雄激素在实验性自身免疫性脑脊髓炎中的保护作用（综述）

多发性硬化(multiple sclerosis，MS)及其动物模型即实验性自身免疫性脑脊髓炎(experiment alautimmune encephalomyelitis，EAE)都具有性别差异，但其确切机制仍不清楚。近年来，大量研究发现雄激素与EAE的发病和病程有一定关系。此文就EAE存在的性别差异及雄激素在其中的作用做一综述。     

外源性雄激素对EAE大鼠血中CD4+CD25+T细胞的影响

目的 探讨外源性雄激素对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental allergic eneephalomyelitis, EAE)大鼠外周血CD4 CD25 T的影响.方法 模型组用豚鼠脊髓和完全弗式佐剂混匀乳剂诱发大鼠EAE,治疗组在模型组的基础上给予外源性雄激素,观察各组的发病情况;流式细胞仪检测外周血CD4 CD25 T细胞;HE染色和髓鞘染色分别观察病理和髓鞘改变.结果 治疗组的CD4 CD25 T细胞(5.3±0.90)较模型组(6.5±0.90)显著增高(P＜0.01),大脑、脑干、脊髓炎性细胞浸润明显减少,髓鞘的改变不明显.结论 外源性雄激素可能通过改变了CD4 CD25 T细胞的水平,而对EAE起一定的治疗作用.     

TNF-α及工IL-8在EAE免疫学发病机理中的作用

目的探讨TNF-α及IL-8在实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)免疫学发病机理中的作用.方法自牛脑提取的髓鞘碱性蛋白(MBP)加福氏完全佐剂(CFA)免疫豚鼠,建立EAE模型.同时采用生物活性测定法检测了EAE模型的TNF-α水平,采用双抗体夹心法酶联免疫吸附实验检测了EAE模型的IL-8水平.结果EAE组的TNF-α及IL-8水平均明显高于正常对照组.结论TNF-α及IL-8在EAE免疫学发病机制中具有重要作用,验证了细胞因子(CK)是EAE致病的重要分子基础.为深入研究多发性硬化(MS)的发病机理及探索新的有效治疗途径提供了理论依据.     

雷公藤内酯醇对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠血-脑脊液屏障的影响

目的 探讨雷公藤内酯醇(Tri)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠血-脑脊液屏障(BCB)的免疫调节作用.方法 制备Wistar大鼠EAE模型,应用Tri治疗EAE,评估EAE组、Tri治疗组的临床症状,在不同时间点测定脑脊液(CSF)和外周血白蛋白(Alb)水平并计算二者比值(QA),通过QA值观察BCB变化.于免疫后(p.I.)6、8、10、12、14、16 d处死动物,用免疫组化技术检测脑和脊髓细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和干扰素-γ(IFN-γ)表达.结果 免疫后14 d为EAE组发病高峰期,Tri治疗组临床症状评分(0.14±0.08)较EAE组(2.19±1.68)低(P<0.01).免疫后 8 d EAE组QA达最大值(0.30±0.05),较佐剂组(0.13±0.05)明显增高(P<0.01).免疫后6-14 d,EAE组与佐剂组、Tri治疗组比较QA值差异均有统计学意义(F=28.34,P<0.01).免疫后14 d Tri治疗组 QA达最大值(0.19±0.02),QA波峰时间较EAE组延迟且峰值明显较低.免疫后12-16 d,EAE组与佐剂组、Tri治疗组比较ICAM-1阳性表达高(F=17.11,F=29.87,均P<0.01);免疫后10-16 d,Tri治疗组较EAE组IFN-γ阳性表达低(F=447.92,P<0.01).结论 EAE中BCB损伤早于临床症状出现.Tri能有效抑制EAE进展,可能与其下调ICAM-1、IFN-γ表达,恢复BCB正常功能有关.     

CXC趋化因子受体3及其配体与实验性自身免疫性脑脊髓炎

实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)是由CD4 T细胞介导的自身免疫性中枢神经系统脱髓鞘炎症.以往认为,中和CXC趋化因子受体3(CXCR3)或其配体(CXCL10)可以缓解EAE的病情,减少复发.但近年来研究发现CXCR3或CXCL10基因敲除能够加重EAE病情,提示它们可能对EAE起保护性作用.本文就CXCR3及其配体CXCL10与EAE的发生发展之间的联系以及相关的调节机制进行综述,为CXCR3受体拮抗剂或CXCL10中和剂在临床上的应用提供理论参考.     

TNF-α在实验性变态反应性脑脊髓炎中变化的意义

实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)是一种T淋巴细胞介导的中枢神经系统(CNS)免疫性疾病,与人类CNS疾患多发性硬化(MS)具有很多共同的特征.在MS和EAE发病机制中,血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)一直是人们所关注的因素.本文就EAE血清TNF-α的变化与临床症状关系进行研究,现报告如下.     

实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑组织中NF-κB p65,TNF-α表达及雷公藤多甙的干预研究

目的 观察Wistar大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)脑组织中核转录因子-κBp65(NF-κB p65)、肿瘤坏死因子-α(TNF-a)的表达情况,用雷公藤多甙(TWP)进行干预,探讨TWP对EAE的防治效果及作用机制.方法 建立Wistar大鼠EAE模型,并选用TWP、泼尼松(PRD)干预治疗.65只Wistar大鼠随机分成5组:对照组5只,EAE组、TWPⅠ组(EAE+TWP 10 mg·kg-1·d-1)、TWPⅡ组(EAE+TWP 30mg·kg-1·d-1)和PRD组(EAE+PRD 5 mg·kg-1·d-1)各15只.观察各组大鼠发病情况并进行神经功能评分.大鼠脑和脊髓腰膨大段组织切片:苏木素-伊红(HE)染色+罗克沙尔坚牢蓝(LFB)髓鞘染色,光镜下进行炎性病灶计数,并免疫组化方法检测大鼠脑组织内NF-κB p65、TNF-α的表达.结果 EAE组及干预组大鼠脑组织内NF-κB p65、TNF-α表达水平随病情加重而升高,随病情缓解而降低.与EAE组比较,干预组大鼠发病率减低,潜伏期延长,神经功能评分及体重损失明显降低,脑组织炎性病灶数明显减少;同时脑组织NF-κB p65和TNF-α阳性细胞数量明显减少.TWP大剂量组与PRD治疗效果相当,且优于TWP小剂量组.结论 NF-κB p65、TNF-α过表达可能参与EAE发生及进展;TWP有明显防治大鼠EAE作用,在一定程度上呈剂量相关性,其机制可能与下调NF-κB p65、TNF-α表达有关.     

大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎中一氧化氮的变化

目的　观察外周和中枢一氧化氮 (NO)在大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎 (EAE)中的动态变化 ,探讨EAE大鼠发病的相关生物学机制。方法　 采用免疫组化法和硝酸还原酶法 ,观察豚鼠全脊髓匀浆诱导的Wistar大鼠EAE的过程中 ,脊髓内表达iNOS胶质细胞与外周NO代谢物NO 2 和NO 3的变化。 结果　 对照组脊髓内未发现表达iNOS阳性细胞 ,表达iNOS的CNS胶质细胞可能是小胶质细胞 ,而且它的变化与EAE大鼠的病情一致 ,评分 2分和 3分EAE大鼠脊髓表达iNOS的小胶质细胞比评分 1分大鼠明显增多 (P <0 .0 1) ,恢复期EAE大鼠表达iNOS的小胶质细胞明显减少 (P <0 .0 1)。EAE大鼠外周血清NO值随症状程度加重而升高 ,但在EAE恢复期时仍保持较高水平。未发病大鼠血清NO值明显增高 ,与对照组之间具有显著性差异 (P <0 .0 1)。 结论　 小胶质细胞产生的NO可能在急性期EAE大鼠的发病中起重要作用     

清开灵有效治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎

目的　研究清开灵治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎 ( EAE)的可能性及有效性。方法　应用蛋白脂质蛋白1 39- 1 51 ( PLP1 39- 1 51 )免疫 SJL/ J小鼠诱发慢性复发 -缓解性 EAE模型 ,研究清开灵对 PLP1 39- 1 51 诱导的小鼠淋巴结细胞增殖反应及 γ-干扰素 ( IFN-γ)分泌的作用 ,并通过神经功能评分观察清开灵治疗 EAE的有效性。结果　清开灵可抑制 PLP1 39- 1 51 诱导的淋巴结细胞增殖反应及 IFN-γ的分泌 ( P <0 .0 0 1 ) ,有效改善 EAE小鼠神经功能评分 ( P <0 .0 1 ) ,使发病时间延迟 ( P <0 .0 1 )。EAE小鼠发病数和死亡数较对照组减少 ,但其差异并无显著性 ( P>0 .0 5 )。结论　清开灵可有效治疗 EAE,为清开灵用于临床治疗多发性硬化提供了实验依据。     

阿托伐他汀对实验性变态反应性脑脊髓炎T辅助细胞功能的影响

目的探讨阿托伐他汀对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)豚鼠T辅助细胞功能的影响,探讨阿托伐他汀对EAE发病保护作用的免疫调节机制。方法皮下注射粗制碱性髓鞘蛋白(MBP)建立EAE模型。40只豚鼠分成4组:正常对照组、EAE对照组、EAE低剂量组和EAE高剂量组,每组10只,雌雄各半。ELISA法测定EAE发病高峰期外周血单个核细胞培养上清液的细胞因子INF-γ、IL-4水平。结果EAE对照组IL-4浓度低于正常对照组(P<0.01),EAE高、低剂量组IL-4浓度高于EAE对照组(P<0.01),EAE高剂量组IL-4浓度比EAE低剂量组高(P<0.01)。EAE对照组IFN-γ浓度高于正常对照组(P<0.01),EAE高、低剂量组IFN-γ浓度低于EAE对照组(P<0.01),EAE高剂量IFN-γ浓度比EAE低剂量组低(P<0.01)。结论EAE豚鼠存在Th1细胞的过度活化、Th2细胞分泌活性降低;阿托伐他汀能具有抑制Th1细胞活性、提高Th2细胞分泌能力,具有调节Th1/Th2失衡作用。     

NF-KB p65及环氧化酶-2在实验性变态反应性脑脊髓炎中的表达及其作用机制

目的 研究核转录因子NF-kB p65及环氧化酶-2(COX-2)在实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)中的表达,探讨其参与EAE的作用机制. 方法 健康新西兰兔30只根据采用不同免疫原制作模型的方式分为三组:A组,正常对照组(未注射免疫原)10只;B组,新西兰兔脊髓匀浆(R-SCH)EAE模型组,10只;C组,牛脑匀浆(C-SCH)EAE模型组,10只.比较每组动物临床病理特点;分别采用免疫荧光、免疫组化对其进行形态观察,应用ELISA法对NF-KBp65进行活性测定.结果 B、C组均可见NF-kB p65及COX-2明显增加,阳性细胞百分率与A组比较.差异有统计学意义(P<0.05);其中B组NF-kB p65活性明显增高.结论 在EAE模型中存在NF-kBp65及COX-2表达,它们均在EAE发病过程中发挥了重要作用.     

侧脑室注射甘珀酸后豚鼠EAE模型脑白质内胶质细胞形态学改变

目的 观察豚鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)模型侧脑室注射缝隙连接(gap junction, GJ)阻滞剂甘珀酸后,脑白质内免疫损伤发生发展变化以及脑内星形胶质细胞和小胶质细胞表达变化.方法 将豚鼠随机分为实验组和对照组,每组6只.实验组豚鼠经侧脑室注射甘珀酸,对照组以同样方式注射等量生理盐水,然后于豚鼠足底注射髓鞘碱性蛋白制作EAE动物模型.观察两组豚鼠EAE发病率,并采用免疫组化法观察豚鼠脑白质星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)和小胶质细胞标志物OX42的表达变化.结果 与对照组(平均EAE症状评分3.00分)相比较,实验组动物EAE发病率减少且症状(平均EAE症状评分0.67分)明显减轻(P<0.01);对照组与实验组EAE脑白质内均可见反应性GFAP(GFAP-like,GFAP-Li)星形胶质细胞表达, GFAP-Li标志物计数对照组为(504.00±55.88)个,实验组为(497.00±49.69)个,两组间比较无统计学差异(P>0.05);对照组与实验组EAE鼠脑白质内均可见反应性OX42(OX42-like,OX42-Li)小胶质细胞表达,实验组OX42-Li标志物计数[(120.00±10.64)个]较对照组[(242.00±35.35)个]明显减少(P<0.01).结论 GJ阻滞剂甘珀酸可明显减少EAE的发生率并明显减轻EAE发病的临床症状,其机制可能与其阻断GJ后继而降低小胶质细胞OX42的表达有关,表明GJ阻断剂可能成为多发性硬化防治的新途径.     

奥曲肽对EAE豚鼠外周血单个核细胞分泌IFN-γ、IL-4水平的影响

目的通过研究奥曲肽对急性实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)豚鼠外周血单个核细胞(PBMC)分泌γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平的影响,探讨奥曲肽对EAE发病保护作用的免疫学机制。方法将40只雌性豚鼠随机分为健康对照组、EAE对照组和EAE高、低剂量治疗组,每组各10只。EAE对照组及EAE高、低剂量治疗组采用粗制髓鞘碱性蛋白(cMBP)诱发急性EAE,EAE低、高剂量治疗组自造模前7 d始分别按体质量3、12 μg/(kg·d)予皮下注射奥曲肽直至试验结束。观察4组豚鼠神经功能障碍评分变化,并用ELISA法测定PBMC培养上清液中IFN-γ和IL-4水平变化。结果 EAE高、低剂量治疗组神经功能障碍评分较EAE对照组显著降低(P0.01,P0.05),且EAE高剂量治疗组降低更明显(P0.05)。PBMC分泌IFN-γ水平EAE低、高剂量治疗组、EAE对照组较健康对照组显著升高(P0.01),EAE高、低剂量治疗组较EAE对照组显著降低(均P0.01),且EAE高剂量治疗组降低更明显(P0.05)。PBMC分泌IL-4水平EAE对照组较健康对照组明显降低(P0.01),EAE高、低剂量较EAE对照组均明显增高(均P0.01),且EAE高剂量治疗组增高更明显(P0.05)。EAE对照组及EAE高、低剂量治疗组发病高峰期外周血IFN-γ/IL-4比值与神经功能障碍评分均呈正相关(r=0.753、P0.05,r=0.835、P0.01,r=0.779、P0.01)。结论奥曲肽对EAE豚鼠发病具有保护作用,其作用机制可能是通过抑制IFN-γ生成、促进IL-4生成而发挥对Th1/Th2失衡的调节作用。     

实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠小胶质细胞的变化

目的　观察活化的小胶质细胞 (表达主要组织相容性抗原 )在实验性自身免疫性脑脊髓炎 ( EAE)大鼠脊髓中的变化 ,探讨 EAE大鼠发病相关生物学机制。方法　采用免疫组化法观察豚鼠全脊髓匀浆诱导的 Wistar大鼠 EAE过程中脊髓内表达 MHC 、MHC 类抗原的小胶质细胞的变化情况。结果　对照组脊髓内未发现表达 MHC抗原细胞 ,实验组脊髓内表达 MHC 抗原细胞与表达 MHC 抗原细胞的分布和形态一致 ,小胶质细胞变化与 EAE大鼠的病程一致。动物临床症状评分 2分和 3分 EAE大鼠脊髓表达 MHC抗原的小胶质细胞比评分 1分大鼠明显增高 ( P <0 .0 1 ) ,恢复期 EAE大鼠表达 MHC抗原的小胶质细胞明显减少 ( P <0 .0 1 )。结论　活化小胶质细胞与 EAE大鼠的病情相关 ,提示其可能通过表达 MHC抗原在 EAE大鼠的发病机制中具有作用     

实验性自身免疫性脑脊髓炎脑内缝隙连接蛋白Cx43和Cx32的表达变化

目的 观察豚鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型脑内星形胶质细胞(AS)缝隙连接(GJ)蛋白Cx43与神经元缝隙连接蛋白Cx32表达变化及相互关系,以探讨胶质细胞和神经元表面缝隙连接与EAE模型损伤的关系.方法 采用免疫组化方法,显示EAE模型豚鼠脑内胶质细胞和神经元表面缝隙连接蛋白Cx43和Cx32的表达变化及分布规律.结果 EAE豚鼠模型建立成功后,脑内星形胶质细胞Cx43-Li细胞表达明显增加,呈斑点样或分枝样;神经元Cx32-Li细胞表达也增加,并存在一定时间相关性.结论 EAE豚鼠脑内Cx43和Cx32表达增加,提示EAE发生后星形胶质细胞与神经元间信息交流可能加强.     

雌二醇对实验性自身免疫性脑脊髓炎调节性T细胞及细胞因子的影响

目的 探讨雌二醇(E2)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠调节性T细胞及细胞因子的影响.方法 将大鼠随机分为E2干预组和EAE对照组,记录其临床评分, 测定外周血CD4+CD25+、CD4+CD25+Foxp3+ T细胞水平以及TNF-α、IL-12表达水平,并观察腰膨大处炎细胞浸润情况.结果 (1)E2干预组发病率仅为30% ,低于EAE对照组(100%), 且发病高峰延迟;临床评分E2干预组[(1.8±1.3)分]比EAE对照组[(3.4±0.5)分]低, 差异有统计学意义(P<0.05);(2)E2干预组CD4+CD25+/CD4+ T细胞比值 (5.6±0.9)、CD4+CD25+Foxp3+/CD4+CD25+ T细胞比值(9.3±1.0)均高于EAE对照组[分别为(4.4±0.9)与(7.6±0.8)], 差异有统计学意义(均P<0.05);(3)血管"套袖"样改变EAE对照组较E2干预组明显;(4)E2干预组TNF-α及IL-12表达明显低于EAE对照组, 差异有统计学意义(均P<0.05).结论 E2可能通过改变调节性T细胞比例及细胞因子表达参与EAE免疫调节过程, 推测EAE临床症状缓解可能也与此机制相关.     

Y-39983在实验性自身免疫性脑脊髓炎中的作用研究

目的 探讨Rho-ROCK信号途径与实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的关系及Y-39983在EAE中的作用.方法 动物被分为对照组(健康Lewis鼠)、EAE模型组及干预组,每组各30只.EAE模型组及干预组建立EAE动物模型.干预组于Lewis鼠发病第1天起连续3d给予腹腔注射Y-39983(20 μg/d),模型组同样于Lewis鼠发病第1天起连续3d给予腹腔注射生理盐水(20 μg/d).比较各组平均临床评分、发病高峰期持续时间及复发率;采用电镜观察法、HE染色、搔洛花青髓鞘染色、APC免疫荧光染色法观察各组脑组织病理变化;采用蛋白免疫印迹法检测各组蛋白脂蛋白(PLP)、髓磷脂碱性蛋白(MBP)及3-环腺苷酸-3-磷酸二酯酶(CNPase)等髓鞘蛋白分子及肌球蛋白轻链磷酸酶(p-MLC)、脑衰反应调节蛋白(CRMP-2)及LIM激酶2(LIMK2)等Rho激酶(ROCK)底物蛋白含量的变化.结果 干预组平均临床评分(1.076±0.682)、发病高峰期持续时间[(3.7±1.35)d]、疾病复发率(37.5％)均低于EAE模型组[分别为4.229±1.017、(5.3±1.46)d、46.67％](P＜0.05).干预组中脑组织中炎性反应及髓鞘脱失现象均较EAE模型组改善;脑组织中ROCK底物蛋白p-MLC、CRMP-2及LIMK2含量干预组较EAE模型组降低,髓鞘相关蛋白PLP、MBP及CNPase含量干预组较EAE模型组升高(均P＜0.05).结论 Y-39983可改善EAE临床症状,其可能作用机制为抑制ROCK激活,减少破坏轴突生长的底物蛋白生成,促进髓鞘蛋白形成及轴突再生.     

实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠穹窿下器凋亡细胞的观察

目的通过观察实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠不同时期下穹窿下器(SFO)凋亡细胞的变化,进一步探讨该室周器官在EAE发病过程中的意义。方法建立大鼠EAE模型,利用TUNEL技术来观察大鼠SFO在EAE不同时期细胞凋亡的改变。结果SFO的凋亡细胞在EAE 6小时、EAE 7天、EAE 14天、EAE 21天分别为(13.67±2.31)、(19.33±2.08)、(24.67±6.79)、(9.33±1.76),而对照组为(5.33±2.52)。与对照组比较,EAE 6小时、7天、14天组细胞凋亡数明显增加(P<0.05),EAE 21天组无显著差异(P>0.05)。结论SFO在EAE的不同时期凋亡细胞的变化与临床进展呈一致性,可能是血携免疫分子早期入脑的位点。     

雌激素对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的抗炎机制

目的 探讨雌激素减轻实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)炎症反应的可能机制.方法 用MOG35-55多肽诱发60只EAE小鼠模型,做去卵巢术.分为治疗组(n=30)和对照组(n=30),治疗组予雌激素治疗.比较两组EAE小鼠的临床症状评分.取脑和脊髓,行H-E染色观察病理学改变,实时荧光定量PCR及ELISA检测EAE小鼠CNS中白细胞介素(interleukin,IL)-17、IL-23、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)、干扰素γ(interferon γ,IFN-γ)、IL-4水平.结果 治疗组EAE小鼠与对照组相比临床症状减轻(P＜0.05);H-E染色显示治疗组炎细胞浸润减少(P＜0.05),实时荧光定量PCR及ELISA结果示治疗组CNS中IL-17、IL-23、TNF-α、IFN-γ表达降低而IL-4增加(P＜0.05).结论 雌激素可能通过降低IL-17、IL-23、TNF-α、IFN-γ,增加IL-4,从而减轻EAE小鼠炎症反应.     

实验性自身免疫性脑脊髓炎模型的建立和长期观察研究

目的 建立实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型(EAE)并长期观察研究.方法 C57BL/6小鼠30只,随机分为EAE模型组、PBS对照组和正常对照组.应用神经功能评分进行临床评估,通过HE和髓鞘染色观察组织病理变化.结果 小鼠在诱导后的12±3d急性起病,16±2d内达到高峰,严重度评分为3.2±0.6分.半年观察期内复发1次,复发率为25%.光镜下可见EAE组以脊髓组织病变为主,表现为大量炎性细胞浸润和白质脱髓鞘.结论 采用MOG_(35-55)诱导C57BL/6小鼠建立的模型既往被认为是一种慢性迁延EAE模型,本研究通过长期观察发现其存在缓解复发现象.

Abstract：

Objective To establish a mice model of experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) and perform a long term study. Methods C57BL/6 mice were immunized with 300μg MOG_(35-55) in complete Freund' s adjuvant (CFA) to establish EAE model in EAE group (n = 10). Mice in adjuvant group( n = 10)were treated with CFA without MOG_(35-55) and control group( n = 10)were treated with normal saline. The pathologic changes of the central nervous system were studied by HE staining and myelin staining. Results The clinic symptoms of EAE were present in the 12±3th day post-immunization,and went to the peek in the 16±2 th day post-immunization. The severity score was 3.2±0.6. One relapse was observed in the term of 6 months, and the rate was 25%. Light microscopy showed there were abundant inflammatory cells infiltrated especially in spinal cord tissues in EAE mice,with evident demyelination in white matter. Conclusion The relapse of this EAE model was observed in the study, though it was believed to be a chronic persistent model without relapse.