缺氧缺血性脑病新生儿血浆神经肽Y和降钙素基因相关肽的变化

目的：研究缺氧缺血性脑病新生儿血浆神经肽Y(NPY)和降钙素基因相关肽(CGRR)的变化。方法：采用放免法动态观察42例中度HIE患儿和30例正常对照组NPY和CGRP在急性期和恢复期的变化以及与脑血流的相关性。结果：观察组NPY总体水平高于对照组,尤以窒息后第2,3天为著[(168.3±10.9)ng/L vs(86.7±5.4)ng/L],差异有显著性(P<0.01);观察组CGRP总体水平低于对照组,尤以窒息后第2,3天为著[(48.4±3.7)ng/L vs(81.3±16.8)ng/L],差异有显著性(P<0.01)。结论：NPY,CGRP在HIE的发病机理中可能起重要的作用,参与了HIE的发生和发展;HIE第2～3天脑血管痉挛收缩,是应用扩血管治疗的最佳时期。     

抗新生血管蛋白KBP多克隆抗体的制备及鉴定

目的激肽释放酶结合蛋白(Kallikrein-binding protein,KBP)具有抑制血管新生的高活性,但目前尚无KBP的特异性抗体,限制其进一步研究。本研究拟制备高灵敏度和高特异性的KBP抗体并对其进行初步评估。方法构建含大鼠源性KBP序列的pET-28a重组载体的大肠杆菌BL21(DE3),在此基础上,扩增表达菌,经异丙基B.D一硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,Ni-NTA色谱柱亲和层析纯化获得KBP重组蛋白。利用SDS-PAGE和Western blot方法对KBP进行鉴定。以纯化产物为抗原免疫新西兰大白兔,获得兔抗KBP血清,亲和纯化获得多克隆抗体。应用Elisa和Western-blot方法检测纯化抗体的效价和特异性。结果 KBP融合蛋白得到高表达,且纯度大于85%。用该融合蛋白免疫大白兔后得到的抗KBP抗体,效价达1∶512 000,并特异性识别大鼠和人组织中天然的KBP蛋白。结论以纯化的KBP重组蛋白为抗原,获得KBP多克隆抗体,具有较好的效价和特异性,为KBP功能和作用机制的深入研究提供了必要的工具。     

一种高选择性、高效的牛视网膜微血管内皮细胞培养方法

目的 建立一种高效、可行、特异性高的牛视网膜微血管内皮细胞(BREC)培养方法.方法 取新鲜牛眼,分离视网膜并用DMEM进行冲洗、匀浆剪碎,过75μm筛,将滤网上滤渣转移至50 ml离心管,用I型胶原酶、DNaseI及蛋白酶等多种酶混合液消化20 min,人血清中和后,过46μm网筛并冲洗,离心5 min,将组织扣在培养皿中,转入15 ml离心管,用10％人血清含生长因子ECGS的DMEM培养液培养于25 cm2,选择性培养视网膜血管内皮细胞,接种于明胶包被培养瓶中,采用ECGS配合肝素培养液促进内皮细胞生长,观察细胞形状生长特性,并用免疫化学荧光方法进行鉴定.结果 选择性培养视网膜微血管内皮细胞成单层、镶嵌铺路石状生长,Ⅷ因子相关抗原免疫荧光检测为阳性纯度均大于95％以上,将细胞种在凝固的基质胶表面,12～18 h形成官腔结构.结论 本方法过程简单、可靠,培养的内皮细胞纯度高,生长状态良好,稳定传代,为视网膜血管生成疾病研究建立了模型.     

解耦联蛋白-2基因敲除减轻高脂饮食诱导小鼠脂肪肝缺血再灌注损伤

目的 观察解耦联蛋白-2(UCP-2)基因在脂肪肝缺血再灌注损伤中的作用,探讨以UCP-2为靶点的脂肪供肝预处理新途径.方法 实验动物分为3组:实验组(A组):UCP-2基因敲除小鼠,给予高脂饮食(n=20);空白对照组(B组):野生型同系小鼠,给予正常饮食(n=20);阴性对照组(C组):野生型同系小鼠,给予高脂饮食(n=20).喂养6个月,建屯小鼠脂肪肝模型.各组小鼠阻断门静脉缺血15 min,再灌注24 h后处死,检测肝组织中UCP-2基因表达及三磷酸腺苷(ATP)、活性氧族(ROS)、乳酸脱氢酶(LDH)水平;并行血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)检测及肝组织病理学检测.结果 高脂饮食喂养6个月后成功建立小鼠脂肪肝模型;Western blot证实A组小鼠UCP-2无表达,C组表达明显高于B组;A组ALT、AST、ATP、ROS、LDH的定量值为:(55.33±5.51)、(128.33±7.02)U/L、(28.00±2.00)nmol/L、(165.33±7.09)、(1176.00±22.27)U/pmt;B组上述指标为(25.00±4.58)、(85.33±4.51)U/L、(24.33±4.16)nmol/L、(147.33±7.51)、(707.33±31.64)U/prot;C组为(142.67±13.01)、(220.67±7.02)U/L、(8.67±1.53)nmol/L、(65.00±5.00)、(1748.33±42.52)U/prot,A组和C组差异有统计学意义(P<0.05);病理检测表明A组损伤轻于C组.结论 抑制解耦联蛋白-2基因表达能在减轻小鼠脂肪肝急性损伤.     

血清维生素D水平与小儿先天性甲状腺功能减低症相关性研究

目的 研究血清维生素D水平与小儿先天性甲状腺功能减低症(CH)的相关性.方法 回顾性分析芜湖市妇幼保健院2014年1月到2020年12月间确诊为CH且日龄小于28 d的120例患儿的临床资料(甲减组),按照1:2原则选取同期出生日期不超过30 d、性别相同并排除其他疾病的240例健康新生儿作为对照组.收集所有新生儿的临...     

人类肥胖相关新基因LYRM1真核表达载体的构建及稳定转染3T3-L1细胞系的建立

目的:构建人LYRM1基因的真核表达载体,转染3T3-L1前体脂肪细胞,建立稳定过表达人LYRM1基因的3T3-L1前体脂肪细胞系.方法:运用RT-PCR技术从人网膜脂肪组织中分离LYRM1基因的完整编码框,将其亚克隆到真核表达载体pcDNATM3.1/myc-His B,脂质体转染3T3-L1前体脂肪细胞,通过G418筛选,建立稳定转染的3T3-L1前体脂肪细胞系,并利用Western blot方法鉴定其表达.结果:PCR、酶切鉴定及测序结果表明重组质粒构建正确.建立了稳定转染LYRM1的3T3-L1前体脂肪细胞,成功地表达目的基因.结论:LYRM1真核表达载体的成功构建及稳定转染3T3-L1细胞系的建立为进一步研究其功能奠定了良好的实验基础.     

人类肥胖相关新基因LYRM1原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

目的构建人类肥胖相关新基因LYRM1原核表达载体,并获取LYRM1重组蛋白。方法采用RT-PCR技术从人网膜脂肪组织中扩增出LYRM1基因的完整编码框,将其亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1,转化大肠杆菌BL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代板乳糖苷(IPTG)诱导LYRM1融合蛋白的表达,利用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及免疫蛋白印迹(Western blot)鉴定其表达。结果PCR、酶切鉴定及测序结果表明重组质粒构建正确。LYRM1基因在原核细胞中成功表达,经SDS-PAGE鉴定融合蛋白相对分子质量约为40000,主要以不可溶的包涵体形式存在于菌体沉淀中,Western blot分析表明融合蛋白具有免疫原性。结论成功扩增和克隆了人类肥胖相关新基因LYRM1,并通过构建其原核表达载体,使其在大肠杆菌中高效表达,为进一步研究该基因的功能奠定了基础。     

在丙泊酚靶控输注麻醉下行无痛结肠镜检查

目的研究丙泊酚靶控输注进行无痛结肠镜麻醉对患者血流动力学及麻醉恢复的影响。方法非住院择期结肠镜受检者30例,采用靶控输注丙泊酚复合芬太尼（GT）,监测并记录HR、SBP、MAP、SpO2、不良反应及离院时间等。结果患者的HR、SBP和MAP在检查中和检查结束时与检查前基础值相比均降低（P〈0．01）;术中低血压的发生率为6．67％,低氧的发生率为3．33％,心动过缓的发生率为6．67％;平均苏醒时间为（0．67±1．18）min,平均离院时间为（20．80±4．96）min。结论靶控输注丙泊酚能安全有效地应用于无痛结肠镜麻醉。     

水疗指针综合疗法治疗新生儿脑损伤30例探讨

目的　为了降低新生儿脑损伤伤残率。方法　对早期干预门诊 65例新生儿脑损伤患儿进行了水疗指针综合疗法 (全身抚触、指针穴位按摩、姿势变更、捏脊、被动操、黄豆擦搓等 ) ,每天一次 ,每次 2 0～ 3 0分钟 ,15天为一疗程。 65例分两组 ,甲组 3 0例 (系统治疗组 ) ,乙组 3 5例 (未系统治疗组 ) ,两组的年龄、体重、身长、头围、病情程度及治疗前精神发育指数 (MDI)与运动发育指数(PDI)经统计学处理P >0 0 5。结果　甲、乙两组治疗后MDI与PDI分别为 75 63± 19 69,5 5 74±5 4 7及 83 2 6± 15 2 6,5 8 91± 8 60 ,t值分别为 5 73 ,8 4 0 ,P均 <0 0 1,甲组明显高于乙组。结论　水疗指针综合疗法 ,能促进新生儿脑损伤的恢复 ,对于脑损伤的患儿越早治疗效果越好。