鱿鱼(Squid)肝脏蛋白酶解物中ACE活性抑制肽的分离纯化及活性分析

为提高鱿鱼加工下脚料的利用率,以秘鲁鱿鱼肝脏为研究对象,采用生物酶解技术和凝胶蛋白分离技术等对其进行研究。研究结果表明:鱿鱼肝脏蛋白酶解液经过超滤处理后(分子质量为20k Da),用Sephadex G-100初步分离,得到五个组分,对分离的组分进行研究,结果表明降血压活性能力最强的是组分二,测定其半抑制浓度(IC50)为1.8mg/m L。对组分二进行活性条件分析,结构表明其ACE抑制活性在温度0—100°C、p H 1—12之间基本没有变化。最后用DEAE阴离子交换柱和Sephadex LH-20对组分二继续分离纯化,得到组分六和组分七,测定其半抑制浓度(IC50)分别达到1.52 mg/m L和2.16 mg/m L。本研究可为利用鱿鱼加工下脚料开发降血压活性肽产品提供理论基础。     

瘤状软骨凹顶藻化学成分研究

采用硅胶柱色谱以及Sephadex LH-20凝胶色谱手段,对海洋红藻瘤状软骨凹顶藻(Chondrophycus papillous Garbary et Harper)进行化学成分研究,分离得到5个化合物.通过MS、NMR等方法对得到的化合物进行结构确证,分别鉴定为邻苯二甲酸二丁酯(Ⅰ),邻苯二甲酸二异辛酯(Ⅱ),胆甾醇(Ⅲ),植醇(Ⅳ)和4-羟基苯甲醛(Ⅴ).所有化合物均为首次从该种海藻中分离得到.通过MTT法对得到的单体化合物进行细胞毒活性筛选,结果显示所有化合物在10 mg/L浓度下均无明显活性.     

中华管鞭虾(Solenocera crassicornis)蛋白酶的纯化及其生化特性研究

采用Tris-HCl缓冲液(50mmol/L,pH7.5)抽提、Q-sepharose F.F.阴离子交换层析、Sephacryl S-300凝胶过滤层析、SDS-PAGE等方法,进行中华管鞭虾虾头蛋白酶的分离纯化、酶学性质及其动力学特性的研究。结果表明,中华管鞭虾虾头蛋白酶粗提物经层析后,得到聚丙烯酰胺凝胶电泳纯的一酶组分。该蛋白酶的比活力从359.39U/mg增加到8277.83U/mg,提高了23.03倍,回收率达37.69%,SDS-PAGE显示该蛋白酶只含一条谱带,相对分子量为24.50kDa。以偶氮酪蛋白作为底物,该酶的米氏常数Km值为0.28mg/ml,最适温度为55℃,最适pH为7.5;蛋白酶在60℃以下比较稳定,放置1h后活性仍保持在60%以上,而在60℃以上时蛋白酶活性急剧下降,80℃放置1h后,酶活性只残留21.32%。10mmol/L Cu2 、Zn2 和EDTA对该蛋白酶有较强的抑制作用,抑制率分别约为97%、96%和55%,10mmol/LMg2 能显著促进蛋白酶活性,而10mmol/LFe2 、Ba2 、Ca2 对蛋白酶活性的影响不大。推测中华管鞭虾蛋白酶可能为一种金属蛋白酶。     

缢蛏YC-2 蛋白的提取及抗氧化作用研究

以新鲜缢蛏(Sinonovacula constricta)为材料,经水萃取、(NH4)2SO4盐析、DEAE离子交换层析、Sepharose CL-6B凝胶层析、冻干浓缩。结合SDS-PAGE电泳技术,硫代巴比妥酸(TBA)法初步鉴定各个组分的抗氧化活性,并用Bradford法进行蛋白的定量。结果表明,80%饱和度(NH4)2SO4盐析得到的组分经离子交换层析以及凝胶层析得到一个蛋白纯品YC-2,具有2个亚基,大亚基的分子质量为61.23 ku,小亚基的分子质量为45.39 ku,YC-2蛋白的分子质量为106.62 ku,而且其具有较高的抗氧化活性,在0.627 g/L时对.OH清除率达99.7%。     

厚网藻脂类化合物的化学分析及抑菌作用

从厚网藻(Pachydictyon coriaceurn Okamura)中提取粗脂肪,经硅胶柱用3种溶剂洗脱,得到乙醇、苯及石油醚3种洗脱组分,它们分别占总洗脱组分的94．4％,3,0％和2,6％。色谱一质谱(GC-MS的化学分析结果表明,石油醚洗脱组分主要为C15～C29系列烷烃化合物,而苯洗脱组分只含有一种化合物即1-Naphthalenamine,N—Phenyl(一种含苯基的蔡胺化合物)。抑菌实验显示3种洗脱组分分别对供试的真菌具有抑制作用,其中石油醚洗脱组分能够抑制中华根霉(Rkimpus chinensi)、产黄青霉(Penicillium chrysogenum)和稻瘟病菌(Piriculari aor32ae)3种真菌．而乙醇洗脱组分只能抑制中华根霉,但其抑制活性最强。3种洗脱组分中只有乙醇洗脱组分具有抗细菌(枯草芽孢杆菌(Bacillussubtili)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureu)、膝黄八叠球菌(Sarcina haea)和甘薯薯瘟病原细菌(Fasarium axyssporam)活性。     

基于海洋细菌为受试生物的海洋防污剂快速筛选方法

本文研究探索了一种快速简单易行的海洋防污剂室内评价筛选方法。将待测防污剂均匀分散于凝胶溶液中,然后均匀涂布到一定面积的玻璃板上,固化得到含防污剂凝胶测试板,将其置于接种有三种分离自舟山以东海域的优势海洋菌种(编号为Y-16,W-1和F-6)的人工加富海水中,连续培养24h后显微镜下可发现凝胶板表面上细菌菌落,将凝胶板表面细菌淋洗、定容,测定其光密度(optical density,OD)值,计算平均抑菌率,得到吡啶硫酮锌(ZPT)为38.87%,吡啶硫酮铜(CPT)为41.24%,三甲基氧化锡(TBTO)为65.19%,N,N-二甲基-3,4-二氯苄胺(DCDMA)为30.88%,敌草隆(Diuron)仅为15.29%,抑菌性大小为TBTOCPTZPTDCDMADiuron。实验结果表明5种受试防污剂的抑菌性大小为TBTOCPTZPTDCDMADiuron。采用绘制OD-t生长曲线法,分别得到5种防污剂对3种海洋细菌的最小抑制浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),TBTO对三种菌的MIC均为0.5×10–3mg/mL;CPT对W-1和F-6的MIC为0.97×10–3mg/mL,对Y-16的MIC为1.93×10–3mg/mL;ZPT对W-1和Y-16的MIC为1.91×10–3mg/mL,对F-6的MIC为0.96×10–3mg/mL;DCDMA对W-1和F-6的MIC为8.46×10–3mg/mL,对Y-16的MIC为×10–342.29mg/mL。其中,Diuron对细菌的生长几乎没有抑制作用。其抑菌性与室内短期挂板结果具有一致性,表明经OD-t生长曲线得到的MIC可作为溶剂可溶型防污剂评价的辅助方法。另外,将本文中室内短期挂板方法应用于不同粒径的氧化亚铜的防污评价,也取得了与文献一致的结果。     

大菱鲆卵黄原蛋白的分离纯化及Native-PAGE、SDS-PAGE性质鉴定

采用5 mg/kg 17β-雌二醇对大菱鲆(Scophthalmus maximus)进行肌肉注射,一周后尾静脉取血,离心分离获得血浆,经Sephacryl S-300(高分辨)分子筛纯化卵黄原蛋白,对卵黄原蛋白进行常规聚丙烯酰胺凝胶电泳,考马斯亮蓝染色和糖、磷、脂的特征性基团染色.结果表明,17β-雌二醇能诱导大菱鲆产生卵黄原蛋白,以N-ative-PAGE方法计算得到大菱鲆卵黄原蛋白的分子质量为538 ku,以SDS-PAGE方法得出其两种亚基的分子质量分别为100 ku和82 ku.分子筛凝胶过滤能较好地纯化大菱鲆血浆中的卵黄原蛋白.     

贻贝胰蛋白酶抑制剂的研究

本文采用0.05mol/dm3、pH7.8的磷酸缓冲液抽提及热变性、硫酸铵盐析和凝胶层析等方法,从海产软体动物贻贝(Mytilus)中分离得到一种仅对胰蛋白酶专一性抑制的蛋白酶抑制剂结晶。在聚丙烯酸胺凝胶电泳和SDS-聚丙烯酸胺凝胶电泳上均显单一的谱带。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定,其相对分子质量为3 2100.N-末端分析和氨基酸组成测定结果表明贻贝抑制剂是以甘氨酸、赖氨酸为N-末端,由253个氨基酸组成的2条多肽链或亚基聚成的一组蛋白。但它对热及酸碱较不稳定。通过一系列酶促反应动力学的研究表明,贻贝抑制剂对胰蛋白酶呈可逆竞争性的抑制作用。其K_m和K_i值分别为7.7×10-4mol/dm3、8.9×10-5mol/dm3。     

厚藤共生真菌(Fusarium oxysporum Y24-2)胞外多糖的化学组成和结构研究

从厚藤共生真菌(Fusarium oxysporum Y24-2)发酵液中提取得到胞外多糖,以Q-Sepharose Fast Flow阴离子交换柱和Superdex S-75凝胶色谱柱对其进行分离纯化,得到纯度高的多糖组分F1S。采用HPGPC和HPLC对F1S的分子量及单糖组成进行分析,结果表明F1S主要由Man、Glc和Gal组成,其摩尔比为1.0∶1.9∶2.1,分子量为37.3kD。F1S的GC-MS和1D,2D-NMR分析表明,该多糖是以→6)-β-Galf(1→为主链,以→2)-α-Glcp(1→,α-Glcp(1→和β-Manp(1→为支链的杂多糖,支链取代于→6)-β-Galf(1→的O-2位。该厚藤共生真菌的胞外多糖为富含呋喃型半乳糖的结构新颖的具有多分支结构的中性杂聚多糖。     

阳极溶出伏安法测定海水中的砷

本文研究了用阳极溶出伏安法测定海水中的砷(Ⅲ)和总砷。用玻碳电极同位镀金直接测定砷(Ⅲ);用过硫酸钾消化后,亚硫酸钠将砷(Ⅴ)还原成砷(Ⅲ)而测得总砷。本方法的检出限达3×10~(-10)M。回收率砷(Ⅲ)为106±4％,总砷为101±11％。样品经过简单的预处理能得到较好的重现性。     

海洋放线菌QD08-1抗肿瘤成分研究

采用活性追踪的方法,经硅胶柱色谱、凝胶Sephadex LH-20、制备液相从其活性组分中分离得到4个异黄酮类化合物。根据化合物的光谱特征和理化性质,结合文献,分别鉴定为genistein(1)、daidzein(2)、4’?methoxy-6,7-di-hydroxy-isoflavones(3)和4-’hydroxyinflavone(4),其中化合物3和4为首次从海洋放线菌中分离得到。抗肿瘤活性评价表明,4个化合物均显示弱的细胞毒活性。     

天然海水中硫酸锌、葡萄糖酸钙和APG等复合碳钢缓蚀剂的研究

通过正交实验确定了硫酸锌、葡萄糖酸钙和 APG(C0 81 0 )复配的 3元缓蚀剂最佳复配比为4∶ 1∶ 2。用失重法测得该 3元缓蚀剂在 35 0 mg/ L时对碳钢缓蚀率为 92 .8%,但试样表面存在局部腐蚀。为了抑制试样局部腐蚀的发生 ,采用失重法从几种常用缓蚀组分中筛选出硅酸钠和钨酸钠作为 3元缓蚀剂的添加剂组成 5元缓蚀剂 ,通过正交实验确定了组分间的最佳复配比。用失重法确定了5元缓蚀剂的临界浓度为 2 80 mg/ L ,此时对碳钢缓蚀率为 93.8%,并有效抑制了局部腐蚀的发生。从而得到了天然海水中 1种有效抑制碳钢局部腐蚀的低毒、高效复合缓蚀剂。据极化曲线分析可以确定该 5元缓蚀剂是 1种抑制阳极过程为主的混合型缓蚀剂。     

金乌贼(Sepia esculenta)蛋白抗氧化肽的酶解制备及活性评价

采用木瓜蛋白酶水解金乌贼(Sepia esculenta)蛋白, 利用超滤、凝胶色谱和反相高效液相色谱从金乌贼蛋白水解物中制备抗氧化肽, 采用氨基酸序列分析仪和质谱(ESI-MS)确定抗氧化肽结构, 采用自由基清除实验和脂质过氧化抑制实验对多肽抗氧化能力进行评价。结果表明, 金乌贼蛋白经木瓜蛋白酶水解和分离纯化得到1个抗氧化肽(AEH-P3), 经氨基酸序列分析和质谱(ESI-MS)确定其结构为Ala-Pro-Pro-Glu-Asn-Gly-Met-Ala-Gln-Met (APPENGMAQM), 分子量为1045.22Da。体外抗氧化实验结果表明: AEH-P3对DPPH自由基(EC50 4.01mg/mL)、羟自由基(EC50 4.66mg/mL)、ABTS自由基(EC50 3.44mg/mL)和超氧阴离子自由基(EC50 6.03mg/mL)具有良好的清除作用, Ala-Pro-Pro-Glu-Asn-Gly-Met-Ala-Gln-Met (APPENGMAQM)亦显示出了良好的脂质过氧化抑制作用, 可以用于抗氧化相关的功能食品、药物或者食品添加剂。     

极大螺旋藻胞内多糖对体外肿瘤细胞抑制作用的实验研究

研究了极大螺旋藻(Spirulina maxima)胞内多糖对SMMC7721等肿瘤细胞系的生长及凋亡的影响。在体外培养条件下,用半抑制浓度(80,5 mg/L)的极大螺旋藻胞内多糖(IPSⅠ,IPSⅡ)处理肿瘤细胞,并用MTT,SRB,DNA ladder,AnnexinⅤ等方法测定。结果表明,IPSⅠ(80 mg/L)对SMMC7721,A549,HeLa,U251等肿瘤细胞系抑制率分别为64.97%、46.1%、43.3%、27.02%;IPSⅡ(5 mg/L)能诱导SMMC7721细胞凋亡。     

产甲壳素酶菌株HD001的发酵条件研究及酶的分离纯化

通过对降解甲壳素菌株 HD001 的发酵条件研究,确定了其产甲壳素酶最适培养基组分为 ( w/v ):( NH4 ) 2SO4 2.0%, NaCl 0.5%, K2HPO4 0.07%, KH2P O4 0.03%, MgSO4·7H2O 0.05% 以及葡萄糖 0.1%、酵母粉 0.3% 和胶体甲壳素 1.5%;最适产酶培养条件为:培养基起始 pH 值 6.0,培养温度 30 ℃,培养时间 120 h,发酵液酶活力达 376.2 U/mL.采用硫酸铵分级盐析、DEAE-纤维素离子交换层析、Sephacryl S-100 凝胶过滤层析对该酶进行纯化后,SDS-PAGE电泳显示单一条带,其相对分子质量约为 85.7 kDa.     

豆粕发酵菌株筛选和鉴定及发酵条件优化

为筛选出能够高效降解豆粕碳水化合物和蛋白的菌株,并优化菌株发酵条件。以纤维素酶、果胶酶、木聚糖酶和蛋白酶活力为指标,从真菌A-1、A-2、O-1、M-4、Y-11和细菌KC 6株菌株中筛选出1株产酶丰富的菌株。利用18SrRNA基因序列法鉴定该菌株,通过单因素实验优化菌株的发酵条件。研究表明:A-1和M-4纤维素酶活力显著高于其它菌株(P0.05),A-2木聚糖酶活力显著性高于其它菌株(P0.05),A-1和A-2果胶酶活力显著高于其他菌株(P0.05),A-1蛋白酶活力显著高于其它菌株(P0.05)。综合比较,选择A-1作为发酵豆粕菌株。经基因序列鉴定,A-1菌株为泡盛曲霉(Aspergillus awamori)。其最适的发酵条件为:料水比为1∶1.1,发酵温度为31℃,发酵时间为37h,添加的营养因子为2‰K_2HPO_4、2‰NaCl、2‰(NH4)2SO4、1%葡萄糖、2‰尿素。在此发酵条件下,豆粕中蛋白质含量从50.8%提高到61.7%,可溶性氮指数(TCA-NSI)从3.9%提高到19.8%,胰蛋白酶抑制因子含量从2mg/g降到0.4mg/g以下,水苏糖含量从32.52mg/g降到0.39mg/g,棉籽糖含量从12.09 mg/g降到0.73 mg/g。大豆球蛋白含量从94 mg/g降到1.4mg/g以下,β-伴球蛋白含量从109.2mg/g降到2.8mg/g以下。研究结果表明:泡盛曲霉能显著提高豆粕蛋白质含量,降低抗营养因子,提高豆粕的营养价值。本研究为利用微生物发酵豆粕替代鱼粉提供了理论基础。     

北沙参的化学成分研究

为了进一步研究药材北沙参(Glehnia littoralis F. Schmidt ex Miq)的药效物质基础,采用硅胶柱色谱、凝胶色谱Sephadex LH-20和高效液相色谱方法,从药材北沙参中分离得到了8个化合物.运用IR、1DNMR、2DNMR及与文献比较,鉴定它们的结构分别为:羽扇豆醇(Ⅰ)、桦木醇(Ⅱ)、β-谷甾醇(Ⅲ)、胡萝卜苷(Ⅳ)、人参炔醇(Ⅴ)、法卡林二醇(Ⅵ)、(8E)-1,8-heptadecadiene-4,6-diyne-3,10-diol(Ⅶ)和异欧前胡素(Ⅷ).其中,化合物Ⅰ,Ⅱ和Ⅳ为首次从该药材中分离得到.     

对虾养殖生态系中有机碳的初步研究本研究由

对于围隔养殖对虾生态系中有机碳的变动进行了研究 ,结果表明 :溶解有机碳 (DOC)含量波动在 5 .2 99～ 13.39mg/ L之间 ,平均为 8.5 3mg/ L± 2 .2 5 mg/ L;颗粒有机碳 (POC)含量波动在0 .6 5～ 6 .6 3mg/ L之间 ,平均为 3.2 5 mg/ L± 1.76 mg/ L;总有机碳 (TOC)含量波动在 6 .92～ 2 0 .0 2mg/ L之间 ,平均为 11.78mg/ L± 3.82 mg/ L ;其中 DOC∶ POC∶ TOC为 0 .72∶ 0 .2 8∶ 1。各种有机碳组分的含量明显高于自然海水中各种有机碳的含量 ;各种有机碳组分的含量在养殖期间总体上呈上升的趋势 ;其变化与 DCOD的变化呈显著线性正相关的关系。     

柱孢鱼腥藻固氮酶铁蛋白的分离纯化及其某些特性的研究

通过DEAE-纤维素柱层析分级分离可将柱孢鱼腥藻(Anabaena cylindrica)固氮酶铁蛋白组分纯化21倍,比话性达142.46nmolC_2H_4/mg蛋白·分。纯化的铁蛋白质用聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定呈均一状态,分子量约为61,000。氨基酸组分分析的结果不含色氨酸,而酸性氨基酸中天门冬氨酸和谷氨酸的含量占氨基酸总数的22％,约为碱性氨基酸中精氨酸和赖氨酸的2.6倍。用原子吸收分光光度计测定不含钼,每个铁蛋白分子中平均含有3.36原子的铁。柱孢鱼腥藻固氮酶钼铁蛋白与铁蛋白的滴定试验表明,钼铁蛋白和铁蛋白的最佳分子比约为1:2。提纯的柱孢鱼腥藻和棕色固氮菌(Azotobacter vinelandii)固氮酶组分的正反交叉重组结果表明均有活性。     

毛细管电泳法测定芦根和蒲黄多糖中的单糖组分(英文)

本文建立了用毛细管电泳测定中草药芦根和蒲黄多糖中的单糖组分的方法。提取的单糖经α-萘胺衍生,用二极管阵列检测器在214nm处检测。五种单糖鼠李糖(Rha),木糖(Xyl),半乳糖(Gal),葡萄糖(Glu),阿拉伯糖(Ara)能够同时测定,分离良好。毛细管电泳的测定条件如下,50 mM硼酸钠缓冲液;pH10.5;工作电压为25kV;温度为25℃。标准曲线的线性范围为5 mg/L-200 mg/L,每种单糖的最低检测线均为2.5 mg/L。迁移时间和峰面积的相对标准偏差分别小于1.46%,6.21%。实验结果显示,芦根多糖重各单糖组分的摩尔比如下:木糖∶葡萄糖∶阿拉伯糖∶半乳糖为1.00∶59.03∶2.09∶1.96;蒲黄多糖中各单组分的摩尔比如下:鼠李糖∶木糖∶葡萄糖∶阿拉伯糖∶半乳糖为1.71∶1.00∶9.30∶6.88∶1.24。