骨髓增生异常综合征患者地西他滨治疗后DNA甲基化水平变化

目的 了解骨髓增生异常综合征(MDS)患者地西他滨治疗后DNA甲基化水平的变化.方法 7例MDS患者难治性贫血伴原始细胞增多Ⅰ型或Ⅱ型(RAEBⅠ/Ⅱ)接受规律的地西他滨治疗,5天方案(4例)和3天方案(3例),每个疗程分4个时间点采集其外周血,实时荧光定量聚合酶链反应( real time-Q-PCR)方法检测外周血P15和CDH1基因的甲基化水平.结果 用药前3例患者(例2、例4和例7)P15甲基化水平较高(20％～65％),CDH1均较低(0.5％～5％).无论5天还是3天方案,用药前甲基化水平越高,用药后下降越明显,患者用药第5/7天后P15、CDH1甲基化水平下降幅度最大,达20％～60％,P15可维持在下降后的水平,在随后的治疗中未再出现明显的下降,但是CDH1的波动较大,用药期间CDH1甲基化水平可升至≥用药前水平.目前的数据表明甲基化的变化与血象变化不一致.应用重复测量方法分析5天与3天方案两个基因甲基化水平变化,两种不同方案组间去甲基化水平差异无统计学意义(均P ＞0.05);有血液学改善的患者与未改善患者的去甲基化程度差异无统计学意义.结论 地西他滨治疗后P15和CDH1的甲基化水平均有不同程度降低,但甲基化水平与治疗方案和疗效无关.     

凋亡抑制基因aven在急性髓系白血病的表达及其临床意义

本研究旨在探讨AML患者凋亡抑制基因avertmRNA的表达情况,分析其临床意义,为预后评估提供实验依据。应用实时荧光定量PCR方法检测69例初诊AML患者外周血白细胞avenmRNA的表达水平,分析avenmRNA的表达水平与患者的年龄、性别、白细胞数,血小板计数、血红蛋白和LDH水平、外周血和骨髓的原始细胞比例、FAB分型、患者的疗效和复发的关系,21名正常人的外周血作为对照。结果表明：69例初诊AML患者avenmRNA表达水平的中位值为37．2（11．72—178．93）％,正常人外周血白细胞aven mRNA表达水平中位值为28．81（10．81-50．98）％,AML患者avenmRNA表达水平明显高于正常人（p=0．006）。avenmRNA的表达水平与患者的年龄具有明显的相关性（r=0．25,P=0．039）,以AML患者中位年龄（44岁）为界分为2组,年龄大于／等于44岁组aven mRNA表达水平[中位值50．08％,（18．88—152．02）％]明显高于年龄小于44岁组[中位值32．41％,（11．72—178．93）％],（P=0．018）。aven mRNA的表达水平与患者Hb水平和FAB分型具有明显的相关性（r=0．29,P=0．019;r=0．253,P=0．036）。2个化疗疗程后avenmRNA表达水平低于中位值组的完全缓解率（25／30,83．33％）高于avenmRNA表达水平高于中位值组（21／30,70％）,但差别无统计学意义（P=0．22）。复发患者avenmRNA的表达水平与无复发者相比无明显升高（P=0．076）。结论：初诊AML患者凋亡抑制基因avenmRNA的表达水平明显升高,可能与AML的发病有关,但尚未发现基因avcilmRNA的表达情况与疾病的疗效和复发之间的关系。     

实时定量PCR检测骨髓增生异常综合征患者多个基因甲基化水平

Objective To analyze the promoter methylation levels of p15、 CDH1、 DAPK and HICI genes of patients with myelodysplastic syndrome (MDS) and explore the relationship between the level of methylation and clinical features. Methods DNA methylation levels of p15、CDH1 、DAPK and HICI in peripheral blood (PB) or bone marrow (BM) samples from 52 MDS patients were detected by real-time quantitative PCR. The correlation of the methylation level with clinical features and hematological findings was analyzed. 38 de novo AML patients and 46 normal individuals served as controls. Results The methylation levels of p15 、CDH1 、DAPK and HICI were 16.23 ± 21.69,6.59 ±9.39,0. 14 ±0. 11 and 7.81 ± 9.70 in BM,and 14.96 ± 20.16,6.00 ± 9.26,0.12 ± 0. 14 and 6.74 ± 9.72 in PB, respectively from 18 MDS patients,and the difference between BM and PB was not statistically significant (P ＞0.05). The methylation levels of p15 (14.70 ± 18.17) and CDH1 (6.61 ±8.79) genes in high risk (RAEB Ⅰ / Ⅱ) MDS were significantly higher than in low risk (RCMD/RARS/5q -, p15: 1.99 ± 1.59, CDH1: 1.23 ± 1.14 and RCMD, p15:3.02 ±3.42, CDH1:1.53 ±2.06) MDS or control (p15:1.69 ± 1.82, CDH1: 1.01 ± 1.12) (P ＜0.05).The methylation levels of DAPK gene had no difference among subtypes of MDS, and that of HIC1 gene only differed between RAEB Ⅰ / Ⅱ (9.16 ± 11.95) and control (2.49 ± 2.26) (P = 0. 042). The difference of methylation levels of p15 、CDH1 、DAPK and HICI in BM was statistically significant among subtypes of MDS (P=0. 001, 0. 003 ,0. 039,0. 023 , respectively). And so did of p15 and DAPK in PB (P=0. 013, 0.006,respectively). The methylation level of p15 and CDH1 was significantly correlated with IPSS classification and blasts percentage in BM. Conclusions p15 and CDH1 genes are special hepermethylation genes in MDS.Methylation level of HIC1 gene showed an upward tendency from low risk to high risk MDS.     

间充质干细胞治疗激素耐药重度急性移植物抗宿主病

目的:探讨体外扩增骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)治疗激素耐药重度急性移植物抗宿主病(acute graft-versus-host disease, aGVHD)的临床疗效和安全性.方法:4例恶性血液病患者经HLA匹配同胞外周血干细胞联合骨髓移植后,诊断为激素耐药重度aGVHD,在原有免疫抑制治疗的基础上给予MSCs 0.5 × 106/kg受者体重.结果:4例患者经静脉输注体外扩增MSCs共9例次,未发现输注相关不良反应.所有患者均显示不同程度的治疗反应,总有效率达100%.4例发生消化道aGVHD,完全缓解2例,显著缓解1例,部分缓解1例.2例合并肝脏aGVHD患者中1例获完全缓解,1例获部分缓解.初始显效和充分显效的中位时间分别为3 d(2 ～ 5 d)和23 d(10 ～ 72 d).MSCs输注后,病情缓解者外周血CD8+CD28- T细胞比例明显上升,而CD8+CD28+ T细胞比例下降.结论:MSCs可快速缓解激素耐药重度aGVHD病情,其可能通过对CD8+CD28-/CD8+CD28+ T细胞比例的调控发挥抗aGVHD的作用.     

利用TCR V_β基因分析GVHD患者的克隆性T细胞

应用RT PCR扩增 3例异基因造血干细胞移植术后合并慢性GVHD患者的外周血单个核细胞的TCRVβ 2 4个亚家族的CDR3,了解患者TCRVβT细胞的表达 ,PCR产物进一步经基因扫描分析确定T细胞克隆性。结果显示 ,3例患者均有克隆性T细胞生长 ,它可能与GVHD的发生有关。     

白血病病人异基因造血干细胞移植后TCR Vβ—亚家族T细胞的免疫重建

目的：了解白血病病人异基因造血干细胞移植后患者TCR VβT细胞免疫功能重建的情况。方法：彩和RT－PCR扩增5例CML和1例AML－M2a移植后（1－7个月)患者外周血单核的TCR Vβ24个亚家族基因,分析其TCR Vβ亚家族的表达情况。结果不同标本中仅检测到2－8Vβ亚家族的T细胞,不同患者中缺乏的TCRVβ亚家族不尽相同。结论移植后病人外周血TCRVβ亚家族T细胞部分受抑制,此方法可详细了解病人T细胞免疫功能重建的情况。     

异基因造血干细胞移植后溶血性贫血

目的 探讨异基因造血十细胞移植后溶血性贫血的发生情况.方法 分析溶血性贫血的发生率、发生时间、临床表现、病因以及治疗和预后.结果 121例异某因造血干细胞移植患者有2例出现溶血性贫血,占1.6%,死亡1例.原因有AIHA(1/2),TTP(1/2).供受者血型为A→O.结论 溶血性贫血是异基因造血干细胞移植后严重并发症,死亡率高.需尽快考虑到以上原因予以相应的治疗.     

RAEB型骨髓增生异常综合征患者血清蛋白质组学研究

目的 利用蛋白质组学方法,寻找与RAEB(refractory anemia with excess blasts in transformation)型骨髓增生异常综合征(MDS)相关的特异性血清蛋白质标志物.方法 应用双向电泳分别分离RAEB型MDS、急性髓性白血病及正常人的血清蛋白,通过对3组图谱进行比较分析,识别差异反应的蛋白质点,根据差异反应蛋白质点位置在平行胶上找出匹配的蛋白质点.并通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱对差异蛋白质点进行鉴定.通过数据库搜索鉴定出差异反应的蛋白质.结果 以MDS组为参照,经过胶图分析得到7个差异蛋白质点,质谱鉴定提示4种蛋白有统计学意义,包括二肽基肽酶(dipeptidylpeptidase,DPP/CD26)、DNA聚合酶、未命名蛋白2044和类白蛋白物质.结论 以2-DE为基础的血清蛋白质组学方法可用于筛选与MDS相关的蛋白质标志物;DPP在RAEB型MDS中的异常高表达提示DPP/CD26可能与进展类型的MDS相关.     

利用MALDI-TOF-MS分析RAEB型骨髓增生异常综合征患者血清蛋白质组学特征

目的:利用铜螯合磁珠(MB-IMAC Cu)和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术,对比分析难治性贫血伴幼稚细胞增多型(RAEB)骨髓增生异常综合征(MDS)患者血清蛋白质谱特征,寻找差异表达蛋白,构建RAEB型MDS辅助诊断的血清蛋白质组学模型.方法:根据性别及年龄,配比收集RAEB型MDS、急性髓性白血病(AML)和正常人的血清蛋白标本各10例,利用铜螯合磁珠进行蛋白分离,通过MALDI-TOF-MS测定标本的蛋白质谱图,对比分析差异蛋白峰,并构建诊断模型.结果:与正常对照比较,在RAEB患者血清发现47个异常表达峰(P<0.05),其中高表达峰16个,低表达峰31个;以AML患者为疾病对照,获得33个异常表达峰(P<0.05),在RAEB中呈低表达的12个,呈高表达的21个.以基因遗传法构建诊断模型,结果提示,模型的识别准确率均达100%,敏感性达89.42%.结论:MB-IMAC Cu 和MALDI-TOF-MS技术平台有助于RAEB型MDS相关的血清异常表达蛋白的研究,并且能够有效地区分RAEB患者、AML患者和正常人;根据血清差异蛋白质的组合峰所构建的诊断模型可辅助RAEB型MDS的诊断.