鼠尾胶在小鼠外周血间充质干细胞分离培养中的作用

背景:动物和人外周血中分离出的间充质干细胞生长繁殖受分离方法、培养条件等因素的影响.目的:采用重组人粒细胞集落刺激因子动员小鼠外周血间充质干细胞,体外培养条件中加入鼠尾胶包被,观察其对细胞分离、培养、增殖的影响.设计、时间及地点:开放性实验,于2005-05/2007-12在郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所完成.材料:昆明小鼠20只随机分为鼠尾胶包被组和不包被对照组,每组10只.方法:小鼠皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子80μg/(kg·d)连续动员5d,最后一次注射后6h取外周血.肝素抗凝后,采用全血细胞分离培养,用含体积分数为0.15胎牛血清DMEM培养基,分别接种于包被和未包被鼠尾胶的12孔板,接种密度为1×105/孔,48h后半量换液以后每3天换液1次,培养10d.主要观察指标:[1]鼠尾胶包被的培养板对形成成纤维样细胞集落的影响.[2]成纤维样细胞集落中的间充质干细胞表面标记流式检测结果.[3]成纤维样细胞集落成骨、成脂肪诱导后嗜银法和油红O法染色鉴定.结果:[1]使用鼠尾胶包被的培养板可增加重组人粒细胞集落刺激因子动员后外周血成纤维样细胞集落出现的频率(P＜0.05).[2]经流式细胞术鉴定形成成纤维样细胞集落的细胞不表达CD34、CD133,表达CD90、CD105.[3]成骨、成脂肪诱导后细胞嗜银法和油红0法染色鉴定均呈阳性.结论:培养的细胞符合公认间充质干细胞的特征,鼠尾胶可增加培养皿的黏附性促进间充质干细胞分离.