PM2．5通过诱导AP-1活化介导支气管上皮细胞中VEGF的诱导表达和炎症反应

目的：探讨细颗粒物（particulate matter 2．5, PM2．5）可否通过诱导转录因子激活蛋白1（AP-1）活化介导支气管上皮细胞（bronchial epithelial cell, Beas-2B）中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的诱导表达及炎症反应。方法体外培养Beas-2B细胞,采用双荧光素酶报告基因法检测细胞中AP-1的诱导活化水平和VEGF基因启动子的转录活化水平;Western印迹法检测AP-1的2个组成亚基c-Jun、ATF2的诱导活化水平及VEGF的蛋白表达水平。结果 PM2．5可显著上调Beas-2B细胞中转录因子AP-1的转录激活活性;同时诱导AP-1组成亚基c-Jun和ATF2活化。 Beas-2B细胞中转染c-Jun或ATF2 siRNA后,可抑制AP-1的转录激活活性,同时VEGF的转录活化和蛋白表达也显著下调。结论 PM2．5通过活化AP-1可诱导支气管上皮细胞中VEGF表达及炎症反应。     

LPS的直接诱导对肺微血管内皮细胞内NF-κB的影响

目的：探讨LPS的直接诱导作用对肺微血管内皮细胞(PMVEC)核因子κB(NF—κB)的影响。方法：100ng/ml LPS刺激PMVEC 0h、0．5h、1h、2h、4h、6h、8h或10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml LPS刺激1h，凝胶电泳迁移率试验检测NF—κB的活化，免疫细胞化学观察其亚基p50、p65的核转位。并通过加入活化阻断剂TPCK观察对诱导的NF—κB活化的最响。结果：LPS的刺激迅速诱导p50、p65亚基核转位，活化NF—κB，1h达到简蜂，且呈剂量依赖关系，后逐渐下降。PDIC能显著抑制其活化，P＜0．01。结论：LPS的直接刺激诱导NF—κB的活化，这可能是LPS诱导炎症反应的一个重要环节。     

IL-1β诱导人气道上皮细胞hBD-2表达及其分子机制

目的观察白介素-1β（IL-1β）诱导人气道上皮细胞人13防御素2（hBD-2）的表达及抑制因子I-κBα蛋白、核转录因子KB（NF-κB）活性的变化，探讨人气道上皮hBI〉2表达的分子机制。方法用IL-1β和（或）NF-κB抑制剂PDTC处理人原代气道上皮细胞，RT-PCR法检测hBD-2mRNA的表达，Western blot检测胞浆I-κBa蛋白，凝胶迁移实验（EMSA）检测NF-κB活性的变化。结果加入IL-1β 1μg／L刺激0．5h，可见I-κBa活性降低；刺激1．5h可见hBD-2 mRNA表达。NF-κB抑制剂PDTC可抑制hBD-2 mRNA的表达，EMSA显示NF-κB的异型二聚体p65-p50参与了hBD-2表达的转录。结论一定剂量的IL-1β可诱导人气道上皮细胞hBD-2 mRNA表达，NF-κB p65／pS0异型二聚体参与了IL-1β诱导人气道上皮细胞hBD-2 mRNA表达的转录调控。     

低剂量电离辐射诱导转录因子NF-κB活化及其信号通路的实验研究

目的 研究低剂量电离辐射对转录因子NF—κB DNA结合活性的影响，探讨NF—κB结合活性信号传导通路的机理。方法 采用凝胶电泳移动变化分析及免疫组织化学的方法检测了X射线照射后FL-4细胞NF—κB DNA结合活性的时程变化及p65核转位、IκBα水平的变化，同时用脂质体介导的瞬时转染法将空质粒和NF-κB-荧光素酶表达质粒转染到NIH3T3细胞内，并用PKC信号通路阻断剂Calphostin C处理，检测受照后其荧光素酶的表达变化。结果 0．075Gy X射线照射可诱导NF—κB、p50／p65和p50／p50活性增强，而前者活性增强更明显。这种转录激活能力的增强，涉及到辐射诱导的p65核转位和IκBα水平的变化，表现为受照后p65亚基核阳性率明显升高，而IκBα水平的变化正相反，在照后4h分别达到峰值和低谷。而且PCK信号通路阻断剂Calphostinc可降低0．075Gy照射对NF—κB的活化效应。结论 低水平照射诱导NF-κB的迅速活化，而且可能通过PKC通路，进而调节细胞因子等特异基因的表达，促使免疫功能增强，这可能是低剂量辐射兴奋效应的机理之一。     

低温暴露诱导卵巢组织TNF⁃α表达水平上调的信号转导机制

目的 探讨低温暴露对卵巢组织炎性因子表达的影响及相关分子机制.方法 将6～8周龄雌性小鼠随机分为对照组以及低温暴露组,暴露后取卵巢组织,通过RT?PCR方法检测炎性因子表达水平,Western印迹法检测炎性反应相关蛋白的表达变化及活化情况.体外培养SKOV3细胞,进行温和冷暴露(35℃),通过RT?PCR和Western印迹法检测炎性因子和炎性反应相关蛋白的表达水平及活化情况.结果 低温暴露后卵巢的组织局部出现肿瘤坏死因子(TNF?α)表达水平的显著上调,炎性转录因子NF?κB p65活化.体外培养的SKOV3卵巢癌细胞经温和冷刺激后,同样能观察到TNF?α表达水平的显著上调和炎性转录因子NF?κB p65的诱导活化;在SKOV3细胞中转染NF?κB p65 siRNA后,可显著抑制TNF?α的诱导表达.结论 低温暴露通过诱导卵巢组织NF?κB p65活化介导炎性因子TNF?α上调及炎症反应.     

糖皮质激素抑制辐射诱导P388细胞NF-κB活化

目的 研究糖皮质激素对辐射诱导P388白血病细胞凋亡与NF－κB活化的影响。方法 采用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术（TUNEL）检测细胞凋亡；采用电泳迁移率变动分析（EMSA）检测P388细胞NF－κB活化水平。结果 2，4，6和8Gy辐射诱导P388细胞凋亡，同时使NF－κB活化。地塞米松（DXM）增强由2，4，6和8Gy辐射诱导的P388细胞凋亡，抑制由2，4，6和8Gy辐射诱导的P388细胞NF－κB活化，凋亡增加率分别为60％，100％，129％和67％，NF－κB活化抑制率分别为25％，45％，52％和40％。结论 辐射诱导P388白血病细胞凋亡的同时激活NF－κB；糖皮质激素可通过抑制NF－κB活化，增强其诱导白血病细胞凋亡的作用。     

NF-κB活化在烟雾吸入性损伤发生中的作用及地塞米松对其影响

为探讨NF－κB活化在大鼠烟雾吸入性损伤发生中的作用及地塞米松对NF－κB活化的影响，制作大鼠烟雾吸入性损伤模型，将大鼠随机分为正常对照组、烟雾致伤组及地塞米松治疗组，应用免疫组化方法观察伤前及伤后2、6、12、24、48、72h肺组织NF－κBP^65、IκB-α、TNF-α、ICAM-1蛋白表达的动态变化。结果显示，烟雾吸入性损伤后肺组织NF－κBP^65、TNF-α、ICAM－1蛋白表达升高，IκB-α表达降低。而地塞米松治疗组则下调NF－κBP^65、TNF-α、ICAM-1表达，上调IκB-α表达。提示NF－κB活化参与了烟雾吸入损害的发生、发展，而地米松则抑制NF－κB活化，部分阻断细胞因子及粘附分子产生，从而减轻炎症性损害。NF－κB活化可能是烟雾吸入性损伤炎症发展的关键点，从而为从转录水平作为靶点治疗烟雾吸入性损伤提供了理论依据。     

三氧化二砷通过抑制IKK/NF-κB信号通路活化发挥促乳腺癌细胞凋亡效应

目的探讨IKK/NF-κB信号通路在三氧化二砷（As2O3）诱导乳腺癌细胞凋亡反应中的作用。方法以乳腺癌细胞MCF7为靶细胞,以As2O3为刺激源,锥虫蓝（台盼蓝）拒染方法检测死亡细胞比率;双荧光素酶报告基因法检测MCF7细胞中NF-κB的活化状态;Western印迹方法检测IKK/NF-κB途径各信号分子的表达水平和活化状态;RT-PCR方法检测IKK/NF-κB途径下游靶基因的表达水平。结果 As2O3可显著诱导MCF7细胞凋亡;同时NF-κB的转录活化水平及其下游凋亡反应相关靶基因的表达水平也明显下降。在此过程中,I-κB的表达水平和NF-κB关键组成亚基（p65、p50）的核浆分布状态没有改变,但IKK激酶的两个催化亚基IKKα和IKKβ的表达水平明显下调。一过性高表达IKKα和IKKβ不仅能够恢复NF-κB的活化状态,而且能够拮抗As2O3诱导的乳腺癌细胞凋亡反应。结论 As2O3可通过在蛋白激酶水平抑制IKK/NF-κB信号通路活化从而发挥促乳腺癌细胞凋亡效应。     

LPS诱导肺微血管内皮细胞ICAM-1的表达及核调控机理的实验研究

目的：研究细胞脂多糖（LPS）诱导的肺微血管内皮细胞（PMVEC）ICAM－1的表达及调控机制，方法：100ng.ml^-1LPS刺激PMVEC0h,2h,4h,6h,8h或10ng.ml^-1，50ng.ml^-1,100ng.ml^-1LPS刺激6h，免疫细胞化学检测PMVECICAM－1的表达，凝胶电泳迁移率变化分析检测NF－κB的活化，并通过加入活化阻断剂PDTC观察对PMVEC ICAM－1表达的影响。结果：PMVECICAM－1的表达与LPS的刺激呈时相－剂量依赖方式，LPS的刺激迅速活化NF－κB，60min达到高峰，后逐渐下降，PDTC能显著降低ICAM－1的表达（P＜0．01），结论：LPS刺激诱导NF－κB的活化，启动ICAM－1的合成表达。     

子宫内膜异位症核转录因子和血管内皮生长因子表达与预后的关系

目的：探讨核转录因子（NF—κB）和血管内皮生长因子（VEGF）的表达与子宫内膜异位症（内异症）预后的关系。方法：采用免疫组化SP法检测83例内异症患者在位及异位组织标本中的NF—κB和VEGF的表达水平，并结合患者临床病案记录及随访资料进行分析。结果：NF—κB在内异症患者的异位和在位内膜中的表达率分别为73．49％及59．04％，VEGF表达率分别为69．88％及和55．42％。NF—κB和VEGF在两种内膜中表达一致性均良好，且两者表达具有正相关性（在位内膜：κappa=0．78，r=0．78，P〈0．01；异位内膜：κappa=0．69，r=0．67，P〈0．01）。NF—κB和VEGF高表达的异位症患者复发率明显高于低表达患者（P〈0．05）。结论：NF—κB和VEGF的表达对估计内异症的预后有重要的意义，可做作为判断内异症预后的指标。     

氯喹抑制EC DNA、内毒素协同诱导的IL-6释放

为明确氯喹抑制细菌DNA，内毒素协同诱导IL－6释放的作用机制，将小鼠于实验前1h经腹腔注射D－DalN敏化，观察氯喹对CpG,ODN或LPS攻击小鼠7天内死亡率的影响；体外培养ANA－1细胞，观察氯喹对EC DNA和LPS共同诱导IL－6释放能力的影响，体外培养THP－1细胞，观察氯喹对EC DNA和LPS刺激THP－1细胞后TLR9、TLR4表达与NF－κB活化的影响。结果发现，小鼠在CpG ODN或LPS攻击后4h内全部死亡，但预先给予氯喹（30mg/kg)的CpG ODN,LPS攻击小鼠仅分别有4只和5只死亡（P＜0．05），氯喹可明显降低EC DNA、LPS协同诱导的IL－6释放（P＜0．01），EC DNA和LPS均可诱导TLR7、TLR4的表达和NF－κBp65的活化，氯喹可显著抑制ECDNA和LPS诱导的TLR8表达的以及LPS诱导的NF－κB活化，对TLR4的表达抑制作用较弱，对CpG ODN诱导的NF－kB活化抑制作用亦较弱，提示氯喹能够明显降低ECDNA和LPS协同诱导的IL－6释放，该作用与氯喹对CpGODN,LPS攻击小鼠的保护作用密切相关。     

IL-1β诱导人气道上皮细胞hBD-2表达及其分子机制

目的观察白介素-1β(IL-1β)诱导人气道上皮细胞人β防御素-2(hBD-2)的表达及抑制因子I-κBα蛋白、核转录因子κB(NF-κB)活性的变化,探讨人气道上皮hBD-2表达的分子机制. 方法用IL-1β和(或)NF-κB抑制剂PDTC处理人原代气道上皮细胞,RT-PCR法检测hBD-2 mRNA的表达,Western blot检测胞浆I-κBα蛋白,凝胶迁移实验(EMSA)检测NF-κB活性的变化. 结果加入IL-1β 1μg/L刺激0.5h,可见I-κBα活性降低;刺激1.5h可见hBD-2 mRNA表达.NF-κB抑制剂PDTC可抑制hBD-2 mRNA的表达,EMSA显示NF-κB的异型二聚体p65-p50参与了hBD-2表达的转录.结论一定剂量的IL-1β可诱导人气道上皮细胞hBD-2 mRNA表达,NF-κB p65/p50异型二聚体参与了IL-1β诱导人气道上皮细胞hBD-2 mRNA表达的转录调控.     

核因子—κB在内毒素刺激大鼠肺泡巨噬细胞中的动态变化及其在肿瘤坏死因子—α表达中的作用

目的 观察内毒素(LPS)刺激对大鼠肺泡巨噬细胞(alveolar macrophages，AM)中核因子—κB(NF—κB)活性的影响，探讨NF—κB在LPS刺激大鼠AM表达肿瘤坏死因子—α(刀NF—α)中的作用。方法体外观察LPS刺激大鼠AM中NF—κB活性的动态变化，应用圈套策略观察NF—κB在LPS刺激大鼠AM表达刀NF—α中的作用。结果LPS刺激可使大鼠AM内NF—κB明显活化，并与LPS剂量正相关；抗体超迁移率实验结果显示p50、p65参与了NF—κB的活化；NF—κB的圈套硫代寡核苷酸(S—ODN)能明显抑制LPS刺激大鼠AM表达TNF—α，但不能完全阻断LPS诱导的TNF—α表达。结论 NF—κB(p50／p65)在LPS介导的炎症反应中发挥重要作用，LPS刺激大鼠AM表达TNF—α受NF—κB调控，但其他核转录因子可能也在TNF—α的表达中发挥重要作用。     

核因子-κB在内毒素刺激大鼠肺泡巨噬细胞中的动态变化及其在肿瘤坏死因子-α表达中的作用

目的　观察内毒素 (LPS)刺激对大鼠肺泡巨噬细胞 (alveolarmacrophages,AM)中核因子 -κB(NF -κB)活性的影响 ,探讨NF -κB在LPS刺激大鼠AM表达肿瘤坏死因子 -α(TNF -α)中的作用。　方法　体外观察LPS刺激大鼠AM中NF -κB活性的动态变化 ,应用圈套策略观察NF-κB在LPS刺激大鼠AM表达TNF -α中的作用。　结果　LPS刺激可使大鼠AM内NF -κB明显活化 ,并与LPS剂量正相关 ;抗体超迁移率实验结果显示p5 0、p6 5参与了NF -κB的活化 ;NF -κB的圈套硫代寡核苷酸 (S -ODN)能明显抑制LPS刺激大鼠AM表达TNF -α ,但不能完全阻断LPS诱导的TNF -α表达。　结论　NF -κB(p5 0 p6 5 )在LPS介导的炎症反应中发挥重要作用 ,LPS刺激大鼠AM表达TNF -α受NF -κB调控 ,但其他核转录因子可能也在TNF -α的表达中发挥重要作用。     

三氧化二砷通过抑制IKK/NF-κB信号通路活化发挥促乳腺癌细胞凋亡效应

目的探讨IKK/NF-κB信号通路在三氧化二砷(As2O3)诱导乳腺癌细胞凋亡反应中的作用。方法以乳腺癌细胞MCF7为靶细胞,以As2O3为刺激源,锥虫蓝(台盼蓝)拒染方法检测死亡细胞比率;双荧光素酶报告基因法检测MCF7细胞中NF-κB的活化状态;Western印迹方法检测IKK/NF-κB途径各信号分子的表达水平和活化状态;RT-PCR方法检测IKK/NF-κB途径下游靶基因的表达水平。结果 As2O3可显著诱导MCF7细胞凋亡;同时NF-κB的转录活化水平及其下游凋亡反应相关靶基因的表达水平也明显下降。在此过程中,I-κB的表达水平和NF-κB关键组成亚基(p65、p50)的核浆分布状态没有改变,但IKK激酶的两个催化亚基IKKα和IKKβ的表达水平明显下调。一过性高表达IKKα和IKKβ不仅能够恢复NF-κB的活化状态,而且能够拮抗As2O3诱导的乳腺癌细胞凋亡反应。结论 As2O3可通过在蛋白激酶水平抑制IKK/NF-κB信号通路活化从而发挥促乳腺癌细胞凋亡效应。     

IKKα通过激活p38 K介导紫外线诱导的p53活化反应

目的：探讨IκB激酶（IκB kinase,IKK）催化亚基α（IKKα）在紫外线（ultraviolet radiation, UV）诱导的细胞反应中介导p53活化的信号转导机制。方法采用双荧光素酶报告基因分析系统检测在UVB诱导细胞反应中p53的转录激活活性。 Western印迹检测IKKα、p53、p38K蛋白表达水平和诱导活化状态。结果 UVB在野生型小鼠成纤维细胞中能显著诱导p53发生磷酸化修饰反应;同时转录激活活性显著提高,IKKα基因敲除后,以上活化反应受到显著抑制,而恢复IKKα表达水平后这种活化反应得以恢复。同样条件下IKKα也能调节p38K的诱导活化,抑制p38K活性显著下调p53的诱导活化水平。结论 IKKα能通过调控p38K活化进而介导UVB诱导p53磷酸化修饰反应。     

X射线诱导转录因子活化与凋亡的关系

目的 通过观察较高剂量照射的鼠胸腺细胞内几种转录因子活性的变化和胸腺细胞凋亡发展时程，探讨转录因子活性的变化在辐射诱导的免疫细胞凋亡中的作用。方法 通过电泳移动变化分析及流式细胞术的方法分别检测了2Gy X射线全身照射后胸腺细胞内转录因子NF－κB、CREB和OCT－1活性以及胸腺细胞凋亡的动态变化。结果 2Gy X射线全身照射后胸腺细胞内NF－κB两种二聚体p50/p50和p50/p65的DNA结合活性的变化存在着明显的区别，主要以p50/p50活性显著升高为特征，CREB OCT－1的活性也明显增强，活性高峰均出现了照射后4－12h，而它们的活性高峰又恰与2Gy照射诱导的胸腺细胞凋亡的高峰相吻合。结论 较高剂量电离辐射主要诱导NF－κB同源二聚体的DNA结合活性增强；3种转录因子NF－κB p50/50、CREB以及OCT－1可能在2Gy照射诱导的胸腺细胞内具有协同促进细胞凋亡的作用。     

紫外线通过诱导TNF-α胞内聚集间接调控VEGF分泌表达

目的 探讨紫外线(UVB)反应中TNF-α在介导VEGF诱导表达中的作用.方法 采用TNF-α特异性shRNA转染小鼠成纤维细胞(MEFs)并建立稳定细胞株;RT-PCR方法验证TNF-α shRNA的有效性;荧光素酶报道分析系统检测vegf基因启动子活性;ELISA方法检测VEGF的分泌表达水平.结果 本课题组构建的TNF-α shRNA能够有效抑制UVB刺激作用下TNF-α的诱导表达;同样条件下,UVB诱导vegf基因启动子活性上调趋势被TNF-α shRNA显著抑制;同时VEGF的胞外分泌表达水平明显下降.结论 UVB反应中TNF-α可间接介导VEGF的诱导表达.     

人脑外伤后皮层核因子-κB的表达

目的 探讨核因子-κB（nuclear factor—κB，NF—κB）在人创伤性脑损伤（traumatic brain injury，TBI）后挫伤皮层中的表达情况，包括表达位置、表达强度和表达时相。方法 挫伤区皮层的标本来自24例TBI患者，取样时间为伤后5h-5d，利用凝胶电泳迁移分析法（electrophoretic mobility shift assay，EMSA）和免疫组化技术测定NF—κB的活性和表达强度。结果 在人TBI后的挫伤区皮层中，NF—κB表达明显上调，表达高峰为伤后48—72h，NF—κBP65主要在血管内皮细胞和神经胶质细胞中表达，NF—κBP50主要在神经胶质细胞和少量神经元中表达，NF—κBP65的表达强度高于NF—κBP50。结论 NF—κB在人TBI后的挫伤区皮层中表达上调，提示其可能在TBI后的病理生理过程中起着重要作用。     

旁路活化补体激活内皮细胞表达趋化因子及其NF-kB调控作用的实验研究

目的 研究旁路活化补体在一定条件下直接激活内皮细胞表达趋化因子白介素（IL－8）、单核细胞趋化蛋白（MCP－1）、以及核转录因子kappaB(NF-kB)在其中的调控作用。方法 用酵母多糖活化人血清（ZAHS）直接作用于体外培养的人脐静脉内皮细胞单层（HUVECS）：放射免疫法（RIA）和酶联免疫吸附实验（ELISA）检测IL－8和MCP－1的表达水平；凝胶电泳迁移率（EMSA）方法测定NF－kB的活化。结果：（1）ZAHS（1：30）能够诱导内皮细胞表达IL－8和MCP－1，但二者时相变化明显不同。IL－8从4小时开始即有明显上升；而MCP－1水平则从8小时才开始有显著增加。（2）ZAHS能够激活NF－kB,30分钟时即有活化，60分钟明显增加，120分钟达到高峰。NF－kB抑制剂PDTC（pyrrolidine dithiocarbamate,20μmol/L）预先处理HUVECS单层2小时，可以明显降低IL－8和MCP－1的表达（P＜0．05）。结论 旁路活化补体能直接在转录水平诱导人脐静脉内皮细胞表达IL－8和MCP－1，这一过程至少部分通过NF－kB的活化来调控。