 OK- 432联合 IL - 2对肿瘤发生、生长、转移的影响 ,体内对肿瘤细胞的作用及用抗鼠 p2 1单克隆抗体进行 SABC免疫组化技术半定量测定 p2 1在 L ewis肺癌原发灶中的表达。　结果　二者联用对肿瘤体积和重量的抑制作用明显增强 (P<0 .0 1) ,增强抑瘤率 (P<0 .0 5 ) ,肺转移灶数目明显减少。电镜下显示肿瘤灶中出现许多凋亡细胞 ,瘤细胞核染色质浓集成块 ,在核膜内呈新月形或环形排列 ,核膜清楚 ,瘤细胞内质网扩张 ,线粒体肿胀。 p2 1在联合用药组表达明显减少。　结论　 OK- 432与 IL - 2有明显的协同抗肿瘤活性 ,其杀瘤过程主要为对瘤细胞的直接或间接攻击 ,部位原因可能阻抑 ras癌基因的激活 ,诱导瘤细胞凋亡 ;提示 OK- 432联合 IL - 2可为临床治疗癌症患者一种有效的生物治疗方法     

C_(57)BL/6Lewis肺癌肿瘤浸润淋巴细胞提取成功与否的原因探讨

1 实验步骤、方法、注意事项、出现问题的原因 C_(57)BL/6于右侧腋下皮下接种Lewis肺癌瘤株,待肿瘤长至1.5cm×1.5cm,在超净工作台无菌剥离,置入HBSS液中,剪取边缘新鲜瘤组织成1nm× 1mm,置于RPMI-1640配制的消化液中稍加改良, DNase Ⅰ 0.1mg/ml,collagenase Ⅳ 1mg/ml, hyaluronidase:0.5mg/10ml, 于37℃孵箱消化4 h,经120目尼龙网过滤,离心1500r/min,5min弃上清;用HBSS液洗一次,弃上清,加入约2mlHBSS,吹打制成细胞悬液,准备细胞分离。     

NALP3富含亮氨酸重复序列结构域识别人细胞周期蛋白H和禽冠状病毒蛋白

 目的：寻找与NALP3富含亮氨酸重复序列（leucine-rich repeat, LRR）结构域相互作用的蛋白质分子。方法：克隆NALP3富含亮氨酸重复序列（NALP3-LRR）结构域的DNA序列并经测序检验。应用酵母双杂交技术,构建以NALP3-LRR结构域为诱饵基因的酵母双杂交载体,对人胚肺cDNA文库进行杂交筛选,经酵母回交实验验证蛋白质在酵母细胞内的相互作用并对阳性克隆的DNA进行序列测定和生物信息学分析。将筛选到的阳性克隆进一步用免疫共沉淀实验验证NALP3-LRR结构域与阳性蛋白之间相互作用的可靠性。结果：成功克隆NALP3-LRR结构域的DNA序列并经测序检验正确。用酵母双杂交技术对人胚肺cDNA文库进行酵母杂交筛选共获得4个阳性克隆。免疫共沉淀实验证实能与NALP3-LRR结构域发生相互作用的阳性蛋白是人细胞周期蛋白H和禽传染性支气管炎病毒株Cal99的ORF1a。结论：NALP3的富含亮氨酸重复序列结构域能与人细胞周期蛋白H和禽冠状病毒蛋白发生相互作用。     

p38信号通路对SETD4在细胞中的表达和定位的影响

目的: 观察SETD4(SET domain containing 4)蛋白在不同细胞中的表达和定位情况,以及亚砷酸钠(NaAsO₂)刺激对细胞SETD4表达和定位的影响,探讨NaAsO₂诱导SETD4的改变是否依赖于p38信号通路。方法: 用Western blotting检测SETD4在不同细胞中蛋白的表达情况,用细胞免疫荧光技术检测SETD4在细胞中的定位;用NaAsO₂刺激 p38 ^+/+和 p38 ^-/-细胞,分别收集细胞总蛋白检测SETD4蛋白的表达变化,同时观察SETD4的定位和移位改变。结果: SETD4蛋白无论在鼠源还是人源的细胞中均有表达;细胞免疫荧光结果显示SETD4在整个细胞中分布,以胞质较多; p38 ^+/+和 p38 ^-/-细胞受NaAsO₂刺激后其SETD4蛋白的表达趋势一致,即均在6 h时有明显减少; p38 ^+/+细胞受NaAsO₂刺激后SETD4蛋白从胞质向胞核移位,而 p38 ^-/-细胞SETD4的移位现象不明显。结论: SETD4蛋白在不同种属及组织来源的细胞中均有表达,表现为全细胞分布,以胞质为主;NaAsO₂刺激可影响细胞SETD4蛋白的表达水平及定位,NaAsO₂诱导的SETD4移位改变有赖于p38 MAPK介导的信号通路。     

OK—432联合IL—2对C57BL／6小鼠Lewis肺癌的抑制作用及p21的表达

目的：研究OK－432与IL－2抑制近交系小鼠C37BL／6 Lewis肺癌（LLC）的生长及P21的表达。方法：以C57BL／6荷瘤LLC小鼠为模型,观察OK－432联合IL－2对肿瘤发生,生长,转移的影响,体内对肿瘤细胞的作用及用抗鼠p21单克隆抗体进行SABC免疫组化技术半定量测量P21在Lewis肺癌原发灶中的表达。结果：二者联用对肿瘤体积和重量的抑制作用明显增强（P＜0．01）,增强抑瘤率（P＜0．05）,肺转移灶数目明显减少,电镜下显示肿瘤灶中出现许多凋亡细胞,瘤细胞核染色质浓集成块,在核膜内呈新月形或环形排列,核模清楚,瘤细胞内质网扩张,线粒体肿胀,P21在联合用药组表达明显减少,结论：OK－432与IL－2有明显的协同抗肿瘤活性,其杀瘤过程主要为对瘤细胞的直接或间接攻击,部位原因可能阻抑ras癌基因的激活,诱导瘤细胞凋亡,提示OK－432联合IL－2可为临床治疗癌症患者一种有效的生物治疗方法。