曲霉属蛋白表达中高效启动子的应用研究

曲霉属丝状真菌,尤其是黑曲霉(Aspergillus niger)和米曲霉(Aspergillus oryzae),常被作为宿主菌表达生产各类蛋白并在工业上得以广泛使用.工业生产中,为了提高蛋白产量,获取更大的经济效益,需要对影响蛋白表达的各种因素进行改进,使用高效的启动子便是其中策略之一,强启动子的使用能够从转录水平上提高同源或是异源蛋白在曲霉中的表达产量.该文介绍了曲霉蛋白表达过程中常见启动子的使用情况,重点阐述了国内外改进启动子活性构建高效启动子的几种策略,对新型启动子在曲霉蛋白表达中的应用做出了展望.     

红曲菌两种荧光代谢产物稳定性研究

探讨红曲菌两种荧光代谢产物对强酸、强碱、光和热的稳定性。结果表明,两种荧光代谢产物在强碱溶液中不稳定,在酸性条件下较稳定;两者的热稳定性和光稳定性均较差。     

同时检测恩诺沙星和环丙沙星单克隆抗体的制备

为了产生同时检测恩诺沙星和环丙沙星的抗体,本研究采用戊二醛法制备突出恩诺沙星和环丙沙星共同结构的人工抗原。免疫Balb/c 小鼠的结果显示：使用糖基化载体所制备的免疫抗原,能够大幅提高所产生特异性抗体的滴度。通过细胞融合,筛选出一株对恩诺沙星和环丙沙星IC50 值分别为9.6ng/mL 和10.2ng/mL 的单克隆抗体。     

幽门螺杆菌全菌抗原对母鸡的免疫原性

目的　研究幽门螺杆菌 (Hp)全菌抗原的免疫原性及Anti Hp IgY的预防和治疗作用。方法　用超声Hp波粉碎的Hp抗原免疫产蛋母鸡 ,通过IHA和ELISA间接法检测母鸡的免疫应答。用SDS PAGE分析Hp全菌抗原 ,并用抗Hp IgY做免疫印迹。结果　母鸡免疫成功率为 10 0 %。初免 45d后 ,抗Hp IgYIHA效价为 1∶10 2 4,ELISA效价超过 1∶45 0 0 0。Hp抗原的SDS PAGE显示有 2 6条蛋白染色带 ,其中主带有 10条 ,免疫印迹表明Hp的超声粉碎物特异性抗原蛋白带相对分子质量为 70 0 0 0、6 6 0 0 0、42 0 0 0、3430 0、2 95 0 0、2 70 0、185 0 0。结论　本研究为工业化制备抗Hp IgY奠定了基础     

赭曲霉毒素A的检测方法的研究进展

赭曲霉毒素(OTA)是烈性的肾脏毒和肝脏毒,并具有致癌、致畸和致突变性。建立相关检测方法对防止OTA进入人类食物链具有重要意义。本文针对OTA的三种检测方法：薄层层析法、高压液相色谱法、酶联免疫吸附法做一综述。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇人工抗原的研制

本研究利用丁基硼酸封闭DON的7,15-羟基,戊二酸酐酰化3-羟基合成3-HG-DON,通过活泼酯法将3-HG-DON偶联到载体蛋白OVA,制备检测抗原。采用CDI法将DON分子与载体蛋白MBSA偶联制备的免疫抗原免疫3只BALB/c小鼠,经4次免疫后,1号小鼠血清抗体效价达1∶25600,且小鼠抗DON多克隆抗体与DON-HG-OVA的结合能被DON阻断。     

毛细管气相色谱法测定小麦和玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇

本文采用毛细管气相色谱法测定了小麦和玉米中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)的含量,小麦、玉米样品分别用乙腈-水(84:16,V/V)提取,小麦样品提取液用硅镁型吸附剂净化,玉米样品提取液用硅镁型吸附剂和活性炭二步净化,采用N-七氟丁酰咪唑(HFBI)为衍生剂,带电子捕获检测器的GC进行检测。DON加标量为0．5～1．5mg/kg时,5次重复实验的平均回收率:小麦样品为82．2%～98．5%,玉米样品为86．0%～103．4%,相对标准偏差(RSD)分别为6．2%～7．6%和6．4%～8．0%,该法DON的最低检出限为0．01mg/kg,线性范围为0．075～15mg/k8。用该法对21个小麦样品与20个玉米样品中DON的含量进行检测,其中小麦样品中DON含量为0．153～4．618mg/kg,污染率为47．6%,超标率为9．5%;而玉米样品中DON含量为0．116～3．004mg/kg,污染率为85%,超标率为20%。     

利用噬菌体肽库淘选玉米赤霉烯酮的模拟表位

目的:利用噬菌体肽库淘选玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)模拟表位。方法:以抗ZEN单克隆抗体为配体,利用噬菌体七肽库淘选ZEN的模拟表位,采用了逐轮减少抗体包被浓度,交换使用封阻液中蛋白质种类的方法,经三轮淘选后,随机挑取20个克隆测序并以ELISA方法及竞争ELISA实验,以确定阳性克隆。结果:获得10种序列,ELISA显示其中两种序列为阳性克隆,抑制率达90%以上,其氨基酸序列分别为DAVILLM,HHCHWWH。结论:噬菌体展示技术可淘选到ZEN的模拟表位,淘选到的噬菌体粒子可作为毒素的替代品建立免疫学检测方法。     

抗乳糖不耐受添加剂的研究

对产乳糖酶的三株乳酸菌进行协同发酵制成抗乳糖不耐受添加剂,冻干的乳糖酶在4℃贮存三个月活性基本不变,确立抗乳糖不耐受添加剂乳酸菌添加浓度为107/L。     

检测赭曲霉毒素A(OTA)的酶联免疫吸附法(ELISA)体系的建立

本文分别以自制抗-OTA兔血清抗体(IgG)及鸡卵黄抗体(IgY)就影响检测OTA的ELISA(酶联免疫吸附法)体系因素进行了探讨,建立了检测OTA的ELISA方法。鸡卵黄抗体的最佳ELISA操作参数为:包被抗原浓度为7.5μg/ml,封阻剂浓度为2.5%,抗体稀释倍数为1000,酶标二抗稀释倍数为14000;兔血清抗体的最佳ELISA操作参数为:包被抗原浓度为2.5μg/ml,封阻剂浓度为2.5%,抗体稀释倍数为8000,酶标二抗稀释倍数为10000。IgG和IgY的检测灵敏度分别为10ng/ml和1ng/ml。