荧光定量逆转录-聚合酶链反应方法快速检测甲1型流行性感冒病毒核酸

目的建立特异、快速、敏感的TaqMan荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,用于检测甲1型流行性感冒(流感)病毒核酸.方法在甲1型流感病毒血凝素基因的保守区设计引物和TaqMan探针,对其进行筛选,同时对荧光定量RT-PCR反应条件和反应体系进行优化,验证该方法的特异性、敏感性、重复性,并对疑似流感患者含漱液标本进行检测.结果该方法对甲1型流感病毒的检测具有高度的特异性,对甲3型流感病毒、乙型流感病毒、禽流感病毒H5、严重急性呼吸道综合征病毒、麻疹病毒及其它呼吸道病毒均无交叉反应,检测的灵敏度达0.1TCID50.采用该方法从临床疑似患者含漱液中对甲1型流感病毒核酸的检出,比采用狗肾传代细胞进行病毒分离更为敏感.从病毒核酸提取至检测完成仅需3h左右,操作简便,重复性好,且大大减少了常规RT-PCR检测产物的污染机会.结论新建立的TaqMan荧光定量RT-PCR是一种快速检测甲1型流感病毒的特异、敏感的方法,非常适合于疑似流感爆发疫情的应急诊断和鉴别诊断.     

荧光定量RT-PCR快速检测乙型流感病毒核酸

目的建立以特异性荧光探针为特点的TaqMan荧光定量RT-PCR方法用于检测乙型流感病毒核酸.方法根据GenBank登录的流感毒株序列,应用生物学软件进行序列比对,在乙型流感病毒核蛋白(NP)基因的保守区设计引物和TaqMan探针进行筛选,对荧光定量RT-PCR反应条件进行优化,检测该方法的特异性和灵敏度.此外还对疑似乙型流感含漱液标本进行检测.结果该方法对乙型流感病毒的检测有高度的特异性,对甲1型、甲3型、禽流感病毒H5、SARS病毒及其他呼吸道病毒均无交叉反应,检测的灵敏度达0.01 TCID50,可从疑似流感患者含漱液中直接检测流感病毒核酸,从病毒核酸提取至完成检测仅需3 h左右.结论本研究建立的TaqMan荧光定量RT-PCR是一种快速检测乙型流感病毒特异、敏感的新方法.     

多重逆转录-聚合酶链反应对甲1与甲3型流行性感冒病毒神经氨酸酶亚型的快速鉴定

为建立流行性感冒 (流感 )病毒甲1、甲3 型神经氨酸酶 (NA)N1与N2 亚型的快速鉴别方法 ,通过对大量NA基因序列的比较 ,分别在N1与N2 亚型的保守区域设计特异性引物 ,采用多重逆转录 聚合酶链反应 (MRT PCR)进行NA基因扩增 ,并评价了其灵敏度和特异性。结果表明 :MRT PCR能特异性扩增甲1、甲3 型流感病毒NAN1与N2 亚型基因 ,灵敏度为 0 1TCID50 ,可从临床患者含漱液中直接检测到N1、N2 基因。MRT PCR方法不仅可作为甲型流感病毒NA亚型的快速鉴定方法 ,而且可以作为人类甲型流感病毒基因快速诊断方法的补充 ,应用于流感爆发疫情的应急诊断。     

限制性酶切片段长度多态性分析用于乙型流行性感冒病毒巴拿马株与维多利亚株的快速鉴定

利用限制性酶切片段长度多态性分析(RFLP)鉴别乙型流行性感冒(流感)病毒的巴拿马株与维多利亚株,对乙型流感病毒血凝素(HA)基因采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增后,用HindⅢ做酶切反应并进行琼脂糖凝胶电泳.结果显示:乙型流感病毒维多利亚株或巴拿马株HA基因均能被特异性引物所扩增,且与甲1与甲3型流感病毒无交叉反应.该片段经HindⅢ酶切后,乙型流感病毒巴拿马株在电泳谱上出现603bp与242bp的2个片段,而乙型流感病毒维多利亚株在该片段无HindⅢ酶切位点,仍呈872bp的一个片段.表明该方法不仅可作为常规血清学方法的补充,对乙型流感病毒维多利亚株与巴拿马株作出正确判定,而且可快速敏感地从临床标本中直接对两类乙型流感毒株进行鉴别.     

91例成人麻疹血清流行病学研究

目的探讨浙江省成人麻疹病例增多的原因。方法对4起麻疹流行中的91例成人患者,采集急性期和恢复期双份血清,检测麻疹血凝抑制抗体,用酶联免疫吸附试验测定IgG、IgM抗体。结果91例患者被确认为麻疹病例,发病年龄高峰在15~30岁。同时以急性期、恢复期IgMI、gG抗体的分布为标识进行分类,推算出91例患者中,麻疹减毒活疫苗(MV)原发性免疫失败或未免疫者为71例,占患者总数的78.0%;继发性免疫失败者为20人,占患者总数的22.0%。MV未免疫与原发性免疫失败病例中,有87.3%为未免疫或接种史不详。结论对不同人群应采取针对性的免疫措施与方案,以建立与完善人群的麻疹免疫屏障。     

浙江省不同时期人群麻疹血凝抑制抗体动态模型研究

目的研究麻疹疫苗高覆盖率情况下,人群的麻疹抗体消长动态变化。方法对浙江省1989年与2004年的各年龄组人群麻疹血凝抑制(HI)抗体几何平均滴度(GMT),以建立数学模型的方法进行分析。结果建立的两个不同时期的数学模型拟合优度理想,直观地反映了目前及15年前各年龄组人群的HI抗体动态变化。虽然各年龄组人群的麻疹HI抗体GMT值均呈下降趋势,但现阶段各年龄组人群的GMT值要较15年前下降3.6左右。结论今后人群的麻疹HI抗体GMT值还将继续下降,在制订免疫策略时应该引起关注。     

原发性甲状旁腺功能亢进症伴多发棕色瘤1例的护理

总结1例原发性甲状旁腺功能亢进症伴多发棕色瘤患者的护理体会。护理重点:加强围手术期血钙监测和管理,动态评估和控制疼痛,预防病理性骨折和下肢深静脉血栓形成,做好出院宣教和随访管理。本例患者术后3 d血钙为2.53 mmol/L,未出现病理性骨折,情绪平稳,坐轮椅出院。术后3个月随访恢复良好,在家人搀扶下能下床活动,生活基本能自理。     

CT诊断弥散性肺疾病

<正>弥散性肺疾病(diffuse lung disease,DLD)泛指在影像学上呈两肺弥散性或多灶性分布的各种形态的病变,病理学以肺实质和(或)肺间质广泛浸润为特征的一大组异质性疾病群。所谓"异质性"     

2002年浙江无菌性脑膜脑炎病原学分析

浙江省杭州市和诸暨市2002年5～6月发生病毒性脑膜脑炎流行。我们对两地进行了流行病学调查和标本采集。并进行肠道病毒分离和肠道病毒核酸检测。现将结果报道如下。     

高臭氧紫外线食具消毒柜对脊髓灰质炎病毒灭活效果观察

为观察高臭氧紫外线食具消毒柜对脊髓灰质炎病毒的灭活效果 ,采用载体定量灭活试验进行了检测。结果 ,在环境温度为 2 0～ 2 5℃ ,相对湿度 5 0 %～ 70 %的条件下 ,开机 4min ,柜内紫外线辐照强度为 14 0 0～ 16 0 0 μW/cm2 ,臭氧浓度达到 4 0 .0mg/m3 以上。消毒作用 6 0min +烘干 4 5min对玻片上脊髓灰质炎病毒的平均灭活对数值≥ 4 .0 0。玻片染毒于不同温湿度下 ,干燥对染毒载体的病毒回收滴度有一定影响 ,4℃干燥对病毒回收滴度影响不大 ,使用不干燥的染毒载体进行灭活试验 ,不影响病毒抗力。结果显示 ,该消毒柜能灭活玻片上脊髓灰质炎病毒。