八肽胆囊收缩素对内毒素血症大鼠CD14表达的抑制作用

目的CD14是宿主识别细菌脂多糖(1ipopolysaccharide,LPS)的关键受体,以膜结合型(membrane-associatedCD14,mCD14)和可溶性(solubleCD14,sCD14)两种形式存在.CD14结合LPS的脂质A介导信号传递,诱生大量炎症介质.而LPS又可直接或间接上调CD14的表达,促进炎症反应,最终引起多器官衰竭.应用CD14抗体可明显减轻细胞对LPS的反应,提高内毒素血症家兔的生存率.目前CD14已成为治疗内毒素休克的新靶子.我们以往的研究表明八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapeptide,CCK-8)具有明显的抗内毒素休克(endotoxicshock,ES)作用,可减轻ES大鼠肺、肝、肾组织炎症反应,降低肺动脉压,提高平均动脉压,改善生存率,但其作用机制尚未完全阐明.为深入探讨CCK-8抗ES作用的机制,本研究观察了CCK-8对内毒素血症大鼠肺组织及血清中CD14蛋白表达的影响.方法静脉注入LPS(5mg/kgdw)6h复制大鼠内毒素血症模型,用Westernblot技术检测血清中sCD14蛋白的表达,用免疫组织化学技术检测肺组织中CD14的表达及分布.静脉预注入CCK-8(40μg/kgdw)和/或CCK受体拮抗剂丙谷胺(1mg/kgdw)10min后注入LPS6h,观察上述指标.结果(1)大鼠血清中sCD14蛋白存在两种分子形式sCD14α(49kD)及sCD14β(55kD),注入LPS后6h二者表达均明显增加,静脉预注入CCK-8则可显著抑制其表达,且该作用可被丙谷胺拮抗;(2)对照组大鼠肺组织CD14只表达在巨噬细胞,而在内毒素血症大鼠肺组织中,不仅巨噬细胞上的CD14阳性信号增强,表达CD14的巨噬细胞增多,而且在支气管上皮细胞表面也检测到CD14阳性信号;静脉预注入CCK-8则明显减少了CD14的表达,丙谷胺可拮抗CCK-8的作用.结论CCK-8对内毒素血症大鼠肺组织CD14及血清sCD14的表达具有抑制作用,降低大鼠对LPS的敏感性,可能是CCK-8抗ES作用的重要机制之一.     

同位素标记探针对检测肺组织氧合血红素酶表达的影响

由于同位素标记探针特异性强 ,灵敏度高 ,一直是基因表达实验研究中常用的标记物 ,我们在检测大鼠肢体缺血再灌后不同时点 ,肺组织氧合血红素酶 (ＨＯ - 1)的表达时 ,用 [α - 3 2 Ｐ]ｄＣＴＰ标记ＨＯ - 1探针 ,并于标记后进行探针纯化。现报道其效果与不纯化探针的比较。材　料　和　方　法1　随机引物标记试剂盒 (北京鼎国生物工程公司产品 )。2　模板ＤＮＡ取肢体缺血再灌后大鼠肺组织 10 0ｍｇ按常规方法提取ＤＮＡ。3　探针标记 ,反应体系用 2 5 μＬ无菌水溶解模板ＤＮＡ 2 5ｎｇ ,加 1 0 μＬ随机引物混匀 95℃ - 10 0℃ 2ｍｉｎ ,…     

河北汉族人群D11S2010基因座的遗传多态性研究

人类基因组的基因及基因外区域的编码区及非编码区含有2－4bp的短串联重复序列（short tandem repeat,STR)又称微卫星DNA序列。目前STR位点遗传多态性已成为人类学、医学、法医学各界广泛研究的热点,国内外学者已陆续报道了不同的STR位点,但D11S2010位点的报道国内尚未见到。为了解中国大陆人群D11S2010基因座的遗传多态性,作者采用聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR)技术和聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,并结合银染的方法,对中国河北省168名汉族健康无关个体进行了调查,首次获得了河北省汉族人群D11S2010基因座群体遗传数据,结果报告如下。     

八肽缩胆囊素受体在血管内皮细胞中的表达及脂多糖的影响

目的 观察八肽缩胆囊素受体(CCK-R)mRNA在人脐静脉内皮细胞株ECV-304中的表达,并探讨内毒素脂多糖(LPS)对CCK-AR、CCK-BR mRNA表达的影响.方法 培养人脐静脉内皮细胞株ECV-304,以LPS 0.01、0.1、1、10 mg/L孵育ECV-304 2 h或用1 mg/L LPS孵育ECV-304 0.5、2、6、12 h,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测CCK-AR、CCK-BR的mRNA表达,并对扩增产物的特异性进行测序分析.结果 与空白对照组比较,0.01、0.1及1 mg/L LPS孵育细胞2 h可剂量依赖性引起CCK-AR及CCK-BR的mRNA表达明显升高(P均<0.05),其中0.01 mg/L LPS诱导CCK-AR mRNA效应不明显,但可明显诱导CCK-BR mRNA表达;与1 mg/L LPS组比较,10 mg/L LPS孵育细胞2 h CCK-AR及CCK-BR的mRNA表达未继续出现明显升高(P均>0.05).与空白对照组比较,1 mg/L LPS孵育细胞0.5～2 h CCK-AR及CCK-BR的mRNA表达呈时间依赖性升高(P均<0.05);与LPS孵育2 h比较,1 mg/L LPS孵育细胞6 h CCK-AR及CCK-BR的mRNA表达明显下降,但仍高于空白对照组(P均<0.05);与LPS孵育6 h比较,1 mg/L LPS孵育细胞12 h CCK-AR及CCK-BR的mRNA表达进一步降低(P均<0.05),且与空白对照组比较已无显著差异(P均>0.05).结论 CCK-AR与CCK-BR的mRNA在ECV-304中均有表达;LPS可诱导CCK-AR及CCK-BR的mRNA表达上调.     

八肽胆囊收缩素对脂多糖诱导离体兔肺动脉反应性变化的影响

目的与方法：为探讨胆囊收缩素（ＣＣＫ）缓解内素休克时肺动脉压增高的作用机制。应用离体血管技术观察ＣＣＫ对内毒素主要成分脂多糖（ＬＰＳ）诱导兔肺动脉反应性变化的影响。结果 ＬＰＳ（４μｇ／ｍＬ,２ｈ）引起离肺动脉对α受体激动剂苯肾上腺素（ＰＥ）的收缩反应增强,降低对乙酰胆碱（ＡＣｈ）介导的内皮依赖性舒张反应,ＣＣＫ－８（０．１μｇ／ｍＬ和０．５μｇ／ｍＬ）逆转了ＬＰＳ的上述作用,ＣＣＫ－８（０．５μ     

土木香中倍半萜内酯抗肿瘤活性及构效关系研究

目的通过检测土木香中3种倍半萜内酯化合物异土木香内酯(isoalantolactone,1),2-羟基-11,13-二氢异土木香内酯(2-hydroxy-11,13-dihydroisoalantolactone,2)和11,13-二氢异土木香内酯(11,13-dihydroisoalan-tolactone,3)抗肿瘤活性,探讨化合物的构效关系。方法利用MTT比色法检测3种倍半萜内酯化合物对人肺肿瘤细胞增殖活性的影响;以移植性小鼠肝癌H22为模型,检测异土木香内酯对在体肿瘤生长以及机体免疫能力的影响;以体外培养的仓鼠肺成纤维细胞(CHL)为对象,评价异土木香内酯对正常细胞的毒性。结果化合物1(异土木香内酯)对人非小细胞肺肿瘤细胞(A549、RERF-LC-jk、QG-56)的增殖抑制作用强于顺铂,对人小细胞肺肿瘤细胞(PC-6和QG-90)的增殖抑制作用与顺铂相同,而化合物2和3对各种实验用肿瘤细胞的增殖增不显示抑制活性;化合物1对肝癌H22生长具有较强的抑制活性,但对小鼠胸腺指数和脾指数的影响与对照组相比均没有显著差异;化合物1对体外培养的CHL细胞显示较弱的毒性。结论化合物1显示较强的体内外抗肿瘤活性,而化合物2和化合物3对体内外肿瘤的生长均不显示抑制活性,说明体内外抗肿瘤活性可能与其具有的α,β-不饱和五元内酯环的结构有关,不饱和的环外双键氢化饱和后形成的饱和五元内酯环,可能是体内外抗肿瘤活性消失或减弱的原因;增强机体免疫力是其抗肿瘤作用的机制。     

细胞因子诱导的蛋白质巯基亚硝基化对大鼠成纤维细胞样滑膜细胞中CREB蛋白的DNA结合活性的影响

目的:观察重组白细胞介素-1β(rIL-1β)和重组干扰素-γ(rIFN-γ)联合诱导的亚硝基化反应对cAMP反应元件结合蛋白(CREB)的DNA结合活性的影响。方法:(1)分别用细胞因子(rIL-1β和rIFN-γ的混合物)、诱导型一氧化氮合酶抑制剂氨基胍(AG)及溶剂单独或联合孵育大鼠滑膜细胞12h,收集培养液上清进行一氧化氮(NO)含量测定;并提取各组总蛋白,其中细胞因子组的蛋白与巯基氧化修饰还原剂二硫苏糖醇(DTT)反应15min,采用生物素转化法与免疫印迹技术检测各组蛋白质的亚硝基化修饰水平。(2)分别用rIL-1β、rIL-1β和rIFN-γ的混合物、AG及溶剂单独或联合孵育滑膜细胞12h,提取各组核蛋白,其中rIL-1β+rIFN-γ组核蛋白与DTT反应15min,采用电泳迁移率改变分析技术观察各组CREB的DNA结合活性。结果:(1)细胞经rIL-1β和rIFN-γ孵育后,NO生成增多(P0.01),蛋白质的亚硝基化修饰水平升高,而AG降低了NO的水平(P0.01)并抑制了亚硝基化反应,DTT与总蛋白直接作用也可抑制亚硝基化反应。(2)rIL-1β和rIFN-γ共孵育明显抑制rIL-1β单独诱导的CREB的DNA结合活性(P0.01),而AG抑制了rIL-1β和rIFN-γ的作用,DTT与核蛋白直接反应也可逆转细胞因子共孵育的作用,使CREB的DNA结合活性增高(P0.01)。结论:IL-1β和IFN-γ共同孵育滑膜细胞可诱导细胞适度产生NO,使细胞内蛋白质的亚硝基化修饰水平升高,导致CREB发生可逆性巯基氧化修饰,抑制其DNA结合活性。     

过氧亚硝基阴离子参与介导内毒素所致急性肺损伤的研究

目的 探讨过氧亚硝基阴离子（ＯＮＯＯ＾－）在脂多糖（ＬＰＳ）所致急性肺损伤中的作用。方法 用免疫组织化学技术检测内毒素休克时ＯＮＯＯ＾－生成的标志物硝基酷氨酸在大鼠肺脏内的定位与分布。将不同剂量的外源性ＯＮＯＯ＾－经气管快速推注入健康大鼠肺脏，定量检测肺系数、肺湿干重比、肺水含量和伊文思蓝含量，光镜观察单层蓝标记肺微血管数量及病理变化。结果 ＬＰＳ静脉注射２ｈ和６ｈ后，肺脏有明显损伤及硝基酷氨酸产     

河北汉族人群miniSTR D17S974 、D11S4463基因座复合扩增及遗传多态性研究

在法医DNA检验中,短串联重复序列(shorttandem repeat,STR)技术已经广泛用于个人识别和亲子鉴定。但对于法医检验中一些微量以及降解的检材,因STR技术扩增片段较长(约300~400 bp)不能成功得出结论,会出现“优势扩增”或者“无效扩增”;而miniSTR分析技术是将引物设计得尽可能靠     

过氧亚硝基阴离子致大鼠肺微血管壁通透性增高的研究

目的:探讨过氧亚硝基阴离子(ONOO^-)对肺微血管内皮屏障功能的影响和在急性肺损伤发生中的意义。方法:向SD大鼠气管内推注不同浓度的ONOO^-、分解 ONOO^-或溶剂2 h后,检测肺微血管壁通透性变化和肺组织病理学变化,并检测ONOO^-引起正常肺匀浆MDA含量变化。结果: ONOO^-推入气管后,肺系数、肺湿干重比以及肺含水量和伊文思兰含量明显增高呈现剂量效应关系;并可导致肺泡明显萎陷、肺泡壁毛细血管明显扩张充血及局灶性出血,内皮细胞肿胀、核深染及脱落。ONOO^-造成正常肺匀浆MDA含量增加。 结论: 外源性ONOO^-气管推注后可导致明显的肺微血管内皮屏障功能障碍,提示肺内源性ONOO^-生成增多时可能参与介导急性肺损伤的发生。