人骨关节炎滑膜组织cDNA文库的构建及分析

目的:构建骨关节炎滑膜组织的cDNA文库,为筛选与骨关节炎的发生特异相关的基因及探讨骨关节炎发病机制奠定基础。方法:实验于2006-01/10在深圳市人民医院骨关节科完成,选取骨关节炎患者滑膜,以Trizol一步法从骨关节炎滑膜组织中提取总RNA,分离纯化mRNA,反转录合成双链cDNA,以pBlueScriptII为载体,构建关节炎滑膜组织cDNA文库,对随机挑取的克隆进行鉴定。结果:①总RNA及mRNA的质量:总RNA经分光光度计测定,测得mRNA的A260nm吸光度值为0.245,平均得率为0.45g/L,A260nm/A280nm=1.84,无DNA、蛋白质及小分子污染。符合建库要求。②cDNA的合成及分析:10μg mRNA反转录合成cDNA,合成的cDNA大小为0.5￣9.0kb,且主要集中在1.0￣2.0kb之间。③文库的鉴定:将50ng的cDNA与质粒载体pBlueScriptII连接过夜,采用电转化法转化受体菌DH5A,经稀释铺板测定原始文库的滴度为1.45×109pfu/L,总克隆数为4.6×105,重组率为96.2%,扩增后文库总滴度为6.4×1012pfu/L,插入片段多分布在0.5～2.6kb之间。结论:构建关节炎滑膜组织cDNA文库具有较好的库容量、较高的重组率以及较大的插入片段,为克隆关节炎相关功能基因的研究奠定了基础。     

老年妇女骨质疏松性髋部骨折的危险性预测

目的:通过建立判别方程探讨老年妇女骨质疏松性髋部骨折的危险性因素。方法:以髋部骨折老年女性患者及保健体检的老年妇女各30例为对象进行病例对照观察。分为骨折组和对照组。其中骨折组来自2002-02/2004-02深圳市人民医院骨科收治老年女性骨质疏松髋部骨折患者,对照组来自同期在该院进行社区保健体检的健康老年妇女。两组受试者均知情同意。①两组受试者髋部骨密度测定:应用DEXA骨密度测定仪及握力器,骨折组测量健侧,对照组测量左侧,颈干角和左手握拳力。②体质量指数,根据身高和体质量算出。③确定个人及家族女性骨折史。④老年女性骨质疏松性髋部骨折判别方程建立:将单因素分析有意义的因素作为预测变量,家族史(X1)、股骨颈骨密度(X2)、Ward区骨密度(X3)、颈干角(X4)、人体质量指数(X5)和左手握拳力(X6)6个因素判别因子,建立判别方程。结果:①两组患者家庭及个人骨折史差异性统计分析结果:骨折组有骨折史者显著高于对照组(18,8,χ2=6.491,P=0.011)。②老年妇女骨质疏松性髋部骨折的危险因素:为Ward区骨密度、颈干角、体质量指数和左手握拳力。③老年女性骨质疏松性髋部骨折判别方程建立:Y1=-8.802X1+88.803X2+9.936X3+8.119X4+2.634X5+22.439X6-691.647;Y0=-9.901X1+93.959X2+15.872X3+8.045X4+3.037X5+23.533X6-696.287;将判别方程进行组内回代检验,特异度为76.7%,灵敏度为86.7%,预测正确率为81.7%。④老年骨质疏松性髋部骨折的危险因素比较:用标准化回归系数作比较,颈干角为0.487,Ward区骨密度为0.472,体质量指数为0.533,左手握拳力为0.458,可见体质量指数对骨折发生的影响最大。结论:老年女性骨质疏松性髋部骨折的发生是由诸多因素造成的,髋部骨密度、髋部几何结构、体质量指数、肌肉力量与健康状况、活动量的大小、跌倒、家族女性及个人骨折史等均与髋部骨折有关。因此,只有综合考虑各因素的作用,才能准确预测骨质疏松性髋部骨折。判别方程能更全面反映骨折的危险性程度,预测意义较大。     

切除术与内固定术治疗桡骨头粉碎性骨折的疗效比较

目的:比较桡骨头切除术与切开复位接骨板内固定术治疗桡骨头粉碎性骨折的疗效。方法:28例桡骨头粉碎性骨折患者,15例行桡骨头切除术(A组),13例行切开复位接骨板内固定术(B组)。手术时平均年龄分别为41.1岁和38.2岁。平均随访时间分别为10年和3年。根据疼痛、运动范围、影像学表现和上肢力量评价疗效,结果用Broberg功能评分表和美国肩肘外科医师肘关节功能评分表分析。结果:肘关节活动度A组平均为伸直15.5°,屈曲131.4°;B组为7.1°和133.8°。A组提携角平均增加8.2°,桡骨与尺骨分离1.9mm;B组为1.5°和0.5mm。与B组相比,A组伸肘及前臂旋前旋后力量明显减弱(P<0.01)。Broberg评分A组平均为81.4分,B组为90.7分(P=0.0034)。美国肩肘外科医师肘关节功能评分A组87.3分,B组94.6分(P=0.0031)。结论:桡骨头粉碎性骨折切开复位内固定术治疗组可获得满意的活动度,与桡骨头切除术治疗组相比上肢力量明显改善且总体功能更好,桡骨头粉碎性骨折应尽可能采用切开复位内固定术治疗。     

腰椎间盘突出并神经根管狭窄的临床分析

目的：探讨腰椎间盘突出症合并神经根管狭窄的临床诊断和手术治疗。方法：对１９９２～１９９８年间,因腰椎间盘突出症合并神经根管狭窄４９例行手术治疗,术中均行神经根管扩大和探查,术后随访。结果：随访３９例,优２４例,良１１例,可３例,差１例,优良率８９．７％。结论：神经根管扩大和神经根探查减压是手术成功的关键。     

胫骨中段骨折螺钉数量的生物力学实验

背景:接骨板固定常用于胫腓骨骨折的治疗,主张使用长钢板低密度螺钉固定,但目前对于胫骨中段骨折应用螺钉多少问题看法不一,且缺少生物力学依据.目的:观察胫骨中段骨折用有限接触型动力加压接骨板内固定时螺钉数量对骨折生物力学的影响.设计、时间及地点:随机分组设计,对比观察,于2008-07/09在南方医科大学人体解剖学生物力学实验室完成.材料:选取新鲜20～40岁成人尸体胫骨标本45根,长度30～38 cm,平均34 cm.方法:45根尸体胫骨标本随机抽签法分为3组,每组15根,分别作以下3种状态下的实验.测定完整的新鲜人胫骨在扭转、三点弯曲、压缩等状态下的应力-应变指标,确定垂直压缩应力为0～1 000 N,扭转角度为0°～3°,三点弯曲应力为0～400 N.然后制成中段斜行无缺损骨折模型.以14孔不锈钢AO有限接触型动力加压接骨板固定,分别使用6,10,14枚螺丝钉,测定扭转、三点弯曲、压缩等应力-应变指标,进行统计学分析.主要观察指标:6枚,10枚和14枚螺丝钉固定不同压缩力垂直压缩时竖直方向应变及侧方应变值,不同扭转角度扭转时平均扭矩及不同加载应力三点弯曲压缩竖直方向应变.结果:6,10,14枚螺丝钉固定垂直压缩时竖直方向应变值两两比较差异无显著性意义(P>0.05).6,10.14枚螺丝钉固定侧方应变值两两比较差异无显著性意义(P>0.05).6,10,14枚螺丝钉固定扭矩两两比较差异无显著性意义(P>0.05).6,10,14枚螺丝钉固定三点弯曲竖卣方向应,变值分别为0.149±0.098,0.139±0.003,0.258±0.001,6枚螺丝钉和10枚螺丝钉相比,差异无显著性意义(P>0.05),14枚螺丝钉和其他曲种情况相比,差异有显著性意义(P<0.01).结论:材质相同、厚度相同、宽度相同、长度相同的钢板,使用不同数量螺钉(6,10,14枚),抗垂直压缩稳定性、抗扭转稳定性无明显差异,抗巧曲稳定性14枚螺丝钉反而较差.     

脊髓损伤后细胞的凋亡及其药物治疗

细胞凋亡是脊髓损伤后引起神经功能障碍及影响疗效的主要原因。本文对引起脊髓细胞凋亡的原因及其药物治疗的研究进展进行了概述。     

骨科学硕士研究生培养探索

暨南大学第二临床医学院自2008年起,在骨科学临床专业硕士研究生培养中,让学生尽早接触临床、科研和社会实践,授课中实施以问题为基础的学习,邀请放射科医生作为“联合培养导师”;并对培养方法和教师进行评价。学生普遍反映,此系统性培养方式能够促进自身对骨科学知识的全面理解,调动学习积极性和主动性,树立社会责任感,建构创新性思维。     

骨质疏松症大鼠白细胞介素6、骨钙素和骨碱性磷酸酶的表达特征

背景白细胞介素6、骨钙素和骨碱性磷酸酶均参与骨代谢过程,其与骨质疏松的发生有相关性.目的观察白细胞介素6、骨钙素和骨碱性磷酸酶在骨质疏松大鼠中的表达特征.设计随机分组观察对比实验.单位深圳市人民医院(暨南大学医学院第二附属医院)骨科.材料实验于2002-01/2003-01在深圳市人民医院动物实验室及中心实验室完成.6月龄雌性SD大鼠60只,平均体质量250 g,随机分为3组去势组,对照组,空白组,每组20只.方法去势组手术切除大鼠双侧卵巢建立骨质疏松动物模型;对照组开腹后将卵巢提出腹腔后还纳关腹;空白组不行任何处理.分别于术后2,3,4,5,6个月后每组随机抽出大鼠4只,进行骨密度、骨钙素、白细胞介素6及碱性磷酸酶检测.主要观察指标大鼠全身骨密度、血清骨钙素、血清白细胞介素6及血清骨碱性磷酸酶变化.结果60只大鼠均进入结果分析.①大鼠骨密度测量结果4,5,6个月去势组骨密度较对照组和空白组明显下降[4个月(0.139 5±0.007 8),(0.147 0±0.000 8),(0.145 9±0.002 9)g/cm2,5个月(0.137 9±0.000 9),(0.145 6±0.000 8),(0.144 7±0.000 5)g/cm2,6个月(0.122 6±0.000 4),(0.145 0±0.002 1),(0.144 0±0.000 9)g/cm2,P＜0.05或＜0.01].②大鼠血清骨钙素测量结果4个月后去势组骨钙素显著高于对照组与空白组(P＞0.05).③大鼠白细胞介素6检测结果各时间点去势组白细胞介素6均显著高对照组与空白组(P＞0.05)④大鼠血清骨碱性磷酸酶4,5,6个月去势组骨碱性磷酸酶显著高于对照组与空白组[(2026±4)比(1247±12),(1291±7)nkat/L,(2342±9)比(1273±18),(1342±12)nkat/L,(2633±15)比(1340±9),(1357±8)nkat/L,P＜0.05]结论在骨质疏松症大鼠中骨密度显著降低,白细胞介素6、骨钙素和骨碱性磷酸酶在骨质疏松症大鼠中有显著表达,可作为骨质疏松症的诊断及筛查指标.     

大鼠骨质疏松模型中血清瘦素与钙磷含量相关性研究

目的探讨大鼠骨质疏松模型中血清瘦素与血钙磷含量之间相关性。方法80只6月龄雌性SD大鼠随机分为4组,通过切除大鼠双侧卵巢建立骨质疏松动物模型。A组为正常体重去势组,B组为肥胖去势组,C组为肥胖对照组,D组为正常体重对照组。分别于术后2、3、4、5、6个月进行血清瘦素、血钙、磷含量的检测。结果双因素方差分析,血钙组间F=28.624、月间F=19.683,血磷组间F=41.016、月间F=32.177,瘦素组间F=63.056、月间F=29.853,均有统计学差异;线性回归方程分析,A、B、C组血清瘦素含量与血钙、磷含量可建立直线回归方程。结论骨质疏松模型中,大鼠血清瘦素与血钙磷含量变化成正相关。     

骨关节炎滑膜成纤维细胞与皮肤成纤维细胞基因表达的差异

背景:近年来,发现一些基因的单核苷酸多态性可能与骨关节炎的易感性有关,以往研究主要集中于骨关节炎与类风湿性关节炎滑膜细胞基因表达差异,滑膜成纤维细胞与其他组织成纤维细胞基因表达差异与骨关节炎的关系有待研究。目的:观察骨关节炎滑膜成纤维细胞与皮肤成纤维细胞基因表达的差异。设计:观察对比分析。单位:深圳市人民医院。材料:骨关节炎患者(均符合1995年美国风湿病学会的骨关节炎诊断标准)滑膜及正常志愿者皮肤由深圳市人民医院骨科提供,所有提供皮肤者均对实验项目知情同意。RPMI 1640培养基、胎牛血清、TRIZOL试剂(美国Invitrogen Life Technologies公司),pGEM-T质粒系统(美国Progema公司),Display PROFILE-BASIC及Display PROFILEProbe试剂盒(美国Qbiogen公司)。方法:实验于2005-01/06在深圳市人民医院完成。选取骨关节炎患者滑膜,经原代培养获得滑膜成纤维细胞,采用正常志愿者原代培养皮肤成纤维细胞作为对照。采用限制性酶切片段差异展示技术分离骨关节炎患者滑膜成纤维细胞与皮肤成纤维细胞差异表达的基因,使用blast比对将所得序列与Genbank中所有序列进行比对分析。主要观察指标:关节炎患者滑膜成纤维细胞与皮肤成纤维细胞基因表达的差异。结果:骨关节炎患者滑膜成纤维细胞与正常志愿者皮肤成纤维细胞相比,超氧化物歧化酶、TFPI2、CXCL2、CXCL6、转化生长因子基因表达水平较高。结论:超氧化物歧化酶、TFPI2、CXCL2、CXCL6、转化生长因子基因在骨关节炎滑膜成纤维细胞表达水平高于皮肤成纤维细胞中相应基因表达水平,表明这些基因在骨关节炎疾病的发生过程中可能起到一定作用。