EBV转化的B淋巴母细胞系的建立及应用

EBV转化B淋巴细胞后，形成永生化的B淋巴母细胞系(B-LCL)。B-LCL在体外能无限增殖，广泛应用于医学生物学研究领域。本文就EBV对B淋巴细胞的转化机制、建立B-LCL应注意的问题以及B-LCL在细胞与分子遗传学、免疫学、EBV相关肿瘤的免疫治疗等方面的进展作一简要综述。     

HFRS患者汉滩病毒核蛋白特异性T细胞克隆及其靶细胞的建立

目的　建立肾综合征出血热 (HFRS)患者汉滩病毒 (HTNV)核衣壳蛋白 (NP)特异性CTL克隆 ,为HTNVNPT细胞表位鉴定及HFRS患者T细胞免疫功能研究奠定基础。方法　采用Fi coll密度梯度离心法分离HFRS患者外周血单个核细胞 (PBMC) ,用灭活HTNV和IL 2体外刺激 ,有限稀释法建立T细胞克隆 ,流式细胞术鉴定克隆表型。并用EB病毒 (EBV)转化B淋巴细胞 ,建立B淋巴母细胞样细胞系 (B LCL) ,以含HTNVS基因的重组痘苗病毒感染B LCL作靶细胞 ,以CTL克隆作效应细胞进行细胞毒杀伤试验 ,测定T细胞克隆的抗原特异性。结果　T细胞克隆能特异性识别表达NP的B LCL。在 5名患者中 ,3名有较高的杀伤率 ,并自 2名患者建立了 5株HTNV特异性CTL克隆 ,其表型为CD8 均大于 6 0 %。结论　成功建立了HFRS患者HTNVNP特异性CTL克隆及其靶细胞。NP是HFRS患者HTNV特异性CTL应答的主要靶抗原之一。     

丙型肝炎病毒持续感染对体外培养人胎盘合体滋养层细胞MMP-2和MMP-9合成分泌的影响

目的:探讨丙型肝炎病毒持续感染对体外培养人胎盘合体滋养层细胞MMP-2和MMP-9合成分泌的影响. 方法:应用ELISA方法检测细胞培养上清MMP-2和MMP-9水平,分析感染组和对照组数据间的差异,并用明胶酶谱进一步验证ELISA结果,随后应用RT-PCR法分析感染对细胞proMMP-2和proMMP-9 mRNA表达的影响. 结果:感染组细胞分泌MMP-2和MMP-9能力明显下降(MMP-2:t=4.186,P＜0.05; MMP-9:t=2.325,P＜0.05);RT-PCR结果显示感染组细胞proMMP-2和proMMP-9 mRNA表达弱于对照组,但差异不明显(proMMP-2:t=1.196,P＞0.05;proMMP-9:t=1.417,P＞0.05). 结论:丙型肝炎病毒持续感染时体外培养人胎盘合体滋养层细胞MMP-2和MMP-9合成分泌能力下降,为非特异性.     

HBV野生株及C区突变株调节HLA-Ⅰ表达的作用

目的 研究乙型肝炎病毒(HBV)及其C区突变对机体人类白细胞抗原-Ⅰ(HLA-Ⅰ)表达的影响和机制.方法 构建HBV C区突变株G87、V60的真核表达载体,转染HepG2细胞,检测转染细胞中HLA-Ⅰ的表达以及抗原提呈相关基因LMP2、TAP1和tapasin的mRNA表达.结果 各转染细胞株均能有效表达HBsAg;各转染细胞株均有HLA-Ⅰ表达,野生株略高于C区突变株G87、V60;TAP1 mRNA表达上调,LMP和tapasin mRNA均未见明显表达.结论 HBV能诱导HepG2细胞内HLA-Ⅰ分子的合成,使TAP1基因转录增强,HLA-Ⅰ的表达上调.相对于HBV野生株而言,C区突变株G87、V60使宿主细胞内HLA-Ⅰ mRNA及其蛋白的表达水平降低.     

脐带血、成人外周血中CD4+CD25high调节性T细胞分布的比较

目的比较成人外周血及新生儿脐带血中CD4 CD25 调节性T细胞(Tr细胞)的数量。方法采集成年人外周血和新生儿的脐带血,以荧光素分别标记的抗CD4/抗CD25/抗CD3和抗CD4/抗CD8/抗CD3mAb染色后,流式细胞术进行分析。结果成人外周血中CD4 CD25highTr细胞的数量为(9.09±3.05)个/μL,占CD3 CD4 T细胞的(1.40±0.37)%。新生儿脐带血中CD4 CD25-T细胞和CD4 CD25highTr细胞的绝对数及其占CD3 CD4 T细胞的百分率,均明显高于成人外周血(P<0.01);而CD4 CD25intT细胞的绝对数及其占CD3 CD4 T细胞的百分率,则明显低于成人外周血(P<0.01)。结论新生儿脐带血中CD4 CD25highTr细胞、CD4 CD25intT细胞及CD4 CD25-T细胞的数量明显有异于成人外周血。     

TIMP-1 ELISA检测方法条件的优化研究

目的进一步研究酶联免疫吸附方法（ELISA）检测人血清中基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）的最优化试验条件。同时最大程度降低成本，使血清TIMP-1ELISA国产试剂盒价格、质量更优。方法用抗人TIMP-1单克隆抗体（mAb），辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗TIMP-1，通过选用国产酶联板及对酶联板进行紫外线辐照处理，改变固相化条件；通过对抗体包被时间、样本温育时间等条件优化，建立简便、快速、准确的ELISA定量技术。同时复检临床408例肝病患者血清，并与优化前检测结果做以比较。结果改变固相化条件，并延长包被时间至48h，抗原抗体反应时间为37℃ 2h，可获得更佳的血清TIMP-1定量结果。结论优化后的TIMP-1测定方法在敏感性、重复性及标准曲线线性关系更好，可提高临床肝纤维化血清阳性检出率。     

汉坦病毒核衣壳蛋白T细胞表位研究进展

汉坦病毒核衣壳蛋白是主要结构蛋白，具有很强的抗原性和免疫原性，可诱导细胞免疫，尤其是特异性细胞毒T淋巴细胞（CTL）反应，在抗病毒免疫中起着关键作用。本文就近年来汉坦病毒核衣壳蛋白T细胞表位方面的研究作一简要综述。     

TTV经胎盘的垂直传播

近来国内外对输血传播病毒(transfusion transmitted virus,TTV)的研究较多,对TTV传播途径研究中粪口传播及输血传播途径已较为肯定,但是否可经母亲垂直传播尚不清楚。现对TTV垂直传播进行一定的研究,报道如下。 1 材料和方法 1.1材料检测对象为安徽省全椒地区正常妊娠并正常分娩的产妇共52例,平均年龄为25岁±2岁,分别取外周血及其所产新生儿脐带血备检。新生儿性别为男27例,女25例。产前采产妇血,产后立即抽取脐带血保留,均约2mL置于玻璃试管中,离心(转速3000 r·min~(-1)分离血清,取20μL于高压灭菌的1.5mL Ependdorf管中,加等量裂解液煮沸10min.再以     

HCVC区、E1区基因腺病毒表达载体骨架质粒pAd·HCV—CE1的构建、鉴定及表达

用分别含有BglⅡ及HindⅢ酶切位点的HCVCE1基因上、下游引物,以含有HCVH株基因序列的质粒pBRTM/HCV1-3011为模板,通过PCR扩增获得HCVCE1基因片段,定向插入到腺病毒骨架质粒pAd.CMV-Link1中CMV启动子下游BglⅡ与HindⅢ位点之间,获得重组表达质粒pAd.HCV-CE1。通过BgiⅡ/HindⅢ双酶切、PCR及插入片段序列测定对质粒进行鉴定,证实了pAd.HCV-CE1插入片段为HCVCE1区基因片段,以抗HCVC单克隆抗体为一抗,利用间接免疫荧光法证实 pAd.HCV-CE1可以在人肝癌细胞7721中瞬时表达。以上结果初步表明,构建的质粒pAd.HCV-CE1可以表达HCVCE1区基因,为进一步包装能高效表达HCVCE1基因的腺病毒载体奠定了基础。     

汉滩病毒感染EA.hy926细胞上调固有免疫相关分子表达的研究

目的　探讨汉滩病毒（hantaan virus, HTNV）感染EA.hy926细胞诱导抗病毒固有免疫相关分子的表达,为建立HTNV感染的细胞模型提供依据。方法　将HTNV感染EA.hy926细胞,利用间接免疫荧光和实时荧光定量PCR技术于不同感染时间段,检测EA.hy926细胞中模式识别受体、细胞因子及抗病毒相关分子的mRNA表达水平。结果　HTNV感染EA.hy926细胞后,随着感染时间的持续,核蛋白mRNA相对表达倍数显著上调,且不同感染时间段差异具有统计学意义（P＜0.05）;与未处理组相比,HTNV感染EA.hy926后,Toll样受体3、RIG-I和MDA5模式识别受体mRNA相对表达倍数均显著上调（P均＜0.05）,IL-6、IL-10、IFN-β和CCL5细胞因子mRNA相对表达倍数均显著上调（P均＜0.05）,ISG15、MxA、OAS1、IFITM1和IFITM3抗病毒相关分子mRNA相对表达倍数均显著上调（P均＜0.05）。结论　HTNV感染EA.hy926细胞后,可上调抗病毒固有免疫相关分子的表达,该细胞可以作为体外HTNV感染的细胞模型。