新生儿溶血病的诊疗进展

新生儿溶血病(heamolytic disease of the newborn,HDN)特指由于母婴血型不合引起的同族免疫性溶血。HDN仅发生在胎儿和新生儿,属于一种自限性疾病,严重患儿可危及生命或终身留有神经系统后遗症。多种血型系统能够引起HDN,最常见的是ABO血型系统,其次为Rh血型系统,其他血型系统引起者偶见。我国绝大多数为ABO血型不合引起的HDN、Rh HDN少见,部分少数民族Rh阴性比例较高。随着改革开放和国内外人口流动增加,Rh阴性人群可能出现在全国各地,因此,应该加深对新生儿Rh HDN的认识。近年来HDN研究有许多进展,包括血型基因、实验室检查…     

新生儿溶血病的诊疗进展

新生儿溶血病（heamolytic disease of the newborn，HDN）特指由于母婴血型不合引起的同族免疫性溶血。HDN仅发生在胎儿和新生儿，属于一种自限性疾病，严重患儿可危及生命或终身留有神经系统后遗症。多种血型系统能够引起HDN。最常见的是ABO血型系统，其次为Rh血型系统，其他血型系统引起者偶见。我国绝大多数为ABO血型不合引起的HDN、Rh HDN少见，部分少数民族Rh阴性比例较高。随着改革开放和国内外人口流动增加，Rh阴性人群可能出现在全国各地，因此，应该加深对新生儿Rh HDN的认识。近年来HDN研究有许多进展，包括血型基因、实验室检查和一些观念上的认识，简述如下。     

CD437诱导HepG2细胞凋亡及机制的初步研究

目的 探讨CD437对HepG2细胞凋亡诱导作用及其对线粒体膜电位变化的影响.方法 ①MTT比色法观察CD437对HepG2细胞增殖的影响,倒置显微镜下观察细胞生长情况.An-nexin V-FITC/PI标记后,流式细胞术检测细胞凋亡.②罗丹明123(Rhodamine123,Rh123)荧光探针染色后,荧光显微镜下观察活细胞线粒体改变,并经流式细胞仪分析线粒体膜电位变化.结果 ①1 μmol/L CD437干预HepG2细胞24h后,实验组细胞早期凋亡率(18.26±5.31)%高于对照组(P<0.05),实验组细胞继发死亡率(20.31±3.70)%也高于对照组(P<0.05),CD437可导致细胞早期凋亡.②流式细胞仪结果表明CD437诱导HepG2细胞24 h后,实验组荧光强度为4.40±0.09,较对照组荧光强度5.34±0.12变弱(n=12,P<0.05),实验组整个峰向左移动,HepG2细胞线粒体膜电位水平下降.荧光倒置显微镜下观察发现,对照组罗丹明123荧光强度很强,大量细胞发出强烈荧光,实验组HepG2细胞内罗丹明123荧光强度很弱,很少见到强荧光细胞.结论 CD437可能通过降低线粒体膜电位水平而抑制HepG2细胞增殖并且诱导其凋亡.     

血小板自身抗体的流式细胞术检测与意义

目前血小板自身抗体的测定方法较为复杂,同时需要较多的血量,因此给儿科临床应用带来一定困难。本文拟应用流式细胞术建立一种简便、快捷、敏感的检测血小板相关抗体的方法。应用荧光素化的羊抗人Ｆ(ａｂ)２段ＩｇＧ抗体结合血小板表面的抗体,应用荧光素化的羊抗鼠ＩｇＧ抗体作为阴性对照。即以直接法测定血小板表面结合的ＩｇＧ。应用流式细胞术测定血小板的平均荧光强度。血小板荧光强度(ＭＦＩ)反映血小板表面ＰＡＩｇＧ的水平。测定正常人和特发性血小板减少性紫癜患儿的血小板平均荧光强度。结果显示:正常对照组的血小板平均荧光强度(ＭＦＩ)为２３．６７±９．１０(道数)。３１例ＩＴＰ组的ＭＦＩ为１０３．６３±３１．４１(道数)。ＩＴＰ病人的血小板荧光阳性率为９０%。治疗有效的病人,随血小板计数的上升,血小板荧光强度逐渐下降。因此,流式细胞术测定血小板抗体是一种快速、简便灵敏的ＰＡＩｇＧ检测方法,可用于免疫性血小板减少性紫癜的辅助诊断和疗效观察。     

儿童外周血不同类型白细胞柯萨奇-腺病毒受体的表达

目的研究柯萨奇-腺病毒受体（CAR）在儿童外周血不同类型白细胞中的表达。方法采用全血免疫荧光流式细胞术检测南华大学附属第一医院儿科2005年1-6月不同年龄组体检正常儿童外周血淋巴细胞、多形核细胞及单核细胞3种白细胞的平均荧光强度（MFI）和阳性细胞百分率（PPC）。结果流式细胞检测表明,同年龄组内多形核细胞及单核细胞MFI和（或）PPC比较无显著性差异（P〉0.05）,但2类细胞MFI和（或）PPC均显著高于淋巴细胞（Pa〈0.01）;不同年龄组淋巴细胞、多形核细胞及单核细胞3种白细胞的MFI和（或）PPC比较有显著性差异（Pa〈0.01）,其中以0-1岁组表达最高,2-3岁组次之,4-7岁组较低,8-15岁组表达最低。结论儿童外周血白细胞CAR表达以多形核细胞及单核细胞为主,流式细胞术是检测白细胞CAR表达的有效方法之一。     

Rh阴性孕妇血清中抗-RhD检测的意义

新生儿溶血病(heamolytic disease of thenewborn,HDN)是指母婴血型不合,母血中对胎儿红细胞的免疫抗体IgG通过胎盘进入胎儿循环,发生同种免疫反应而引起的溶血。虽然我国RhD(-)人群仅2‰~5‰[1],Rh引起的HDN相对ABO少见,但Rh血型D抗原是引起中等和严重程度HDN的最常见原因[2]。现将来我院做产前检查的4010例孕妇作Rh血型鉴定,RhD阴性者做抗-RhD及其效价检测结果报告如下。对象与方法一、对象1998年1月至2004年12月来我院做产前检测的孕妇4010例,其中Rh阴性孕妇共16例,平均年龄28岁(28±4.6);孕周为(35±2.6)周;第1胎6例,第2胎7例…     

大鼠骨髓间充质干细胞去血清培养后钙激活中性蛋白酶10基因转录变化

目的检测血清剥夺是否诱导骨髓间充质干细胞（BMSCs）凋亡,探讨钙激活中性蛋白酶-10（Calpain-10）是否参与血清剥夺诱导的大鼠BMSCs凋亡。方法原代培养的大鼠BMSCs,流式细胞术鉴定细胞表型,去血清培养,应用PI/Annexin-V双染法流式细胞仪计数0、24、48h凋亡细胞的比例,应用荧光定量PCR测定血清剥夺24h诱导凋亡的Calpain-10基因mRNA水平。结果流式细胞术鉴定细胞发现CD29、CD44、CD105表达阳性,CD45、CD14、CD34表达阴性,符合BMSCs特点;血清剥夺后24h早期凋亡细胞比例最高。荧光定量PCR结果示与正常对照组比较血清剥夺诱导凋亡24h Calpain-10基因mRNA水平显著上调（2-ΔΔCT=22.433）。结论血清剥夺可诱导大鼠BMSCs凋亡,并上调Calpain-10基因mRNA水平,Calpain-10可能参与血清剥夺诱导的大鼠BMSCs凋亡。     

286例RhD阴性孕妇血清IgG抗-D筛查与效价检测的意义

目的：RhD阴性孕妇血清IgG抗-D是引起母儿Rh血型不合溶血病的主要抗体。进行孕妇血清IgG抗-D筛查与效价检测,对预测和治疗该病有重要的参考意义。目前国内大规模的检测报道和临床分析不多,该研究对2001年3月至2007 年12月我院RhD阴性孕妇IgG抗-D筛查与效价检测的意义进行回顾性分析。方法：采集286例确认为RhD阴性孕妇的血清,作血型抗体筛查与特异性鉴定,并对抗体阳性患者作定期效价检测。结果：在286例孕妇血清中,IgG抗-D阳性21例,阳性率为7.3%;随着孕期时间的延长,抗体效价有明显增高的趋势。观察12例抗体阳性的胎儿（新生儿）,有2例胎儿死亡,2例全程健康;另有8例胎儿（新生儿）出现不同程度的溶血,经换血或输血治疗后,其预后较好。结论： RhD阴性孕妇IgG抗-D筛查与效价测定,对于Rh血型不合新生儿溶血病的预测、治疗具有重要价值。［中国当代儿科杂志,2009,11（3）：185-187］     

热休克蛋白90抑制剂DMAG对白血病细胞株HL-60的作用

目的研究热休克蛋白90(HSP90)抑制剂17-二甲胺乙胺基-17-去甲氧基格尔德霉素(DMAG)对白血病细胞株HL-60的抑制作用及相关机制。方法通过MTT法、流式细胞术检测HL-60细胞在DMAG作用下增殖及凋亡情况;流式细胞术检测HL-60细胞周期的改变;流式细胞术及Westen blot法检测HL-60细胞Raf蛋白含量;RT-PCR法检测raf-mRNA表达量的变化。结果 DMAG能抑制HL-60细胞的生长,并诱发凋亡。细胞周期分析显示,DMAG作用后,G0/G1期细胞增多,S期细胞减少。DMAG能降低HL-60细胞Raf蛋白的含量,但raf-mRNA表达量无明显变化。结论 DMAG能引起HL-60细胞的凋亡,抑制其生长。DMAG引起HL-60细胞凋亡的机制与降低Raf蛋白含量有关。     

孕妇IgG血型抗体与新生儿溶血病的关系

目的 探讨孕妇IgG血型抗体与新生儿溶血病(HDN)的关系.方法 对617例夫妇血型不合的孕妇进行产前血型血清学检查:包括孕妇ABO正反定型和Rh(D)定型;IgG抗-A(B)效价测定;不规则抗体筛查及抗体特异性和效价测定.对其中分娩的388例新生儿进行HDN确认试验:包括患儿ABO和Rh(D)定型;红细胞直接抗人球蛋白试验;血清游离抗体测定;红细胞抗体放散试验及血清胆红素测定.结果 1.孕妇617例中ABO血型不合者606例(98.2%),Rh(D)不合者15例(2.4%),ABO和Rh(D)同时不合者4例(0.6%).606例ABO血型不合孕妇中,IgG抗-A(B)效价≥64(定为抗体阳性)者250例(41.3%),其中O型204例(33.7%);A型32例(5.3%);B型14例(2.3%);O型孕妇与A、B型孕妇抗体阳性率分别比较,差异均有统计学意义(P<,a><0.01).617例孕妇不规则抗体筛查阳性者共10例(1.6%),经特异性鉴定均为Rh系统IgG抗体,效价8～256.2.新生儿388例共确认HDN 107例(27.6%).其中ABO-HDN 96例(24.7%),Rh-HDN 11例(2.8%);孕妇IgG抗-A(B)效价,低值组(≤64)与中值组(128～256)、高值组(≥512)ABO-HDN发病率分别比较,差异均有统计学意义(P<,a><0.01);11例Rh-HDN由抗-D(含抗-DC、抗-DE)引起6例(54.5%),抗-E(含抗-cE)引起的4例(36.4%),抗-c引起的1例(9.1%).结论 与A、B型孕妇比较,O型孕妇更易引起ABO-HDN,且ABO-HDN发病率随其母亲体内IgG抗体效价的升高而升高;Rh系统不规则抗体极易引起Rh-HDN,且与孕妇输血史和(或)不良妊娠史有关.     

阿糖胞苷体外对人白血病细胞株HL-60细胞增殖抑制和诱导凋亡的相关性研究

目的 　研究阿糖胞苷 (Ara -C)在体外对人白血病细胞株HL - 6 0增殖抑制和诱导凋亡的剂量 -时间 -效应关系。通过对Ara -C在不同剂量和疗程时抗白血病的机理研究 ,验证大剂量阿糖胞苷 (HD -AraC)治疗血液肿瘤的优越性。方法 　在体外设定的浓度梯度和作用时间下应用Ara -C处理人白血病HL - 6 0细胞 ,采用四氮唑盐还原法 (MTT法 )检测Ara -C对HL - 6 0细胞增殖抑制的剂量 -时间 -效应关系 ,荧光染色观察凋亡细胞形态学改变 ,琼脂糖凝胶电泳测定DNA梯带 (DNA ,Lad der) ,流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期变化。结果　荧光染色观察到特异性的凋亡小体形成 ,DNA琼脂糖凝胶电泳显示出典型的电泳条带变化 ,流式细胞仪检查见明显的凋亡峰形成 ,细胞周期主要阻滞在sub -G1期。MTT法显示阿糖胞苷作用于HL - 6 0细胞的半数抑制浓度 (IC50 )分别是 2 .4 1 μM和 1 1 .81 μM。统计分析表明 :随着药物浓度的增加和作用时间的延长 ,Ara -C对细胞的增殖抑制和诱发凋亡作用逐渐增强 (P <0 .0 5)。结论　诱导白血病细胞凋亡可能是Ara -C抗白血病的机理之一 ,通过诱导HL - 6 0细胞凋亡从而对其产生明显的增殖抑制作用 ,且与剂量、时间相关。提示应用HD -AraC治疗白血病 ,可以明显提高疗效。     

新生儿溶血病血清学变化特征分析

目的探讨新生儿母子血型不合溶血病血清学变化特征。方法选择我院2010年10月至2011年9月考虑母子血型不合溶血病所致新生儿高胆红素血症的患儿,回顾性分析患儿及母亲血型、新生儿溶血检测结果,并比较不同血型不合新生儿溶血病发生率、胆红素水平、Coomb’s试验、抗体弥散试验等结果。结果共收治母子血型不合的高胆红素血症患儿258例,入院日龄均≤72 h,其中O-A血型不合122例,O-B血型不合118例,Rh血型不合18例;发生溶血患儿分别为94例(77.0%)、85例(72.0%)、18例(100%);入院后最高胆红素分别为(352.0±120.2)、(383.9±116.3)、(455.9±145.4)μmol/L。Rh组胆红素水平和溶血发生率均高于O-A组和O-B组(P<0.05),O-A组和O-B组差异无统计学意义(P>0.05)。3组发生溶血患儿抗体弥散试验阳性率58.4%(115/197),Coomb’s试验阳性率19.3%(38/197)。O-A血型不合、O-B血型不合、Rh血型不合溶血病患儿Coomb’s试验阳性例数分别为18例(19.1%)、4例(4.7%),16例(88.9%),O-A血型不合、O-B血型不合溶血病患儿抗体弥散试验阳性例数分别为68例(72.3%)、47例(55.3%)。结论 Rh血型不合较ABO血型不合溶血患儿血清胆红素峰值、Coomb’s试验阳性率高,新生儿溶血病发生的严重程度与母亲血清Ig G亚型相关。     

新生儿Rh溶血病与溶血后贫血（附6例报告）

本文总结1989年6月至1990年8月住我院新生儿病区新生儿Rh溶血病6例（RhD溶血病3例，RhE溶血病2例,RhC溶血病1例）。6例患儿都有严重黄疸和不同程度的贫血。常规治疗外所有患儿均予输Rh血型与母亲相同，ABO血型与患儿相同的全血或Rh血型与母亲相同的O型血球纠正贫血，全部治愈出院。笔者强调对Rh阳性妇女所生婴儿发生严重黄疸、贫血时仍不能排除Rh溶血病可能，应想到RhD以外的Rh溶血症，如RhE或RhC溶血病。     

铜对大鼠肝细胞凋亡的影响以及姜黄素的保护作用

目的：探讨铜对大鼠肝细胞（BRL细胞）凋亡的诱导作用及其机制，研究姜黄素对BRL细胞铜损伤时的影响。方法：对硫酸铜（CuSO4）和姜黄素干预培养的BRL细胞，采用荧光探针DCFH-DA进行活性氧(ROS)测定，MTT法检测细胞活力，Hoechst染色和Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡。Western blot法检测磷酸化应激激活的蛋白激酶（JNK/SAPK）蛋白水平。结果：铜处理后6 h BRL细胞ROS和凋亡率达到高峰，分别为711.70±68.33，（45.08±1.87）%，铜处理后24 h JNK磷酸化率上升至（63.36±2.24）%，与正常对照组相比差异有显著性（P<0.01）；姜黄素组ROS、凋亡百分率和JNK磷酸化率均较相应对照组下降(P<0.01)。结论：一定浓度的铜可以诱导BRL细胞的凋亡且与活性氧的产生有关；姜黄素对铜损伤BRL的保护作用与抗氧化和抑制磷酸化JNK的表达有关。［中国当代儿科杂志，2007，9（6）：567-570］     

热毒宁继续医学教育园地——思考病例系列(3)答案

<正>(病例见本刊2010年第3期彩页)应做检查包括:(1)父母亲血型和母子的Rh血型鉴定。(2)关于新生儿ABO溶血病方面的检查,包括:直接抗人球蛋白实验(coombs试验);患儿免疫性抗体检测;患儿     

藏红花浸出液通过CD95/CD95-L途径诱导神经母细胞瘤发生凋亡

目的 研究在藏红花作用下人神经母细胞瘤的凋亡发生与CD95受体表达的情况。方法人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞的体外培养建立以后，分别加入不同浓度的藏红花浸出液进行培养。采用细胞计数法测定细胞生长曲线。细胞经碘化丙啶(PI)染色，采用流式细胞仪技术测定细胞周期及凋亡的发生。藏红花作用24h后，CD95受体表达通过抗CD95荧光抗体标记后的流式细胞仪方法检测。结果 藏红花浸出液(10mg/ml)对SK-N-SH细胞有明显的抑制作用，并可使S期细胞明显减少。浓度为10mg／lml和1mg／ml藏红花浸出液作用后细胞凋亡的发生明显增加。CDl95受体在所有SK-N-SH细胞中均有表达，经藏红花作用后，其表达有不同程度上调。结论 藏红花对SK-N-SH细胞具有抑制作用，其机制可能与藏红花能够诱导SK-N-SH细胞发生凋亡有关，CD95／CD95-L途径参与介导了诱发发生凋亡的过程。     

新生儿溶血病的血型血清学检查

新生儿溶血病是指因母子血型不合(ABO或Rh等)引起的同族免疫性溶血,免疫过程发生在母体,血型抗体IgG通过胎盘进入胎儿体内,与胎儿红细胞结合发生溶血。本病的诊断除根据母婴血型不合和临床上有溶血表现外,最主要是根据血型血清学实验室检查来确定诊断。通过血清学检查可了解:①母婴血型是否不合;②母亲血清中有无与婴儿红细胞相     

儿童常见实体瘤微小残留病检测研究进展

微小残留病(MRD)是实体瘤复发的主要原因,MRD目前常用检测方法包括流式细胞术、聚合酶链反应和荧光原位杂交技术等,新的高通量检测技术包括下一代测序等被用于发现更特异的基因改变作为检测分子标志,以进一步对MRD进行个体化监测。目前各实体瘤MRD检测技术均各有优势及不足,文章就儿童常见的实体瘤的检测方法及进展进行综述。     

毛壳菌素通过作用于JAK2-STAT3信号通路抑制神经母细胞瘤的增殖及迁移

目的探讨毛壳菌素影响神经母细胞瘤SH-SY5Y增殖和迁移的机制。方法应用DMSO作为对照,与毛壳菌素分别与SH-SY5Y细胞进行孵育,应用荧光定量PCR(RT-qPCR)和WB检测毛壳菌素的靶分子HIF-1α的mRNA相对表达水平以及蛋白表达水平。采用流式细胞术和CCK8实验检测细胞的增殖,利用Transwell试验检测细胞的迁移能力。采用流式细胞术和WB检测JAK2-STAT3信号通路的活化情况。结果人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中HIF-1α的m RNA相对表达量为1.68±0.06,显著高于人正常胶质细胞(0.98±0.05,均P 0.001),SH-SY5Y细胞系HIF-1α的WB检测的蛋白水平相对灰度值为1.81±0.04,显著高于人正常胶质细胞(0.97±0.06,均P 0.001)。毛壳菌素孵育后的SH-SY5Y细胞的Ki-67-high的占比为(35.89±7.23)%,显著低于DMSO对照组[(76.81±5.12)%,P 0.01]; Ki-67的平均荧光强度为573.7±80.25,显著低于DMSO对照组(1522±53.41,P 0.001)。CCK8检测细胞的增殖能力,毛壳菌素组在16h,24h和48h的OD450nm值分别为0.25±0.06,0.30±0.02,0.38±0.03,显著低于对照组(0.40±0.05,0.56±0.02,0.77±0.05,P 0.01)。迁移实验结果表明,DMSO对照组的迁移能力显著高于毛壳菌素组,细胞数分别为22816±4267.2和68172±9733.5,P 0.001。WB分析JAK2和STAT3的磷酸化水平,毛壳菌素孵育细胞的p-JAK2和p-STAT3的蛋白相对表达水平显著低于DMSO对照组,差异具有统计学意义(P 0.001)。流式细胞术分析SH-SY5Y细胞的p-JAK2和p-STAT3所占的比例及平均荧光强度,毛壳菌素组显著低于DMSO对照组,差异具有统计学意义(P 0.01)。WB和流式细胞术分别检测IL-6与毛壳菌素共同孵育后的JAK和STAT3的磷酸化水平,IL-6能够逆转毛壳菌素对JAK2和STAT3磷酸化的抑制作用。结论毛壳菌素可能通过抑制HIF-1α,抑制JAK2-STAT3信号通路的活化,从而抑制神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的增殖和迁移。     

Bmi-1和N-Myc共同超表达在神经母细胞瘤发生中的作用

目的 研究癌基因Bmi-1和N-Myc在神经母细胞瘤发生中的作用.方法 以神经母细胞瘤细胞系SHEP1细胞为模型,采用逆转录病毒转染法转染目的基因Bmi-1和/或N-Myc,免疫印迹法检测转染效果.软琼脂实验观察获得稳定高表达Bmi-1和/或N-Myc的各组细胞的致瘤性,流式细胞术观察Bmi-1和/或N-Myc转染细胞对凋亡因子(TRAIL和抗Fas抗体)的敏感性.结果 软琼脂实验显示对照组和单纯转染Bmi-1或N-Myc组均未见克隆形成,而Bmi-1和N-Myc共转染组可见克隆形成.流式细胞术发现,经各种凋亡因子作用后,与对照组相比,单纯转染N-Myc组细胞凋亡率显著升高(P＜0.05),而Bmi-1和N-Myc共转染组与单纯转染N-Myc组相比,细胞凋亡率显著降低(P＜0.05).结论 Bmi-1可以通过抑制N-Myc所致的神经母细胞瘤细胞对凋亡因子的敏感性,从而与N-Myc共同参与神经母细胞瘤的发生,是本病发生的关键环节.