CMY-39新基因亚型AmpC β-内酰胺酶的特性研究

目的对弗劳地枸橼酸杆菌所产CMY-39新基因亚型AmpCβ-内酰胺酶进行酶特性研究。方法 pET-32a(+)/CMY-39表达质粒在BL21(DE3)中诱导表达,进行SDS-PAGE电泳和Western blotting鉴定酶蛋白的表达;原菌株和重组表达菌株进行药敏试验,并提取重组表达菌株的CMY-39酶蛋白进行AmpC酶三维试验和酶动力学检测。结果 pET-32a(+)/CMY-39在大肠埃希菌中大量表达,蛋白相对分子质量约为60000,用特异抗体经Western检测该条带为阳性;AmpC酶三维试验为阳性;CMY型重组菌株药敏试验结果与原菌株相比,对青霉素类和头孢西丁具有明显的水解作用,第三、四代头孢菌素对之较为稳定,动力学结果与酶稳定性结果基本一致。结论证实重组菌株pET-32a(+)/CMY-39能高效表达CMY-39酶蛋白,表达CMY型重组菌株与原菌株比较,对β-内酰胺类抗生素的敏感性和稳定性有所增加,亲和力下降。     

精浆锌含量与精液质量关系分析

目的 分析精浆锌含量与精液质量之间的关系.方法 采集79例男性不育患者和24例有生育健康男性(对照组)精液样本,采用彩色精液质量图文分析仪进行精液参数检测,采用改良巴氏染色法进行精子形态分析,采用改良PAR化学比色法测定精浆锌含量.结果 少精组、弱精组精浆锌含量均低于对照组(P<0.05),精浆锌含量与精子密度呈正相关(r=0.301,P<0.05),精浆锌含量不影响精子活力及形态.结论 有生育健康男性精浆锌含量高于不育患者,精浆锌含量降低可导致精子密度下降,但对精子活力和形态没有显著影响.     

白假丝酵母菌耐吡咯类药物的ERG11基因分析

目的 研究白假丝酵母菌耐吡咯类药物的ERG11的变异情况.方法 将93例诊断为真菌性阴道炎的患者的阴道分泌物标本进行真菌培养,筛选白假丝酵母菌菌株,利用纸片扩散法进行氟康唑、酮康唑、咪康唑药敏试验,用加热裂解法提取菌株DNA,扩增ERG11基因,扩增后的PCR产物进行双向测序,测序结果与GenBank中的标准序列（SC5314）比较分析.结果 93例均培养出假丝酵母菌,包括60株白假丝酵母菌,19株热带假丝酵母菌,9株克柔假丝酵母菌和5株光滑假丝酵母菌;白假丝酵母菌对氟康唑、酮康唑、咪康唑耐药率分别为13.33%,20.00％和51.67％;对白假丝酵母菌的ERG11基因测序发现存在25个碱基突变位点,其中13个同义突变,12个错义突变,其中有6个是新变异：V36F,V51L,T123I,E194K,Y257H和K344N.结论 耐吡咯类药物白假丝酵母菌ERG11基因有多个错义突变位点,其中某些位点突变导致的氨基酸变异可能与其耐药性产生有关.     

探讨叶酸受体阳性循环肿瘤细胞在肺癌患者早期诊断与预后评估中的作用

目的探讨叶酸受体阳性循环肿瘤细胞（FR+CTC）在肺癌患者早期诊断与预后评估中的作用。 方法分析2020年3月至2020年10月广州医科大学附属第一医院胸外科、呼吸科住院和门诊患者的FR+CTC（CytoploRare^?）检测结果对于不同疾病类型的灵敏度，以及和肺癌患者结节大小、病理分期和病理类型的关系。 结果FR+CTC水平与性别、年龄无关。良性疾病患者中，FR+CTC的灵敏度为 73.9%。初诊患者中，FR+CTC的灵敏度为76.0%。FR+CTC阳性灵敏度对于肺癌早期诊断的临床符合率是75.8%，术后和治疗后患者FR+CTC水平相比初诊患者下降；FR+CTC水平整体和分期有一定的相关性，Ⅰ期患者中FR+CTC的灵敏度为71.5%，适用于肺癌的早期发现。浸润癌与原位癌/微浸润的FR+CTC差异具有统计学意义（P=0.0371）；FR+CTC水平与肺结节/肿块大小没有明确的相关性。 结论FR+CTC在肺癌患者早期诊断中起重要作用，其与肺癌肿瘤分期、浸润性有相关性，是较好的预后评估指标。     

案例分析教学法结合形成性评价在分子诊断实习中的应用

随着时代的发展,传统教学方法的劣势日益凸显,人们都在探索新的有效的教学方法。案例分析教学法以形成性评价为指导思想开展对学生的教学活动,实现对学生学习过程和学习结果及时、有效的评价,帮助其持有积极、有效的学习方法,引导学生通过自我研究去探讨学习内容,从而激发全体学生学习的积极性和主动性。     

产CTX-M超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌传播的分子机制研究

目的 研究肺炎克雷伯菌(KPN)中CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因的其传播机制.方法 用K-B药敏法分析53株肺炎克雷伯菌的耐药性;用多重PCR技术扩增ESBLs、AmpC、ISEcp1B、IS903、IS26等插入序列及Ⅰ类整合子,用套式PCR在Ⅰ类整合子寻找β-内酰胺酶基因盒,用长片段PCR扩增ISEcp1B下游的CTX-M型ESBLs全序列并测序.结果 17株肺炎克雷伯菌中检出CTX-M-G1,其中6株同时检出ISEcp1B、TEM、SHV、CTX-M-G1及Ⅰ类整合子,KPN 49、9检出DHA、IS903,KPN 9检出PSE;套式PCR在Ⅰ类整合子内未检出β-内酰胺酶基因,KPN 49整合子内检出二氢叶酸还原酶(dhfr)和核苷转移酶基因(aad2);KPN 49检出CTX-M ESBLs新的基因亚型,全长876 bp,与blaCTX-M-14相比在825 bp处有1个核苷酸不同,导致1个氨基酸不同,第275位由脯氨酸取代谷氨酰胺;KPN 49、9 blaCTX-M-L1ke的上游是ISEcp1B的遗传元件,提供-35及-10位点两个启动子及1个右反向重复序列(转位酶识别位点),下游是插入序列IS903提供反向重复序列组成复合转座子.结论 ISEcp1B可能对下游CTX-M型ESBLs的高水平表达和传播起重要的调控作用.     

尿液红细胞检测和隐血试验的临床应用及影响因素

目的:对比四种不同方法检测尿液红细胞和血红蛋白的结果,以分析其影响因素和临床价值.方法:采用UF-100尿沉渣分析仪、尿沉渣显微镜检查尿红细胞、干化学法、胶体金单克隆抗体法隐血试验对167份尿液联合检查,对四种检测结果进行对比.结果:以镜检法为标准UF-100尿沉渣分析法红细胞准确度为86.2%,干化学法红细胞准确度为85.0%.尿隐血试验中,干化学敏感性为300μg/L,单克隆抗体隐血为200μg/L,干化学与胶体金单克隆抗体隐血指标(金标准)对比,干化学隐血法的敏感度为80.7%,特异性为84.3%.结论:四种检测方法的联合应用更能提高尿液检查的质量,对疾病的诊断、治疗及病程中动态观察有重要的参考价值.     

多重耐药革兰阴性杆菌Ⅰ类整合子的检测

目的 研究整合子在多重耐药革兰阴性菌中的分布和所起的作用。方法 用Kirby-Bauer（K-B）药敏法分析80株多重耐药革兰阴性菌的耐药性，再用可变引物与兼并引物进行聚合酶链反应（ecrt），分别扩增革兰阴性菌整合子。结果 用兼并引物可检出50株革兰阴性菌携带有整合子，有21．2％的菌株同时对10种抗生素都耐药，依次为氨苄西林（72．5％）、头孢曲松（62．5％）、头孢唑啉（61．2％）、头孢他啶（56．2％）、哌拉西林（55．0％）、复方磺胺嘧啶（51．2％）、环丙沙星（50％）、庆大霉素（48．8％）、头孢吡肟（48．8％）、头孢西丁（33．8％），显著高于整合子阴性的菌株。用可变引物检出29株携带有Ⅰ类整合子，可扩增出1000bp，1450bp，1600be，1700bp，1850bp，1900bp，大于2000bp等6种不同长度的脱氧核苷酸（DNA）片段，相同菌属可携带有不同长度的耐药基因片段。不同细菌种属间携带有相同长度的耐药基因片段。结论 Ⅰ类整合子广泛分布于革兰阴性杆菌中，在多重耐药机制中起着重要的作用。     

生殖道白色念珠菌耐吡咯类药物的基因表达

目的了解生殖道白色念珠菌耐吡咯类药物基因的表达情况。方法收集真菌性阴道炎患者分泌物标本93份,分离白色念珠菌后用纸片扩散法进行药敏试验,裂解法提取白色念珠菌的吡咯类药物耐药株和敏感株的总RNA,逆转录为cDNA,采用实时荧光定量PCR技术检测白色念珠菌多药耐药基因CDRl、CDR2、MDRl的表达情况。结果共培养出59株白色念珠菌,18株热带念珠菌,10株克柔念珠菌,6株光滑念珠菌;白念珠菌中37株对氟康唑、酮康唑、咪康唑不同程度耐药,耐药率分别为16.7%、18.3%、51.7%;白念珠菌耐药株CDR1基因的2~(-△△Ct)为1.46±0.24,敏感株为1.09±0.27,两组比较,差异有统计学意义(t=-4.22,P=0.001);CDR2及MDRl基因的表达差异均无统计学意义(P=0.170,P=0.800)。结论白色念珠菌耐药机制较为复杂,可能与CDR1高表达有关,CDR2和MDR1表达与耐药性的关系有待进一步研究。