SPA,SAC和SAW对小鼠实体瘤的疗效研究

以小鼠可移植性实体瘤Ｃａ７５９、Ｈ６１５、Ｐ６１５和Ｓ１８０为模型，观察了ＳＰＡ、ＳＡＣ和ＳＡＷ三种生物制剂直接体内注射的免疫疗效。结果表明，三种制剂对Ｃａ７５９、Ｈ６１５、Ｐ６１５无效，而对Ｓ１８０小鼠具有明显的免疫保护效应；ＳＡＣ和ＳＡＷ的疗效均优于ＳＰＡ，并导致肿瘤明显坏死、出血、萎陷和结痂。提示Ｓ１８０可作为研究三种制剂抗肿瘤效应及其机制的肿瘤模型。     

腺病毒介导细胞外信号调节激酶2表达对去分化软骨细胞增殖及胞外基质合成的影响

目的：观察腺病毒介导细胞外信号调节激酶2的过度表达对去分化软骨细胞增殖和细胞外基质合成的影响，以及腺病毒介导细胞外信号调节激酶2用于修饰去分化软骨细胞的可行性。 方法：实验于2004-09／2005-05在暨南大学组织移植与免疫研究中心进行。SD大鼠5只，周龄为3-5周，此处请核对体质量为（150&;#177;20）g，分离、培养大鼠肋生长板软骨细胞，利用Adeasy系统构建携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体。流式细胞仪检测不同感染复数的携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体感染第5代大鼠肋生长板软骨细胞的效率，Western blot检测携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体感染大鼠肋生长板软骨细胞中细胞外信号调节激酶1／2和磷酸化细胞外信号调节激酶2的表达，^3H-TdR,^3H-proline和^35 S-sulfate同位素掺入检测携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体感染对大鼠肋生长板软骨细胞增殖、胶原和蛋白多糖合成的影响。 结果：①成功构建携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体重组腺病毒。②100感染复数的携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体感染第5代大鼠肋生长板软骨细胞的效率大于90％。③携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体感染的第5代大鼠肋生长板软骨细胞中细胞外信号调节激酶1／2和磷酸化细胞外信号调节激酶2的表达均显著增加，分别是Ad-CMV组的15．58和1．85倍。④同位素检测结果表明携带细胞外信号调节激酶2基因的腺病毒载体的感染促进^3H-TdR、^3H-proline和^35S-sulfate的掺入，分别是对照组的2．52，1.61和1．53倍（P〈0．05）。 结论：腺病毒介导细胞外信号调节激酶2基因的过度表达促进去分化大鼠肋生长板软骨细胞的增殖和细胞外基质成分的合成。     

可溶性Jagged1/Fc对DC-T细胞共培养中细胞因子表达的影响

目的:研究可溶性Jagged1/Fc对DC-T细胞共培养体系中TGF-β1、IL-10、IL-4、IL-2、IFN-γ及TNF-α表达水平的影响.方法:应用IL-4和GM-CSF诱导培养小鼠骨髓细胞,流式细胞术检测髓系树突状细胞(DC)分化标志CD11c;将等量的淋巴细胞与之共培养,ELISA检测共培养上清TGF-β1的含量,Luminex100检测IL-10、IL-4、IL-2、IFN-γ和TNF-α的含量.结果:可溶性Jagged1/Fc处理组TGF-β1和IL-10的水平与DAPT对照组之间无统计学意义(P>0.05),而IL-4、IL-2、IFN-γ和TNF-α的水平升高(P<0.05).结论:Jagged1/Fc能促进DC-T细胞相互作用导致IL-4、IL-2、IFN-γ和TNF-α的水平上调.     

Jagged1在树突状细胞介导淋巴细胞诱导免疫耐受中的作用

Jagged1是哺乳动物细胞膜上Notch受体的主要配体之一,在抗原提呈细胞(APC)表面表达丰富,介导树突状细胞(DC)成熟和分化.Jagged1与其受体结合后,激活Notch信号通路,能够诱导外周成熟T淋巴细胞分化成为产生高水平IL-10的1型调节性T细胞(regulatory T cell 1,Treg 1)或产生高水平TGF-β的TH3细胞,在诱导免疫耐受中发挥着重要作用.     

CpG ODN对不同来源树突状细胞活化的影响

目的比较CpG ODN-1826对BALB/C小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDC)和脾脏来源树突状细胞(SDC)的活化作用.方法用CpG ODN-1826体外刺激树突状细胞(DC),流式细胞术检测CD80阳性率,ELISA检测1L-12(p70)分泌水平,MTT法检测活化DC刺激T细胞增殖的能力.结果CpG ODN-1826体外可不同程度激活BMDC和SDC,诱导DC上调CD80的表达和分泌高水平IL-12,促进DC刺激T淋巴细胞增殖.CpG ODN-1826刺激的BMDC膜表面CD80表达水平明显高于SDC,其分泌IL-12的水平亦高于SDC.结论CpG ODN-1826可促进小鼠骨髓来源和脾脏来源DC的功能成熟,CpG ODN-1826刺激活化BMDC的作用明显强于刺激活化SDC.     

超抗原SE抗肿瘤研究进展

超抗原 (ｓｕｐｅｒａｎｔｉｇｅｎ ,ＳＡｇ)是一组具有强大刺激能力的细菌外毒素或逆转录病毒 ,其无需抗原提呈细胞 (ａｎｔｉｇｅｎｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇｃｅｌｌｓ ,ＡＰＣ)内处理加工 ,能直接与ＡＰＣ膜上的ＭＨＣ ＩＩ类分子抗原结合槽外侧非限制性结合 ,以完整的蛋白质分子形式被提呈给Ｔ细胞 ,只需极低浓度 (1～ 10ｎｇ/ｍｌ)即可诱发最大的应答效应 ,导致带有特异性Ｔ细胞受体 β链可变区 (Ｔｃｅｌｌｒｅｃｅｐｔｏｒｂｅｔａｃｈａｉｎｖａｒｉａｂｌｅｒｅｇｉｏｎｓ ,ＴＣＲ Ｖβ)序列的Ｔ细胞大量活化增殖 ,并释放出大量多种细…     

信号肽-FRET荧光蛋白载体的构建及在NIH3T3细胞中的表达

目的构建带TLR4信号肽的增强型青色荧光蛋白(pECFP-C1-SP)和增强型黄色荧光蛋白(pEYFP-C1-SP)的质粒载体,为使用荧光共振能量转移(FRET)技术研究LPS在细胞膜上的受体识别机制提供依据。方法采用点突变技术构建了带TLR4信号肽的载体,用脂质体瞬时转染NIH3T3细胞,观察带信号肽载体和融合蛋白载体在细胞内的表达。结果DNA测序证明所构建的带TLR4信号肽的载体正确;酶切和DNA测序表明融合蛋白载体的构建正确,TLR4信号肽可以使蛋白主要表达在膜上。结论所构建的带信号肽的荧光蛋白载体是正确的,pECFP-C1-SP和pEYFP-C1-SP能够表达在细胞膜上,可有效地应用于膜蛋白相互作用的研究。     

p38对放线菌酮经线粒体途径诱导HL-60细胞死亡的影响

目的研究 p38对放线菌酮(CHX)经线粒体途径诱导 HL-60细胞死亡的影响。方法利用 p38持异性阻断剂 SB203580(SB)阻断 HL-60细胞 p38途径,分别设对照组、单纯 SB 组、CHX组和 CHX 联合 SB 组;于处理6,9,12,18,24 h 利用碘化丙锭(PI)染色流式细胞术检测亚二倍体峰细胞比率;于处理6和18 h 进行膜联蛋白Ⅴ(Annexin Ⅴ)/PI 双标流式细胞术测定凋亡和坏死细胞比率;于处理18 h 利用 JC-1染色流式细胞术分析,通过对 FL2的划分比较不同处理时间高 JC-1集合体量细胞比率;测定细胞 JC-1集合体(FL2)和 JC-1单体(FL1)平均荧光强度,并计算线粒体膜电势(△Ψ_m,FL2/FL1)。结果在 CHX 处理6 h HL-60细胞亚二倍体峰细胞比率显著高于对照组,在此过程中阻断 p38途径则在处理9 h 开始亚二倍体峰细胞比率显著高于 CHX 组。处理18 h 凋亡细胞比率:CHX组[(27.9±0.52)%]和 CHX 联合 SB 组[(28.54±1.38)%]均显著高于对照组[(2.45±0.65)%](P<0.01);CHX 联合 SB 组与 CHX 组比较差异无统计学意义(P>0.05)。处理18 h 坏死细胞比率:CHX 组和 CHX 联合 SB 组均显著高于对照组(P<0.01);CHX 联合 SB 组显著高于 CHX 组(P<0.01)。此外,CHX 组和 CHX 联合 SB 组高 JC-1集合体细胞比率均显著低于对照组(P<0.01),CHX联合 SB 组高 JC-1集合体细胞比率显著低于 CHX 组(P<0.01)。处理18 h 时各实验组△Ψ_m CHX 组(0.17+0.01)和 CHX 联合 SB 组(0.05±0.003)均显著低于对照组(0.38±0.02)(P<0.01),CHX 联合 SB 组△Ψ_m 显著低于 CHX 组(P<0.01)。结论 CHX 可诱导 HL-60细胞凋亡和线粒体去极化,在该过程中阻断 p38途径可使线粒体的去极化作用增强,本模型中 p38途径可能与 HL-60细胞的坏死密切相关。     

SAW对S180小鼠的体内免疫疗效及其机制的研究

以小鼠可移植性实体型Ｓ１８０为模型，ＣＰ为阳性对照，通过１２５Ｉ－ｕｄＲ标记肿瘤细胞ＤＮＡ释放试验，观察了ＳＡＷ直接体内注射对该带瘤小鼠的免疫疗效、腹腔巨噬细胞细胞毒和脾脏ＮＫ细胞细胞毒活性的影响。结果表明ＳＡＷ能明显增强带瘤小鼠腹腔巨噬细胞细胞毒和ＮＫ细胞细胞毒活性，这与ＳＡＷ的抗肿瘤效应呈一致关系。结果提示ＳＡＷ体内注射的抗肿瘤机制与其增强巨噬细胞细胞毒和ＮＫ细胞细胞毒活性有关。     

茴香霉素对小鼠同种异基因皮肤移植的影响

目的: 阐明茴香霉素对淋巴细胞反应性的影响以及在皮肤移植中抑制排斥反应的作用.方法: 用MTT法检测茴香霉素刺激下淋巴细胞在单向或双向混合淋巴细胞反应中的反应性.C57BL/6小鼠作为供体, BALB/c小鼠作为受体.手术前3 d分别给3组BALB/c小鼠皮下注射生理盐水、环胞霉素A以及茴香霉素, 手术当天继续注射至术后第7天.环胞霉素A及茴香霉素的注射剂量分别为: 20 mg/kg、 12.5 mg/kg.结果: 在剂量10.0 μg/L时, 茴香霉素能抑制单向或双向混合淋巴细胞反应中淋巴细胞的反应性(P均＜0.01); 茴香霉素组移植皮肤的存活时间明显高于环胞霉素A组以及对照组.结论: 茴香霉素能明显抑制淋巴细胞的反应性; 并且能明显延长受体对皮肤移植物的耐受时间, 可能为移植免疫排斥的治疗提供新的途径.