MAPK信号通路在诱导Th1/Th2分化中的作用

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路是介导细胞外刺激到细胞内反应的重要信号转号系统,在诱导Th1/Th2分化中起重要作用,其中JNK1能够抑制初始CD4+T细胞向Th2分化,JNK2诱导其向Th1分化并能促进相应细胞因子的分泌;p38既能诱导Th1分化,也能促进Th2分化;ERK1/2则能诱导CD4+T细胞向Th2分化。     

喘可治延长小鼠异基因移植皮片存活时间与CD4+CD25+调节性T细胞相关性研究

目的：研究喘可治抑制小鼠异基因皮片移植排斥作用与小鼠体内CD4+CD25+ 调节性T细胞（CD4+CD25+Tr）变化的相关性。 方法： 建立小鼠同种异基因与同基因皮片移植模型，通过腹腔注射给药喘可治(CKZ)观察其对皮片移植存活时间的影响，并利用3色免疫荧光标记和流式细胞术分析受鼠外周血CD4+CD25+ Tr变化规律。 结果： 同种异基因移植CKZ组的移植皮片存活时间显著长于同种异基因移植对照组，分别为（195±23）d和（102±22）d，P＜001；在同种异基因皮片移植后，受体外周血CD4+CD25+ Tr占CD4+T细胞百分率明显升高，术后8 d达到高峰（P＜001），然后出现下降趋势，其中同种异基因移植对照组在术后13 d时已回落至正常水平，而同种异基因移植CKZ组在术后23 d时仍维持在高于移植前水平；在同基因皮片移植后，CKZ组与对照组外周血CD4+CD25+ Tr水平均无明显升高（P＞005）。 结论： 喘可治可延长小鼠同种异基因移植皮片存活时间，通过升高CD4+CD25+ Tr水平而发挥免疫抑制效应可能是其机制之一。     

CpG ODN促进树突状细胞成熟的实验研究

目的：研究CpG ODN对小鼠骨髓来源的树突状细胞(bone marrow—derived dendritic cells,BMDC)分化成熟的影响。方法：以含非甲基化CpG基序的寡核苷酸(unmethylated CpG motif containing oligonucleotides,CpG ODN)刺激BMDC，流式细胞术检测DC膜表面CD80表达，ELISA检测DC分泌IL-l2水平，MTT法测定CpG ODN活化的DC刺激T细胞培殖能力。结果：CpG ODN可显著刺激DC表达CD80，分泌IL-l2，增强DC刺激T细胞增殖的能力。结论：CpG ODN可以有效促进DC的功能成熟。     

一种Th1-like调节性T细胞新亚群

本文描述了一种独特的调节性T细胞亚群——Th1-like调节性T细胞,这类细胞是卵清蛋白特异性的调节性T细胞,经CD8α+DC诱导产生,其表达的表面标志与Th1细胞和调节性T细胞均有相似之处,既表达Th1细胞的特异性标志T-bet,又表达调节性T细胞的特异性标志Foxp3。Th1-like调节性T细胞分泌IL-10、IFN-γ等细胞因子,这些细胞因子在免疫抑制与平衡中发挥重要作用。Th1-like调节性T细胞主要作用于呼吸道,对气道超反应呈现显著抑制作用。     

地塞米松影响小鼠胸腺细胞线粒体膜电势变化研究

目的：研究地塞米松刺激小鼠胸腺细胞过程中线粒体膜电势（△Ψm）的变化。 方法： 以终浓度1×10－6mol/L地塞米松（DEX）刺激小鼠胸腺细胞，通过JC-1染色流式细胞术，在0、1、3、5、7、9、11、24和27 h时点分别检测小鼠胸腺细胞平均J-aggregate（FL2）和平均J-monomer （FL1）含量，并计算线粒体膜电势（FL2/FL1）。 结果： 本研究中，小鼠胸腺细胞离体后FL1所反映的线粒体质量迅速下降，至5 h对照组达到平台期（913.38±70.11），然后缓慢下降到27 h的（622.80±22.81）。DEX组FL1在1 h和3 h与对照组没有显著差异（P>0.05），而从5 h（660.91±72.95）开始显著低于对照组（P<0.01），并且随培养时间延长呈下降趋势，至27 h的（309.70±53.35）。对照组和DEX组FL2随培养时间延长而降低。1-9 h，对照组和DEX的△Ψm没有显著差异（P>0.05）。而在11、24和27 h，对照组△Ψm分别为（256.41±21.59）、（214.14±23.21）和（146.14±17.97），而DEX组△Ψm显著低于对照组（P<0.01），分别为（138.28±20.59）、（111.61±29.67）和（72.92±17.86）。 结论： DEX诱导小鼠胸腺细胞凋亡过程中，线粒体质量降低和△Ψm下降是早期事件，而细胞内现存线粒体△Ψm下降则是较晚期的事件。在本研究中，线粒体质量下降与现存线粒体膜电势的变化之间关系不紧密。     

ERK信号途径对EGF诱导的HaCaT细胞增殖具有双向调节作用

目的利用带有ERK-2基因的腺病毒载体感染成角质细胞系HaCaT,探讨ERK信号途径在EGF对HaCaT细胞增殖影响中的作用。方法用3H-TdR掺入法检测HaCaT细胞增殖及PD98059对EGF促HaCaT细胞增殖的影响。腺病毒载体转染HaCaT细胞,流式细胞仪检测转染率,W estern b lot检测ERK-2蛋白的表达。结果1μg/L和10μg/L EGF可促进HaCaT细胞增殖,而100μg/L EGF促增殖作用反下降。PD98059抑制EGF引起的HaCaT细胞增殖,且具有浓度依赖性。腺病毒载体具有高转染率,感染Ad-ERK2的HaCaT细胞高表达ERK-2。EGF抑制转染的HaCaT细胞增殖。结论ERK信号途径在EGF促HaCaT细胞增殖中具有双向调节作用。     

ERK1／2信号通路对T淋巴细胞的影响

细胞外信号调节激酶1／2（extracellular regulated kinase1／2，ERK1／2）是将信号从细胞表面受体传导至细胞核的关键。磷酸化的ERKl／2由胞质转位到核内，进而介导NF-AT、AP-1、NF-KB等转录因子的活化，参与细胞多种生物学反应。近年来研究发现，ERK1／2信号通路的激活能促进T淋巴细胞的活化、增殖并抑制其凋亡，这可能为T淋巴细胞相关的免疫性疾病和肿瘤的治疗提供了新的策略。     

Jagged-1在肿瘤新生血管形成中的双重作用

Jagged-1是存在于哺乳动物细胞膜上Notch受体的主要配体之一,在许多组织的生长发育中起着重要作用。研究表明Jagged-1-Notch信号参与肿瘤新生血管化,表现为诱导血管特异性酶活化促进内皮细胞分化,导致内皮-间质细胞移行促进血管发育;上调内皮细胞标志分子如血管内皮钙黏附蛋白、血小板内皮细胞黏附分子-1、血管生成素受体-2、纤维连接蛋白、血小板源生长因子受体和α-平滑肌肌动蛋白等的表达,促进内皮和平滑肌细胞分化;与TGF-α和EGF等生长因子激活的通路共同作用促进血管样结构的形成。但也发现Jagged-1-Notch信号通路下游的HERP1通过阻止myocardin而抑制血管平滑肌细胞标志蛋白SM-MHC和平滑肌22-α的表达,同时通过干扰血清应答因子与SM-MHC中含CArG的启动子结合而抑制血管平滑肌细胞的分化;Jagged-1信号通过p21Cip1抑制cyclinD和cdk4的核定位以及Rb蛋白的磷酸化,从而抑制血管内皮细胞的增殖。Jagged-1所呈现的反向双重作用机制仍有待阐明。     

金黄色葡萄球菌肠毒素B对小鼠树突状细胞表面I-Eκ分子表达的影响

目的　探讨金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)对小鼠树突状细胞 (DC)表面I-Eκ 分子表达的影响。方法　密度梯度离心获得小鼠脾单个核细胞 ,Panning法纯化非贴壁细胞得到DC ;免疫组化SABC法检测DC纯度 ;流式细胞术检测SEB刺激后DC表面I -Eκ 分子的表达。结果　DC纯度为 70 %～ 80 %。I -Eκ 的表达在 10 0ng/mlSEB刺激 8h后达到高峰。结论　SEB可显著提高DC表面I -Eκ 分子的表达 ,该刺激作用有一最佳量效和时效关系。     

三七总皂甙增强人内皮源性一氧化氮合酶基因启动子活性

目的探讨三七总皂甙(tPNS)对人内皮源性一氧化氮合酶(eNOS)基因启动子转录活性的调控机制。方法以基因重组技术构建人eNOS基因启动子区(-1~ -1 600 bp)驱动的萤火虫荧光素酶报告基因载体peNOS-Luc,采用脂质体介导的细胞基因共转染技术将peNOS-Luc、空载体pGL2-Basic和β-半乳糖苷酶表达质粒pCMV-β共转染NIH3T3细胞,用细菌脂多糖(LPS)、tPNS和转移生长因子β1(TGFβ1)等因子分别刺激转染后的NIH3T3细胞,检测并比较荧光素酶/β-半乳糖苷酶活性,以确定LPS、tPNS和TGFβ1对人eNOS基因启动子转录活性的影响。结果(1)酶切和测序结果均证实重组载体peNOS-Luc构建正确;(2)重组载体peNOS-Luc在NIH3T3细胞中有效表达;(3)在LPS刺激下,人eNOS启动子的转录活性降低,而在tPNS和TGFβ1刺激下,其启动子的转录活性增强,其中,TGFβ1较tPNS所致的转录活性更强。结论正确构建了人eNOS基因启动子区(-1~-1 600 bp)驱动的萤火虫荧光素酶报告基因载体peNOS-Luc;tPNS在NIH3T3细胞中增强人eNOS基因启动子的转录活性。