血管平滑肌细胞受低浓度一氧化碳作用后迁移的变化

目的 :探讨低浓度CO对大鼠主动脉平滑肌细胞迁移的影响。方法 :体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞 ,用低浓度CO处理 2 4、48、72h ,检测平滑肌细胞迁移情况。结果 :2 4、48、72h后未加处理的对照组大鼠主动脉平滑肌细胞迁移距离逐渐增加 ,与 2 4h组比差异显著 (P <0 0 0 1)。 2 0× 10 -6、5 0× 10 -6、80× 10 -6CO处理细胞 2 4h后 ,细胞迁移距离逐渐下降 ,2 0× 10 -6CO组与对照组差异不显著 (P <0 0 5 ) ,其余两组均显著低于对照组 (P <0 0 1)。 2 0× 10 -6、5 0× 10 -6、80× 10 -6CO处理细胞 48、72h后 ,其迁移距离也显著低于对照组 (P <0 0 1)。结论 :大鼠主动脉平滑肌细胞自身存在迁移情况 ,培养时间愈长 ,迁移距离愈大。低浓度CO可以显著抑制平滑肌细胞的迁移 ,随着浓度增加 ,抑制作用增强。     

肺微血管内皮细胞的培养液对血管平滑肌细胞的效应

目的 观察缺氧条件下培养的肺微血管内皮细胞（ＰＭＥＣ）培养液对大鼠主动脉平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）的作用,方法 应用倒置显微镜和电镜观察细胞形态,同位素放射测定＾３Ｈ－胸腺嘧啶核苷（＾３Ｈ－ＴｄＲ）摄取量,流式细胞仪测定细胞的周期和蛋白含量。结果 单纯缺氧可使ＡＳＭＣ Ｇ０／Ｇ１期数目增多,＾３Ｈ－ＴｄＲ摄取量降低,蛋白质含量减少;缺氧的ＰＭＥＣ培养液能促进大鼠ＡＳＭＣ从Ｇ０／Ｇ１期进入Ｓ期,＾３Ｈ－     

Sirt1通过去乙酰化NF-κB/p65减轻小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞脂多糖损伤

目的 研究酵母沉默信息调节因子2相关酶1(sirtuin type 1,Sirt1)在肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)脂多糖(LPS)损伤中对NF-κB的作用.方法 购买Sirt1过表达(Tg)小鼠和野生型(WT)小鼠,饲养、繁殖、鉴定新生小鼠基因型;通过qRT-PCR和Western blot鉴定Tg小鼠和WT小鼠肺组织Sirt1 mRNA和蛋白表达差异;两种不同Sirt1基因背景的小鼠LPS(15 mg/kg)腹腔注射12 h后,HE染色鉴定肺组织病理变化差异;分离纯化两种小鼠的AECⅡ并进行鉴定;两种不同Sirt1基因背景的AECⅡ用LPS 10 μg/mL处理后,分别在0、2、4、6、8、12、24 h用ELISA检测细胞上清液中白细胞介素石(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平;用LPS 10 μg/mL处理两种AECⅡ,同时设置生理盐水对照组,12 h后用Western blot鉴定细胞NF-κB/p65蛋白和乙酰化NF-κB/p65蛋白的表达差异.结果 新生小鼠有Tg和WT两种不同的基因型;Tg小鼠肺组织Sirt1 mRNA和蛋白的表达水平显著高于WT小鼠(P＜0.05);小鼠腹腔注射LPS 15 mg/kg 12 h后肺组织病理变化显示,Tg小鼠较WT小鼠肺组织损伤程度轻;两种AECⅡ用LPS 10μg/mL处理后,细胞上清液中IL-6和TNF-α的表达水平随时间推移呈现逐渐升高的趋势,Tg组AECⅡ细胞上清液中IL-6和TNF-α的表达水平在多个时间点都显著低于WT组(P＜0.05);两种AECⅡ经LPS(10 μg/mL)处理后,与各自的空白对照组相比Sirt1含量下降,且WT组AECⅡ下降更明显,LPS处理后WT组AECⅡ的NF-κB/p65和乙酰化NF-κB/p65的变化倍数均高于Tg组.结论 Sirt1可能通过去乙酰化NF-κB/p65参与调控AECⅡLPS炎症损伤,抑制急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome,ARDS)小鼠肺部炎症反应.     

慢性阻塞性肺疾病防治的新进展

慢性阻塞性肺疾病（COPD）是一种常见病和多发病,严重影响着患者的劳动力和生活质量。调查结果显示,在我国呼吸系统疾病总死亡率为137.56／10万,占总死亡人数的22.77％,高于恶性肿瘤、脑血管病和心脏病,在各种疾病中居于首位,其中引起死亡的最主要的是COPD。年近下COPD的防治有了很大的进展,综述如下。     

海水对肺腺癌细胞株A549细胞蛋白酶激活受体2表达的作用研究

目的 观察海水对肺腺癌细胞株A549细胞的炎性损伤及对蛋白酶激活受体2(PAR-2)表达的影响,探讨海水导致急性肺损伤的作用机制.方法 将培养的A549细胞接种于6孔板中,按随机数字表法把细胞分为对照组及海水处理2、4、8 h组,相应时间点用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测PAR-2的mRNA和蛋白表达;收集细胞培养上清液,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-8(IL-8)含量.结果 用海水处理后,A549细胞PAR-2 mRNA和蛋白表达均于2 h显著增加(P均<0.05),4 h达高峰,分别为对照组的1.8倍和2.2倍,随后下降,但仍显著高于对照组(P均<0.01);TNF-α和IL-8含量则于2 h即显著升高并达最高峰[分别为(214.35±20.85)ng/L,(55.86±5.65)ng/L],随后下降,但仍显著高于对照组[分别为(25.86±3.85)ng/L,(6.97±1.77)ng/L,P均<0.01].结论 海水可致A549细胞炎症反应明显,并可诱导A549细胞PAR-2表达增高.     

低浓度一氧化碳和缺氧气体处理培养细胞容器的研制及其应用

为建立低浓度一氧化碳和缺氧气体处理培养细胞的装置并观察两种气体对培养细胞－大鼠主动脉内皮细胞的效应。采用气体置换法建立细胞处理模型,并用透射电镜观察细胞之变化。结果发现,1）建立的装置能够在较短时间内达到所需的一氧化碳浓度和氧浓度,维持所需浓度时间12h内未明显变化;2）处理培养的RAEC的结果比较满意。缺氧12h,RAEC部分细胞仍具有完整的线粒体和内持网、核和细胞膜完整,但部分细胞出现线粒体肿胀,破裂以及内质网轻微肿胀;且胞内空泡和脂质体均明显增加,核内染色质边集;细胞间连接分离明显。低浓度CO12h组的RAEC细胞细胞连接经度分离,胸浆内有少量空泡状结构;胞核出现少许切迹。此结果提示,建立的低浓度一氧化碳和缺氧气体处理细胞模型可靠,低氧损害血管内皮细胞结构和细胞间的连接,低浓度CO可以减轻低氧的损害。     

PCCM专科医师规范化培训中的"双语教学"探索

<正>由于呼吸系统病理生理过程与危重症患者发病、转归、预后之间的紧密联系,国际上,内科设立呼吸病学与危重症医学专科(pulmonary and critical care medicine,PCCM),其专科医师从事呼吸系统疾病同时负责内科危重患者特别是合并呼吸衰竭患者的监护治疗。目前,我国很多地区的呼吸科与危重症科仍然是分开的,为了适应国际接轨步伐,促进呼吸专科医生转型,成为具有处理疑难危重症能力的呼吸与危重症专业医生,在王辰院士呼吁下,中华医学会呼吸病学分     

FeNO与诱导痰细胞分类检测的相关性

<正>呼出气一氧化氮(fractional exhaled nitric oxide,FeNO)检测和诱导痰细胞分类检查作为一种无创性检查方法,越来越多的用于临床,其中FeNO广泛应用于哮喘的诊断、治疗反应的监测以及哮喘患者症状控制情况的评估和急性加重的预测~([1-5])。目前FeNO检测在我国临床应用的时间比较晚,且在诊断哮喘的价值中各国研究结果报道亦不一致~([6-8])。诱导痰细胞分类计数亦是评价慢性气道炎症疾病的重要检     

SSAT2通过抑制HIF-1α表达增强肾癌Caki-1细胞化疗敏感性

目的探讨转染精脒/精胺N1乙酰基转移酶2(spermidine/spermine N1-acetyltransferase 2,SSAT2)在低氧条件下对肾癌Caki-1细胞增殖、凋亡和阿霉素敏感性的影响及机制。方法经X-treme GENE HP介导将真核表达质粒pcDNA3.1(D)/V5-His-SSAT2转入肾癌Caki-1细胞,细胞在1%氧浓度下培养,Western blot法检测SSAT2蛋白和低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1 alpha,HIF-1α)蛋白表达;流式细胞仪检测细胞的凋亡率、死亡率;MTT法检测细胞的增殖,以及不同浓度阿霉素对细胞的抑制率。结果 SSAT2成功转入肾癌Caki-1细胞,与空白细胞组及空载体组比较,转染SSAT2组HIF-1α蛋白表达明显下调(P<0.01),细胞增殖受到明显抑制(P<0.01),细胞凋亡率和死亡率均增加(P<0.05)。阿霉素浓度为2μg/ml时,转染组细胞抑制率可达(67.5±3.7)%,对空白细胞和空载体细胞的抑制率为(54.7±8.4)%、(56.8±7.7)%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论转染SSAT2可以通过下调HIF-1α蛋白表达,减少肾癌细胞的增殖,增加肾癌Caki-1细胞的凋亡率、坏死率和对阿霉素的敏感性,针对SSAT2的基因治疗可能成为逆转肾癌耐药的方法之一。     

低氧肺动脉高压大鼠的肺动脉组织凋亡

目的 研究bcl-2、bax凋亡相关基因在低氧处理大鼠肺动脉中的表达,探讨低氧肺动脉高压的发病机制及防治措施.方法 36只Wistar大鼠随机分为3组,分别为正常对照组、低氧肺动脉高压组、低浓度一氧化碳(CO)组,每组12只,采用原位细胞凋亡、原位杂交、免疫组化等方法检测肺动脉的凋亡状况.结果 ①原位凋亡检测示,正常对照组、低氧肺动脉高压组、低浓度CO组的凋亡率分别为8.1%,37.6%,76.5%,三者间差异显著;②原位杂交显示,正常对照组bax、bcl-2杂交呈弱阳性表达.低氧肺动脉高压组bax杂交呈弱阳性表达,低浓度CO组呈强阳性表达,但bcl-2杂交可见低氧肺动脉高压组呈强阳性表达,低浓度CO组呈弱阳性表达;③免疫组织化结果表明,低浓度CO组bcl-2、bax蛋白均有升高,以bax为著.低氧肺动脉高压组虽然也有表达,但程度较弱,且bcl-2表达处于优势.结论 低浓度CO可以调节bcl-2、bax凋亡基因的表达,从而促进肺动脉组织的凋亡.