巴曲酶对大鼠大脑缺血及缺血再灌注ET1基因表达的影响

本实验采用大鼠急性脑缺血及缺血再灌注模型，研究巴曲酶对脑缺血及脑缺血再灌注时内皮素（ET1）基因表达的影响。用中大脑动脉（MCA）线检法大鼠模型，共12只，分为缺血组及缺血再灌注组（每组各6只），每组又分为巴曲酶组及盐水组（对照组）。缺血组在缺血后24h，再灌注组则在缺血1．5h及再灌注24h后用原位杂交，并采用IBHS图像分析系统研究ET1基因表达。发现巴曲酶组或对照组手术侧大脑皮质及尾壳核ET1mRNA表达均显著高于对侧（非手术侧）。但是巴曲酶组手术侧的ET1mRNA表达显著低于对照组。结果提示，巴曲酸可使缺血及缺血再灌注ET1基因表达下调。这可能是巴曲酶对缺血再灌注的脑保护作用机理之一。     

脑缺血再灌注后热休克蛋白70、c-fos的表达及柘树制剂的神经保护作用

目的 观察局灶脑缺血再灌注后热休克蛋白（HSP）70、c-fos的表达及其与细胞调亡的关系,探讨柘树制剂对脑缺血后神经细胞损伤的保护作用。方法 采用改良Longa法制作大鼠局灶脑缺血冉灌注模型。柘树制剂预处理组（柘树组）大鼠在实验前灌服柘树制剂2ml每日3次,连用5d。在缺血再灌注不同时点（1h、6h、12h、24h、3d、7d）将大鼠处死取腑,进行HSP70及c-fos免疫组化染色、c-fos mRNA原位杂交、原位末端标记（TUNEL）及HE染色,许对其阳性结果进行半定量分析。结果脑缺血再灌注能诱导HSP70及c-fos的表达。缺血冉灌注6h绀HSP70存缺血侧皮质及基底节开始表达,24h达高峰。缺血再灌注1h组c-fos即有表达,6h达高峰,后逐渐下降。细胞凋亡于缺血再灌注6h最显著。柘树组HSP70及c-fos表达的阳性细胞数均较缺血再灌注组明监增加,两组比较差异均有显著性（均P〈0．01）,而TUNEL阳性细胞数明显减少。结论 HSP70及c=-ros均参与了脑缺血的病理生理过程,柘树制剂对脑缺吡冉灌注损伤有保护作用。     

自由基清除剂预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织细胞凋亡及其相关蛋白表达的影响

目的探讨自由基清除剂依达拉奉预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡及其相关蛋白Bcl-2、Bax、热休克蛋白70(HSP70)表达的影响。方法将45只雄性SD大鼠随机分为假手术组、对照组、依达拉奉预处理组,每组15只。采用线栓法制作大鼠缺血2h再灌注24h模型。预处理组大鼠建模前12h腹腔注射依达拉奉(3mg/kg),对照组给予等容量生理盐水。再灌注24h后断头取脑,应用免疫组织化学法检测Bcl-2、Bax、HSP70蛋白表达,末端脱氧核糖核酸转移酶介导的原位缺口末端标记法检测凋亡细胞。结果依达拉奉预处理组和对照组大鼠缺血周围脑组织中凋亡细胞和Bcl-2、Bax及HSP70阳性细胞数比假手术组均明显增加(P<0.01);与对照组比较,其凋亡细胞和Bax阳性细胞数均明显减少(P<0.01),而Bcl-2和HSP70阳性细胞数明显增加(P<0.01)。结论细胞凋亡在缺血再灌注损伤中起着重要作用;依达拉奉可能通过上调Bcl-2、HSP70蛋白表达、下调Bax蛋白表达减轻大鼠脑缺血再灌注后的细胞凋亡,增加脑缺血再灌注损伤耐受性,从而起到神经保护作用。     

17β-雌二醇对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织HSP70表达的影响

目的观察雌二醇对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织HSP70表达的影响。方法72只大鼠随机分为假手术组(8只)、实验对照组及雌二醇治疗组,后两组又进一步分为局灶性脑缺血2h再灌注及3h、6h、12h、24h再灌注组,每时间点8只。线栓法建立大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤模型,采用石蜡切片HE及免疫组化染色法检测脑组织损伤及HSP70的表达情况。结果假手术组大鼠未见HSP70的表达;雌二醇治疗组的脑组织缺血半暗带区损伤程度较实验对照组明显减轻;随着再灌注时间的延长,治疗组半暗带区皮质HSP70的表达较对照组上调,且呈先上升后下降趋势,在12h为表达高峰;而纹状体区其表达呈进行性下调趋势。结论17β-雌二醇具有减少脑缺血/再灌注损伤的作用,而半暗带区皮质脑保护蛋白HSP70的表达升高可能其是重要机制之一。     

缺血后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤热休克蛋白70影响

目的探讨缺血后处理(Postcond)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤热休克蛋白70(HSP70)表达的影响,以探讨其脑保护的机制。方法成年健康SD大鼠45只,随机分为假手术组、缺血再灌注组、缺血后处理组,应用线栓法建立大脑中动脉闭塞(MCAO)再灌注模型,于灌注24h后断头留取大脑皮质组织,用免疫组化、Western blot检测HSP70蛋白的含量;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测HSP70mRNA表达水平。结果局灶性脑缺血再灌注24h后脑皮质内HSP70mRNA和HSP70蛋白的表达增加(P0.05)。应用缺血后处理能显著地促进脑缺血再灌注后脑组织HSP70mRNA和HSP70蛋白的表达(P0.05)。结论缺血后处理促进大鼠局灶性脑缺血再灌注皮质内HSP70的表达,这可能是其脑保护作用的部分机制。     

胰岛素对局灶性脑缺血再灌注大鼠HSP70表达的影响

目的 :探讨胰岛素对脑缺血再灌注损伤的中枢保护机制。方法 :参照ZeaLonga线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型 ,采用免疫组化法检测同一剂量胰岛素 ( 2IU·kg-1)对缺血再灌注不同时限点脑组织HSP70 蛋白的表达情况。结果 :与对照组相比 ,胰岛素能显著上调缺血侧大脑皮质及基底节区HSP70 蛋白的表达 ( χ2 检验 ,P <0 0 0 1) ,表达高峰主要在再灌注后 2 4h。结论 :胰岛素能上调缺血再灌注脑组织HSP70 蛋白的表达 ,这可能是其发挥中枢保护作用的机制之一     

丁苯酞对大鼠脑缺血再灌注损伤后HSP10表达的影响

目的研究丁苯酞干预对大鼠脑缺血再灌注损伤后不同时点脑组织中热休克蛋白10(HSP10)表达的影响,并探讨丁苯酞对缺血性脑血管病保护作用的机制。方法采用夹闭双侧颈总动脉的方法制作大鼠前脑缺血再灌注模型;H&E染色和NSE免疫组化染色神经元,观察脑组织的形态变化和记数各组神经元数目;免疫组织化学检测对照组、缺血再灌注组及丁苯酞干预组大鼠脑组织HSP10的表达水平变化。结果脑缺血再灌注后丁苯酞干预组及缺血再灌注组HSP10表达水平于再灌注后6h开始上调,3d达到高峰,丁苯酞干预组各时间点HSP10阳性表达指数均高于缺血再灌注组,丁苯酞干预组脑组织的损伤程度明显轻于脑缺血再灌注组(P<0.05)。结论丁苯酞可能通过上调大鼠缺血再灌注损伤后脑组织HSP10的表达,从而抑制前脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡,减少神经元死亡,减轻缺血再灌注后脑组织的损伤。     

大鼠局灶脑缺血/再灌注模型CD34表达及巴曲酶对其表达的影响

目的探讨巴曲酶对脑缺血组织早期侧支血管的形成和微血管的建立是否有促进作用。方法建立大鼠大脑中动脉缺血/再灌注模型,用免疫组化方法观察CD34在脑缺血/再灌注后不同时间的动态变化,比较巴曲酶组和模型组的异同。结果CD34微血管阳性表达:巴酶组缺血2h再灌注后1h、3h、6h、12h、24h、48h表达明显高于模型组,高峰为7d,以后降低,且各时间段的表达均高于模型组相应时间段,P<0.05。结论巴曲酶可促进大鼠局灶脑缺血后缺血组织微血管的形成和侧支动脉的建立。     

缺血后处理对大鼠脑缺血/再灌注损伤内质网应激通路相关分子的影响

目的探讨缺血后处理对大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤的保护作用及与内质网应激通路相关分子GRP78、caspase-12的关系。方法成年雄性Wistar大鼠58只,随机分为假手术组(sham组)、缺血/再灌注组(I/R组)和缺血后处理组(IP组),采用线栓法阻断大脑中动脉制备大鼠局灶性脑缺血/再灌注(MCAO)模型。大鼠脑缺血/再灌注后24 h进行神经行为学评分和脑梗死体积测定;脑缺血/再灌注6 h、12 h、24 h后免疫组织化学方法检测脑缺血侧半暗带区GRP78、caspase-12蛋白的表达。结果与缺血/再灌注组相比,后处理组再灌注24h神经行为学评分明显降低,脑梗死体积明显减少(P<0.05);后处理组再灌注12 h、24 h GRP78蛋白表达明显增加,再灌注24 h caspase-12蛋白表达明显减少。结论脑缺血后处理可能通过减弱内质网应激过程从而对随后发生的再灌注损伤起到了神经保护作用。其机制可能是增加GRP78蛋白表达、减少caspase-12蛋白表达而减轻神经细胞的凋亡。     

IGF-1对大鼠局灶性脑损伤c—los表达的影响

目的研究胰岛素样生长因子-1（IGF-1）对大鼠局灶性脑缺血再灌注后c-los表达的影响及与缺血时间关系，探讨IGF-1对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法制作SD大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。将55只SD雄性大鼠随机分为假手术组（n=5）、对照组（n=25）、IGF-1治疗组（n=25），其中后2组按缺血再灌时间（6h、12h、1d、3d、7d）不同可分为5个亚组，每组5只，治疗组于缺血2h再灌注1h后经腹腔注入40μg／kg稀释为1ml的IGF-1，假手术组及对照组同时腹腔注入生理盐水1ml。以上动物均在再灌注后规定时间点用4％多聚甲醛经心脏灌注固定，取大鼠脑组织，应用免疫组化S-P法和HE染色检测c-fos蛋白表达及脑组织结构病理变化。结果与对照组相比，治疗组大鼠脑组织c-fos表达明显减少，神经细胞坏死程度明显减轻。结论IGF-1在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中起保护作用，其作用机制包括降低c-fos的表达，发挥神经保护作用。     

Correlation between HSP70 and c-F0S expression and apoptosis in rats undergolng transient focal cerebral ischemla and reperfusion

OBJECTIVE To compare the induction of c-Fos and HSP70 and the presence of apoptosis and the influence of Ginkgo biloba extract (EGb761) in transient focal cerebral ischemic reperfusion rats.BACKGROUND Proto ancogene activation and induction of heat shock protein (HSP) occur in response to cerebral ischemia, but the correlation between these proteins and apoptosis remains uncertain. METHODS Healthy wistar rats were randomized to the normal control group(Group A, n=4), the Sham-operated control group(Group B, n=4), the ischemia and reperfusion group(Group C, n=24), the EGb761 pre-treated ischemia and reperfusion group(Group D, n=24). The rats of Group C and Group D were subjected to transient left middle cerebral artery occlusion (MCAO) as described by Zea longa for 1 hour. RESULTS Immunohistochemical analysis revealed no c-Fos or HSP70-immunoreactivity in Group A and Group B rats. However, in Group C rats, c-Fos was expressed in ipsilateral superficial cortical layers at 1 hour after reperfusion. At 6 hours, c-Fos immunoreactivities were increased in the ipsilateral cortex and were present in the contralateral cortex, while HSP70 were induced beginning in the ipsilateral neurons of MCA distribution. At 12 hours, the expression of c-Fos reached top in superficial cortical layers. At 24 hours HSP70 immunoreactivities reached top both in ipsilateral cortex and in ipsilateral striatum. At 3 days after recirculation, HSP70 expression decreased. c-Fos expression disappeared at day 7 and HSP70 expression only occured in endothelial cells. TUNEL staining showed that there was no cell apoptosis in Gronp A or in Group B. However, in Group C, TUNEL-positive neurons were observed in the border of the penumbra-like area that surrounds the ischemic core at 6 hours following reperfusion and then the number of TUNEL-positive cells reduced gradually. The changes in expression of HSP70 and c-Fos at different time points in Group D was in accord with in Group C, but the number of positive cells and the immunoreactivities in Group D were more intense than in Group C. We found only several TUNEL-positive cells at 6 hours following reperfusion in Group D and no TUNE;L-positive cells were present at other time points.CONCLUSION The present results indicate that c-Fos was expressed from an earlier stage of reperfusion and the expression occured in bilateral cerebral cortex. In contrast, HSP70 induction began later and only occured in ipsilateral neurons of MCA distribution. Our results indicated that EGb761 could increase the expression of c Fos and HSP70 and reduce the apoptosis of neurons.     

缺血再灌注时大鼠脑细胞外液中腺苷含量的变化及巴曲酶的影响

动态观察脑缺血及再灌注时鼠脑细胞外液中腺苷及其代谢产物的变化规律以及巴曲酶对此的影响。方法在大鼠四血管结扎缺血再灌注模型上，用微透析及高效液相色谱技术测定在缺血及再灌注时各时间点脑细胞外液中腺苷及其代谢产物的含量。结果对照组的腺苷、肌苷（Ｉｎｏ）、次黄嘌呤（Ｈｙｐ）、黄嘌呤（Ｘａｎ）在缺血和再灌注后的各时间点均显著升高。腺苷出现２个高峰，分别在缺血后２０分钟及再灌注１５分钟时，到再灌注６０分钟又回落到接近基础灌流水平。Ｉｎｏ、Ｈｙｐ及Ｘａｎ只在再灌注３０分钟时出现１个高峰，到再灌注６０分钟仍滞留在较高水平。巴曲酶组腺苷、Ｉｎｏ、Ｈｙｐ及Ｘａｎ的变化规律与对照组相同，但升高的幅度低于对照组。结论脑缺血及再灌注损伤时腺苷的水平明显升高，呈现缺血及再灌注时的２个高峰。腺苷代谢产物的升高时间略滞后，仅在再灌注３０分钟时达峰值。巴曲酶可抑制腺苷及其代谢产物的升高，可能与其减轻损伤程度有关     

脑缺血再灌注后脑组织c—fos基因表达与东菱克栓酶的影响

本实验采用线栓法制成大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,用地高辛精标记的c—fos探针进行原位杂交。结果示缺血再灌注组栓塞侧皮层及海马c—fos基因表达显著增多,图像分析灰阶值为118.6±5.1,对侧为159.6±3.1(P<0.001),东菱克栓酶组栓塞侧皮层及海马c—fos基因表达亦增多,灰阶为131.0±4.5,对侧为164.6±4.0(P<0.001)。克栓酶组与缺血再灌注组比较,栓塞侧东菱克栓酶组c—fos基因表达显示低于缺血再灌组(P<0.05),而两组栓塞对侧比较无显著差异。本实验表明,脑缺血再灌注后脑组织的c—fos基因表达显著增多,东菱克栓酶能抑制缺血后c—fos基因的表达,这可能是其治疗缺血性脑血管病的机理之一。     

The effect of ECr on HSP70 expression and morphologic changes following transient cerebral lschemia in rats

OBJECTIVE To investigate the effect of Cudrania tricuspidata root extract (ECr) on ischemic cerebral damage and the expression of the 70KDa heat shock protein (HSP70) following transient focal ischemia. BACKGROUND The role that ECr plays in cerebral ischemia has not been studied. METHODS Healthy wistar rats were randomized to the normal control group(Group A,n=4),the sham-operated control group(Group B,n=4),the ischemia and reperfusion group (Group C,n=24),the ischemia and reperfiusion after ECr pre- administration group(Group D,n=24).The rats of Group C and Group D were subjected to transient left middle cerebral artery occlusion (MCAO)as described by Zea Longa for 1 hour. Brain sections at the level of striatum were performed for HSP70 immunohistochemistry and morphology.HSP70 positive reactions and morphologic changes were semiquantiratively analyzedl. RESLULTS In the rats of Group A and Group B, there were scarcely HSP70 immunoreactivities either in cortex or in striatal neurons. In the ischemic brain regions for Group C rats,the HSP70 was induced in morphologically intact neurons and endothelial cells at hour 6 after recirculation, increased at hour12,peaked at day I, decreased at day 3,and HSP70 expression only occured in endothelial cells at day7. In Group D rats, the HSP70 was induced in the neurons of left MCA distribution at hour 1 after reperfusion, The changes in expression of HSP70 at different time points in Group D rats was in accord whth in Group C, but the number of HSP70 positive cells in Group D increased more, and HSP70 irnmunoreactivity in the HSP70-postive cells were more intense than in Group C. Histopathological study with HE staining showed no neuron pyknosis in Group A or in Group B. While pykrotic cells were present in the ipsilateral cortex and striatal neurons of MCA territory of Group C rats beginning at 6 hours after roper fusion. The change of histopathology in Group D was lighter at every time point. The number of pyknotic neurons in left MCA distribution was less than in Group C and there was no evident cell damage at 3 days and 7 days of reperfusion in Group D rats. CONCLUSION Our study demonstrated that transient focal cerebral ischenia could induce the HSP70 expression and induce neurons pyknosis.While ECr pre-treatment before transient focal ischemia in rats could increase the expression of HSP70 and reduce neuronal injury. These data suggests that might be able to enhance neuronal ischemic tolerance of the rats and might have prophylactic neuroprotective effect on ischemic cerebral damage in rats.     

巴曲酶对P-选择素表达的影响

目的动态观察巴曲酶对大鼠脑缺血/再灌注局灶血管表面P-选择素表达变化的影响.方法以ABC法显示使用巴曲酶后局灶血管表面P-选择素的阳性表达情况.结果使用巴曲酶可以使缺血/再灌注脑组织血管表面第24 h和第4 d时P-选择素的表达明显降低.结论巴曲酶可以降低血管表面P-选择素的表达, 对缺血脑细胞有保护作用.     

巴曲酶对脑缺血再灌注细胞外液单胺类及其代谢产物的影响——微透析研究

目的巴曲酶对脑缺血再灌流损伤的保护机理。方法采用脑内微透析技术结合高灵敏度的高压液相色谱－电化学检测手段（ＨＰＬＣ－ＥＤ），测定前脑缺血３０ｍｉｎ再灌注１２０ｍｉｎ时的纹状体细胞外液（ＥＣＦ）的ＤＡ、５－ＨＴ和ＮＥ及其代谢产物（５－ＨＩＡＡ）和ＨＶＡ的变化和巴曲酶的影响。结果显示脑缺血时，ＥＣＦＤＡ、ＮＥ及５－ＨＴ明显升高，巴曲酶能显著地降低脑缺血时ＥＣＦＤＡ及再灌注时ＥＣＦＨＶＡ和５－ＨＩＡＡ的水平。结论巴曲酶影响单胺神经递质是对脑缺血再灌注损伤起保护作用的机理之一     

巴曲酶对局灶性脑缺血再灌流大鼠成纤维细胞生长因子样免疫反应的影响

以往实验研究曾发现巴曲酶对脑血管病具有良好的神经保护作用。本文研究的目的为：巴曲酶是否还通过影响成纤维细胞生长因子起修复作用。用大鼠中大脑动脉（ＭＣＡ）线栓法脑缺血再灌注模型及免疫组化方法发现在缺血９０ｍｉｎ，再灌流４８ｈ后，缺血侧皮层、尾壳核及海马区ｂＦＧＦ样免疫反应细胞增加及神经细胞变性。在缺血后给予巴曲酶（８ＢＵ／ｋｇ），ｂＦＧＦ样免疫反应加强，并且缺血对侧相应ＭＣＡ供血脑区也可见轻度的ｂＦＧＦ样免疫反应改变，神经细胞变性之程度较轻。提示：巴曲酶对脑缺血再灌注的保护作用可能与它加强ｂＦＧＦ的修复作用有关。     

脑缺血后脑内HSP70表达的实验研究

热休克蛋白(HSP)是细胞对缺血等应激反应的敏感标记.通过建立大鼠全脑缺血模型,采用HSP70单克隆抗体LSAB免疫组化技术对脑缺血再灌注后的神经元进行了检测.发现在海马CA_3区,齿状回,尾壳核及杏仁核等处的神经元中有HSP70过量表达,并于再灌注后48h达到高峰.初步研究了HSP70在不同神经元中的分布情况,基本肯定不同神经元中HSP70的表达与神经元对缺血的耐受性有关.     

不同剂量巴曲酶对脑缺血沙土鼠的脑保护作用

目的　探讨巴曲酶对脑缺血沙土鼠脑保护作用的最佳剂量。方法　80只沙土鼠随机分为假手术组、对照组、巴曲酶治疗组(又分为1BU/kg、2BU/kg、4BU/kg、8BU/kg、16BU/kg、32BU/kg组),每组10只。制作完全性前脑缺血再灌注沙土鼠模型,制作模型前3h给予对照组沙土鼠腹腔注射生理盐水;巴曲酶组腹腔注射相应剂量的巴曲酶。用原位末端标记(TUNEL)法染色检测沙土鼠海马CA1 区凋亡细胞,光镜下计算海马CA1 区的神经元凋亡率。结果　巴曲酶8BU/kg、16BU/kg、32BU/kg组海马CA1 区细胞凋亡率明显减少,与对照组及巴曲酶1BU/kg、2BU/kg、4BU/kg组比较差异有显著性(均P<0. 01), 8BU/kg、16BU/kg、32BU/kg组之间差异无显著性(均P>0 .05)。结论　巴曲酶具有抗脑缺血后的细胞凋亡作用;巴曲酶8BU/kg为对脑缺血沙土鼠脑保护作用的最佳剂量。