中药双甲五灵冲剂对免疫性肝纤维化大鼠抗肝纤维化的分子机制研究

目的探讨中药双甲五灵冲剂对免疫诱导型肝纤维化大鼠的治疗作用及机制。方法90只雌性Wistar大鼠。10只大鼠为正常对照组,80只大鼠予尾静脉注射人血白蛋白,建立免疫损伤性肝纤维化大鼠模型,分为5组：预防组、治疗1组、治疗2组、秋水仙碱组、观察组。用光镜观察肝脏HE染色、VanGieson（VG）胶原染色,采用原位杂交及免疫组织化学染色技术检测大鼠肝脏组织中TIMP-1、TIMP-2、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA及蛋白的表达强度;用电镜观察肝脏超微结构的变化。结果免疫诱导型肝纤维化大鼠在造模结束后肝组织学改变呈进行性加重,以造模结束后3个月为著;TIMP-1、TIMP-2、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原mRNA及蛋白呈强阳性表达,电镜见观察组有较多激活的HSC及大量胶原纤维沉积在肝窦间隙及肝细胞间,经双甲五灵冲剂治疗后的大鼠与观察组大鼠相比,肝组织结构明显好转,纤维组织减少,未见到激活的HSC、TIMP-1和TIMP-2mRNA及蛋白表达与观察组相比均明显降低,Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及基因表达明显降低（P〈0．05）,并且其效果为预防组效果最好,治疗1组较治疗2组效果好,三组均明显优于秋水仙碱组。结论双甲五灵冲剂可以逆转肝纤维化,抗肝纤维化机制可能是：①抑制肝星状细胞活化,减少ECM的生成及TIMP分泌;②直接抑制TIMP—1、TIMP-2mRNA及蛋白的表达;二者共同作用使得TIMP分泌减少,从而降低对MMPs的抑制,有利于MMPs对ECM的降解;③具有加速Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解,抑制其生成及沉积的作用。     

核酶对人HCC细胞内HBeAg的抑制作用

目的观察针对ＨＢＶＣ区双位点核酶对ＨＢｅＡｇ在细胞内表达的抑制作用．方法利用亚克隆技术,从质粒ｐＧＥＭＲｚ１２３切下ＥｃｏＲⅠＢａｍＨⅠ片段,双粘端克隆于真核表达质粒ｐＢＢＳ２１２中,将该质粒与ｐ１．２Ⅱ（含ＨＢＶ全序列）,共转染人ＨＣＣ细胞（人肝癌细胞株）,观察该核酶在细胞内对ＨＢｅＡｇ合成的抑制作用．结果在人ＨＣＣ细胞中ｐ１．２Ⅱ可表达出ＨＢｅＡｇ;该核酶对ＨＢｅＡｇ的合成抑制率达６５％．结论该双位点核酶可能通过针对ＨＢＶＣ区基因的剪切作用,阻断Ｃ区基因的表达,抑制了ＨＢｅＡｇ的合成     

B型超声对门脉高压症的诊断价值

目的应用Ｂ型超声（简称Ｂ超）测量肝脏回声、脾脏大小、门静脉主干直径（ＭＰＶＤ）及脾静脉直径（ＳＶＤ）等多项指标,以探讨更准确的诊断门脉高压症的方法．方法以电子内镜直接观察有无食管静脉曲张作为金指标,将患者分为门脉高压症组（Ａ组）１０４例,男８７例,女１７例,年龄１６岁～６６岁;对照组（Ｂ组）９１例,男８１例,女１０例,年龄１６岁～６５岁．再以Ｂ超测得的ＭＰＶＤ,ＳＶＤ,脾脏厚度及肝脏回声对两组进行分析、比较．结果诊断门脉高压症的可疑指标为：ＭＰＶＤ１３ｃｍ～１４ｃｍ,门脉高压症的阳性率为５４７％;脾脏厚度４６ｃｍ～５５ｃｍ,阳性率７１６％．诊断的有力指标为：ＭＰＶＤ≥１４ｃｍ,门脉高压症的阳性率９５４％;ＳＶＤ≥０９ｃｍ,阳性率９５６％;脾脏厚度≥５５ｃｍ,阳性率９５３％;肝脏回声２,３级,阳性率９６８％．诊断的确定指标：ＳＶＤ≥０９ｃｍ＋肝脏回声２,３级;ＭＰＶＤ≥１３ｃｍ＋肝脏回声２,３级;ＭＰＶＤ＋ＳＶＤ＋肝脏回声＋脾脏厚度≥４６ｃｍ;其阳性率均为１００％．结论ＳＶＤ及肝脏回声是Ｂ超诊断本病最重要的指标,４项综合分析比单项门静脉测量符合率更高．     

西安地区丙型肝炎病毒基因分型研究

目的　了解西安地区不同人群ＨＣＶ 基因型分布．方法　先用逆转录－ 套式多聚酶链反应检测抗－ ＨＣＶ 阳性血清的ＲＮＡ, 阳性者再用限制性片段长度多态性分析法进行ＨＣＶ 基因分型．结果　１１３ 份ＨＣＶＲＮＡ 阳性血清的基因型如下：输血后丙肝组,Ⅱ型、Ⅲ型及Ⅱ／ Ⅲ混合型分别为８０ ％ ,１６－７ ％ 和３－３ ％ ．散发性丙肝组,Ⅱ型、Ⅲ型分别为７８－９ ％ 和２１－１ ％ ,未检出Ⅱ／Ⅲ混合型． 肝硬变组, Ⅱ型、Ⅲ型及Ⅱ／ Ⅲ混合型分别为８７－９ ％ ,９－１ ％ 和３ ％ ． 原发性肝癌组,Ⅱ型、Ⅲ型分别为８７－１ ％和１２－９ ％ ,未检出Ⅱ／ Ⅲ混合型． 分型总结果为：ＨＣＶⅡ型、Ⅲ型及Ⅱ／ Ⅲ混合型分别为８４－１ ％ ,１４－２ ％ 和１－７ ％ ．结论　ＨＣＶⅡ型是西安地区优势株． 不同人群中ＨＣＶ 基因型总体分布差异无显著性．     

抗HCV不同位点核酶细胞内活性的比较

研究针对ＨＣＶ 5′ＮＣＲ2 13位点和Ｃ区 4 98位点的核酶细胞内对ＨＣＶ基因表达的抑制作用。应用ＷＩＳＨ ｎｃ转基因细胞模型 ,通过脂质体法转染核酶表达载体 ,经发光检测仪测定荧光素酶报告基因的表达变化。结果表明 ,核酶 2 13和核酶 4 98均能在细胞内降低荧光素酶的表达 ,转染后 7ｄ内的抑制率为 4 2 .94 %～ 67.81% ,但两者比较无显著性差异。构建的两个核酶表达载体均能在ＷＩＳＨ ｎｃ细胞内有效地抑制ＨＣＶ基因的表达。抗HCV不同位点核酶细胞内活性的比较@贾战生!710038$西安第四军医大学唐都医院感染科 @焦成松!710038$西…     

DNA疫苗诱导小鼠特异性细胞免疫及抗乙型肝炎病毒皮下移植瘤的研究

目的观察乙型肝炎病毒(HBV)DNA疫苗(pCR3 1-S)诱导Balb/c小鼠(H-2d)的特异性细胞免疫应答及其对稳定表达HBsAg的小鼠肥大细胞瘤P815细胞(P815 HBV-S)(H-2d)成瘤性的影响.方法肌肉注射DNA疫苗,背部皮下接种P815-HBV S细胞,观察成瘤情况,4h 51Cr释放法检测小鼠脾细胞细胞毒T细胞(CTL)杀伤活性.结果DNA疫苗可以降低成瘤率,抑制肿瘤生长,延长小鼠平均存活期,提高小鼠存活率.CTL细胞杀伤活性明显增加(P＜0.001).结论DNA疫苗可以诱导细胞免疫应答,对体内HBV感染可能具有预防及治疗作用.     

前列腺素E1抗肝纤维化的临床疗效观察

目的：观察前列腺素E1对活动性肝炎肝硬化的抗纤维化疗效。方法将100例患者随机分为两组,治疗组50例以PGE160μ g加入10T葡萄糖250ml中静滴,1次／d,疗程30d。对照组以门冬氨酸钾镁30ml加入10％葡萄糖中250ml静滴,1次／d,疗程相同。两组患者性别、年龄和肝功能均有可比性。治疗前后以放射免疫法检测血清HA、IVC、LN,B超探测脾脏厚度。结果治疗组血清HA、IVC以及LN水平明显降低,与治疗前及对照组相比较差异有非常显著性（P＜0．01）,治疗组50％病例脾脏缩小。结论PGE1能明显降低肝炎肝硬化患者血清HA、IVC、LN水平,且脾脏缩小,有一定抗纤维化作用。可作为抗纤维化的治疗药物。     

肝癌组织中TIMP-1和TIMP-2的表达意义

目的 了解TIMP－1和TIMP－2在肝癌组织中的表达状态,探讨TIMP－1和TIMP－2在肝癌组织生长、侵润及转移中所起的作用。方法 以抗TIMP－1和TIMP－2单克隆抗体（mAb)为试剂,采用免疫组织化学法检测原发性肝癌、肝高分化腺癌的肝组织中TIMP－1和TIMP－2的表达,并与10例正常肝组织做对照。结果 10例原发性肝癌患的肝组织中TIMP－1和TIMP－2蛋白表达的阳性率为100％,在癌组织及非癌组织中均有表达。癌组织中的TIMP－1和TIMP－2蛋白表达的强度比较为6例高于、4例低于周围的非癌组织（慢性肝炎及肝硬化组织）,癌组织中TIMP－1和TIMP－2蛋白的表达呈散在性分布,但TIMP－1比TIMP－2表达强。9例肝高分化腺癌的腺癌组织中无TIMP－1和TIMP－2相关抗原的表达,但癌周组织的肝细胞有3例TIMP－1和TIMP－2蛋白表达为阳性。10例正常肝组织中TIMP－1和TIMP－2蛋白表达均为阴性。结论 TIMP－1和TIMP－2存在于原发性肝癌的癌组织中,其表达的部位与强度可能与癌的生长、浸润及转移有关。     

五灵胶囊治疗慢性肝炎的临床随访观察

0　引言　五灵丸治疗慢性病毒性肝炎取得了较好的疗效 [1 ] ,但五灵丸为大蜜丸 ,不易被患者所接受 ,且其消化道副作用较明显 .为此 ,我们改进剂型 ,研制成五灵胶囊 ,为明确其能否保持远期疗效 ,我们对用该药治疗的患者进行随访观察 ,同时与五灵丸的疗效进行比较 .1　对象和方法1.1　病例选择　按慢性肝炎的诊断标准选择住院患者 10 0例 ,随机分为两组 .治疗组为五灵胶囊组 ,对照组为五灵丸组 .每组各 5 0例 .治疗组轻度 19例 ,中度 2 0例 ,重度 11例 .对照组轻度 2 0例 ,中度 18例 ,重度 12例 .两组均选择 18～5 8岁 ,病程 1～ 2 0 a.平均 4…     

基因疫苗诱导小鼠抗HBV皮下移植瘤免疫研究

目的　观察 ＨＢＶ ＤＮＡ 疫苗（ｐＣＲ３－１Ｓ） 诱导Ｂａｌｂ／ ｃ 小鼠（ Ｈ２ｄ） 的特异性细胞免疫应答及其对稳定表达ＨＢｓＡｇ 的小鼠肥大细胞瘤Ｐ８１５ 细胞（Ｐ８１５ＨＢＶＳ） （ Ｈ２ｄ） 成瘤性的影响．方法　肌肉注射ＤＮＡ 疫苗,背部皮下接种Ｐ８１５ＨＢＶＳ 细胞,观察成瘤情况,４ ｈ ５１Ｃｒ 释放法检测小鼠脾细胞ＣＴＬ 活性．结果　接种 ＤＮＡ 疫苗后小鼠成瘤率为１２－５ ％ , 对照组为１００ ％ ． 小鼠平均存活期大于３８－２ ｄ ,对照组为２８－４ ｄ ,４０ ｄ 后小鼠存活率为８７－５ ％ ,对照组为０ ％ ． ＣＴＬ 细胞杀伤活性明显增加,ｐＣＲ３－１Ｓ 组５１ ％ ,对照组为２１ ％ （ Ｐ＜ ０－００１） ．结论　ＤＮＡ 疫苗可以诱导细胞免疫应答,对体内ＨＢＶ 感染具有预防及治疗作用．