青蒿琥酯逆转Eca109/ABCG2细胞对阿霉素耐药的作用及机制

目的研究青蒿琥酯(Art)逆转食管癌耐药细胞Eca109/ABCG2对阿霉素(ADM)耐药的作用及其机制。方法采用不同浓度的青蒿琥酯(Art,0、0.01、0.1、1μmol/L),阿霉素(ADM,0、0.02、0.2、2、20mg/L),Art(0.01、0.1、1μmol/L)+ADM(0.02、0.2、2、20mg/L)处理Eca109/ABCG2细胞48h,然后以MTT法检测细胞生长抑制率。采用ADM(0、0.02、0.2、2mg/L),Art(0、0.01、0.1、1μmol/L)和ADM(0.2mg/L)+Art(0.01、0.1、1μmol/L)处理细胞,48h后以流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率及细胞内ADM含量,72h后检测细胞内ABCG2蛋白的表达。结果与单独应用Art或ADM相比,Art+ADM处理后,Eca109/ABCG2细胞的生长抑制率、凋亡率和细胞内ADM含量均显著增加(P<0.05),而细胞内ABCG2蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论 Art可通过下调Eca109/ABCG2细胞ABCG2蛋白表达,增加细胞内ADM的药物浓度,从而增强疗效、逆转耐药。     

补骨脂素对MCF-7/ADR耐药细胞内ADR及Ca2+浓度的影响

目的 研究补骨脂素对MCF-7/ADR耐药细胞逆转作用及对耐药细胞内Ca2 浓度影响,探讨其可能作用机制.方法 采用MTT法测定补骨脂素对细胞增殖抑制作用,高效液相色谱法检测细胞内ADR的浓度,激光共聚焦显微镜测定细胞内不同时段的Ca2 浓度.结果 补骨脂素在1～20 μmol/L浓度下能不同程度降低ADR对MCF-7/ADR细胞的IC50,并不同程度提高细胞内ADR浓度;1～20 μmol/L补骨脂素在不同作用时段(24、48、96 h)对MCF-7/ADR细胞内Ca2 浓度与作用时间呈负相关.结论 补骨脂素能逆转MCF-7/ADR细胞的MDR,其作用机制与影响耐药细胞内Ca2 浓度,故而增加细胞内ADR浓度有关.     

姜黄素协同阿霉素抑制乳腺癌细胞生长的作用及其机制

目的探讨姜黄素联合阿霉素(adriamycin,ADM)对人乳腺癌MCF-7及MDA-MB-231细胞生长的影响及其作用机制。方法将体外培养的乳腺癌MCF-7及MDA-MB-231细胞处理不同浓度的姜黄素及ADM,MTT法检测细胞成活率,等效剂量法(Calcusy)分析联合指数,然后利用免疫印迹法检测PARP、Bcl-2、Bax及NF-κB(p65)蛋白表达水平。结果姜黄素和ADM两者合用可以协同抑制人乳腺癌MCF-7及MDA-MB-231细胞生长,其联合指数(ED50CI)分别为0.7和0.62。免疫印迹结果显示,联合给药可以明显增强MCF-7细胞PARP蛋白裂解,抑制Bcl-2蛋白表达,但对Bax蛋白表达无明显影响。联合用药可以抑制ADM诱导的NF-κB信号通路激活。结论姜黄素和ADM可能通过抑制ADM诱导的NF-κB激活继而促进肿瘤细胞凋亡来发挥协同的抗乳腺癌作用。     

乳腺癌患者婆罗双树样基因4表达情况及PTEN/AKT/mTOR通路对乳腺癌阿霉素耐药性作用研究

目的探讨乳腺癌患者婆罗双树样基因4(SALL4)的表达情况,以及PTEN/AKT/mTOR通路对乳腺癌阿霉素耐药性的作用。方法选取海南省人民医院自2010年6月至2022年6月收治的90例乳腺癌手术患者为研究对象并提取患者乳腺癌组织及癌旁组织。采用免疫组织化学法检测乳腺癌组织的SALL4表达情况,计算阳性表达率。采用Western Blot和荧光定量聚合酶链反应法检测SALL4蛋白表达和mRNA表达。采用阿霉素处理人乳腺癌细胞MCF-7、其阿霉素耐药细胞MCF-7/ADR以及在MCF-7/ADR细胞中沉默SALL4构建的shSALL4-MCF-7/ADR细胞三种细胞,采用MTT法检测处理24、48 h后的IC50。采用Western Blot法检测MCF-7、MCF-7/ADR、shSALL4-MCF-7/ADR细胞的PTEN、p-AKT、AKT、p-mTOR、mTOR蛋白相对表达量。比较乳腺癌及癌旁组织中的SALL4表达水平,不同病理特征乳腺癌患者的SALL4表达阳性率;分析SALL4对乳腺癌细胞阿霉素耐药性及PTEN/AKT/mTOR通路的影响。结果90例患者中,SALL4表达阳性34例,阳性表达率为37.78%(34/90)。乳腺癌组织中SALL4蛋白相对表达水平和SALL4 mRNA相对表达水平均高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。不同年龄、病理类型、组织学分级、肿瘤大小及雌激素受体、孕激素受体、人表皮生长因子受体、Ki67表达患者的SALL4表达阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05);有淋巴结转移患者的SALL4表达阳性率高于无淋巴结转移患者,差异有统计学意义(P<0.05)。阿霉素处理24、48 h后的MCF-7/ADR细胞的IC50均高于MCF-7细胞,差异有统计学意义(P<0.05);在MCF-7/ADR细胞中沉默SALL424、48 h后的shSALL4-MCF-7/ADR细胞的IC50均较MCF-7/ADR细胞降低,差异有统计学意义(P<0.05)。MCF-7/ADR细胞的PTEN蛋白表达低于MCF-7细胞,p-AKT和p-mTOR蛋白表达高于MCF-7细胞,差异有统计学意义(P<0.05);沉默SALL4后,shSALL4-MCF-7/ADR细胞的PTEN蛋白表达升高,高于MCF-7/ADR细胞,p-AKT和p-mTOR蛋白表达下降,低于MCF-7/ADR细胞,差异有统计学意义(P<0.05)。结论SALL4在乳腺癌组织中的表达高于癌旁组织,且与淋巴结转移明显相关。沉默SALL4可抑制乳腺癌细胞的增殖活性,降低阿霉素的耐药性,且SALL4对乳腺癌细胞阿霉素耐药性的影响与PTEN/AKT/mTOR通路有关。     

PPMP调控KBv_(200)细胞株mdr1基因表达逆转其多药耐药

为研究糖脂合成酶抑制剂苯基棕榈酰胺吗啡丙醇 (DL threo 1 phenyl 2 palmitoylamino 3 morpholi no 1 propanol·HCl,PPMP)对人恶性肿瘤多药耐药细胞株KBv2 0 0 多药耐药mdr1基因的mRNA表达的调控 ,以及PPMP对细胞株KBv2 0 0 的多药耐药性的逆转作用 ,作者应用体外细胞培养技术对细胞株KBv2 0 0 进行PPMP处理 ,用RT PCR技术分析PPMP处理前后细胞mdr1的mRNA表达 ,以流式细胞仪检测PPMP处理前后KBv2 0 0 及其敏感株KB细胞内罗丹明 12 3的药物浓度变化。结果显示 5 μmol/L、15 μmol/LPPMP可部分抑制KBv2 0 0 细胞mdr1mRNA表达 ,2 5 μmol/LPPMP可完全抑制KBv2 0 0 细胞mdr1mRNA表达 ;PPMP可增加KBv2 0 0 细胞内罗丹明荧光强度 ,随着PPMP浓度的增加 ,耐药细胞内的罗丹明荧光强度逐渐增大。提示PPMP对细胞株KBv2 0 0 的多药耐药基因mdr1有抑制作用 ,并可以逆转KBv2 0 0 的多药耐药性 ,逆转作用与PPMP浓度呈正相关     

肿瘤细胞MDR1基因多药耐药的研究进展

MDR1基因的过度表达是肿瘤细胞多药耐药的主要原因。作为肿瘤细胞多药耐药性基因重要的表达产物,MDR1与细胞内药物浓度及耐药程度密切相关。通过对多药耐药基因表达的检测及对耐药性逆转药物的研究,临床医师根据患者的基因型资料制定肿瘤化疗方案,选择合适的药物,达到减少耐药性,提高临床疗效的目的。     

卵巢癌细胞株COC1/DDP多药耐药逆转前后HLA、B7表达的实验研究

目的 :探讨卵巢癌多药耐药 (multidrugresistance ,MDR)细胞的免疫逃逸机制。方法 :利用三苯氧胺 (TAM)和维拉帕米 (VRP)为逆转剂 ,运用MTT法分析了TAM、ARP的逆转效应。采用流式细胞仪技术检测耐药亚株COC1/DDPMDR逆转前后及亲本株COC1细胞的HLA -Ⅰ、HLA -Ⅱ、B7-1、B7-2的表达。结果 :COC1/DDP和COC1均表达较强的HLA -Ⅰ类抗原 ,而HLA -Ⅱ、B7-1、B7-2的表达较较低。但COC1/DDP的B7-1、B7-2抗原的表达却高于COC1。经TAM、VRP作用后 ,COC1/DDP的耐药性发生逆转 ,但HLA、B7的表达无明显变化。结论 :TAM、VRP可以逆转卵巢癌的MDR细胞 ,敏感株细胞和多药耐药细胞有着不同的免疫逃逸机制 ,与耐药株相比 ,敏感株细胞更易逃避机体的免疫反应 ,过继免疫疗法可用于耐药肿瘤     

重组人p53腺病毒在乳腺癌裸鼠体内耐药逆转作用及其对P-糖蛋白表达的影响

目的 研究重组人p53腺病毒（rAd-p53）对人乳腺癌MCF-7/ADR裸鼠移植瘤的耐药逆转作用及其对耐药相关P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）表达的影响.方法 建立人乳腺癌MCF-7/ADR裸鼠耐药模型,随机分为对照组、rAd-p53组、阿霉素组、联合组,分别给予不同治疗.观察裸鼠肿瘤体积的变化,western blot检测P-gp蛋白表达情况.结果 成瘤后rAd-p53组、阿霉素组、联合组抑瘤率分别为42.05％、49.21％、69.97％,各治疗组体积与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05）,且联合组显著优于rAd-p53组和阿霉素组（P＜0.05）.对照组、rAd-p53组、阿霉素组、联合组P-gp表达水平分别为（0.5964±0.0806）、（0.5506±0.0127）、（0.5641±0.0055）、（0.4652±0.0982）,联合组P-gp表达水平低于其他各组.结论 Ad-p53对人乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF4/ADR建立的裸鼠移植瘤具有多药耐药的逆转作用,并可下调P-gp的表达.     

ZNRD1基因的克隆及其反义核酸对胃癌耐药细胞阿霉素蓄积的影响

为获得ZNRD1基因的编友区序列，构建反义真核表达载体，通过检测ZNRD1基因反义核酸转染对胃癌长春新碱耐药细胞SGC7901／VCR阿霉素（ADM）积蓄能力的影响，评价ZNRD1在抗胃癌细胞多药耐药性方面的应用前景。用PCR方法扩增目的基因序列，PCR产物经DNA序列测定证实后，采用分子克隆技术，将所获目的基因全长cDNA片段按反方向克隆入真核表达载体pcDNA3.1^ 的多克隆位点之间，对重组质粒进行酶切鉴定。用脂质体介导法将ZNRD1反义核酸转染SGC7901／VCR，流式细胞仪（FACS）检测SGC7901／VCR细胞内阿霉素的蓄积量。结果应用PCR反应扩增出特异性片段，经DNA序列,下实与文献报道的ZNRD1基因编码区序列一致；构建了反义真核表达载体pcDNA3.1-ZNRD1；转染SGC7901／VCR细胞后，可提高细胞内ADM蓄积量。ZNRD1反义核酸转染后，胃癌多药耐药细胞株SGC7901／VCR对抗肿瘤药物ADM的积蓄作用提高，提示ZNRD1反义核酸具有提高耐药细胞株细胞内药物浓度、恢复其药物敏感性、逆转多药耐药性的作用。     

外源性白介素12逆转绒毛膜癌细胞JAR/MTX耐药的作用

目的探讨外源性白介素12(IL-12)对绒癌耐药细胞株JAR/MTX的逆转耐药效应。方法将体外培养的绒癌耐药细胞株JAR/MTX分为四组:(1)对照组;(2)化疗组;(3)细胞因子组;(4)化疗+细胞因子组。加药后培养12、24 h,用MTT法检测药物的细胞毒性,用RT-PCR及Western Blot法检测MDR1mRNA和P-gp的表达情况,用流式细胞术检测细胞内底物萤光值强度的变化。结果 (1)外源性IL-12对JAR/MTX的生长抑制作用明显强于甲氨蝶呤(MTX),两药联用后细胞对MTX的敏感性增强。(2)四组细胞MDR1mRNA及P-gp的表达量比较没有明显差别(P>0.05)。(3)加入外源性IL-12的细胞株,胞内底物荧光值强度显著增加(P<0.05)。结论外源性IL-12可通过下调细胞内P-gp的活性来逆转绒癌耐药细胞株JAR/MTX对MTX的耐药效应。     

新疆奎屯地区高砷环境中抗砷菌的初步筛选

目的初步筛选新疆奎屯地区高砷环境中（123团4连）自流井水和污水中存在的高抗砷菌,检测其抗砷能力。方法选择高砷自流井水和污水标本,在NaAsO2选择性培养基上,分离和纯化,筛选出抗砷菌,初步进行细胞形态学的鉴定;用不同NaAsO2浓度的LB培养基对菌株抗砷性进行检测,测定其抗砷水平。结果初步筛选出5株抗砷能力较强的抗砷菌。A1、A2、A3均为革兰氏阴性杆菌。B1、B2均为革兰氏阳性球菌;5株菌均可在含有NaAsO2（50．400mg／L）培养基中生长。最高耐受到400mg／L,是新疆奎屯高砷水含量实际最高值的517倍,最低值的1156倍。结论①经初步筛选,确认新疆奎屯地区高砷环境中的自流井水和污水中存在高抗砷菌,首次成功筛选出5株强抗砷菌。②A1菌株的抗砷能力最强,可在400mg／LNaAsO2的LBA培养基上生长。本研究为新疆地区抗砷菌的深入研究提供了基础资料。     

肝叶部分切除术后肝细胞DNA合成及细胞周期变化的实验研究

肝叶部分切除术后肝细胞ＤＮＡ合成及细胞周期变化的实验研究６３００３８重庆第三军医大学西南医院陈平，韩本立，陈娟，段恒春关键词肝再生；肝叶切除术；ＤＮＡ；细胞周期中国图书资料分类号Ｒ６５７．３肝脏再生是肝叶部分切除术后最基本的病理过程。但目前对再生肝细...     

实时荧光定量RT—PCR检测胃癌细胞中MRP2、MRP3及MRP5mRNA的表达

目的研究多药耐药相关蛋白2（MRP2）基因及MRP3、MRP5基因在正常胃细胞系GES-1、胃癌细胞株（BGC-823）及胃癌耐药细胞株BGC-823／ADM的表达差异,并探讨其在胃癌耐药中的意义。方法分别提取GES-1、BGC-823及BGC-823／ADM细胞的总RNA,逆转录cDNA,利用实时荧光定量PCR,根据标准品绘制标准曲线,检测MRP2、MRP3、MRP5基因的表达水平。结果MRP2基因在胃癌耐药细胞株BGC～823／ADM细胞中的表达量明显高于在胃癌细胞株（BGC-823）的表达,而与其在正常胃细胞系GES-1的表达没有显著性差异;MRP3、MRP5基因表达量在三种细胞中均有显著性差异。结论MRP2可能参与了胃癌的内在性耐药,而MRP3、MRP5可能与胃癌的获得性耐药有关,实时荧光定量方法是一种灵敏度高,特异性强,重复性好的定量检测方法。     

人乳腺癌B7-H3分子的高表达及其抑制T淋巴细胞活化增殖作用的机制

目的探讨乳腺癌组织及细胞中高表达协同刺激分子B7-H3对T淋巴细胞作用的机制。方法 RT-PCR及流式细胞仪方法分析乳腺癌组织及细胞中B7-H3基因的高表达,以PGPU6/GFP/Neo质粒为载体,构建shRNA重组体,采用脂质体法转染乳腺癌细胞株MCF-7,采用免疫荧光标记和流式细胞术分析在MCF-7细胞上的表达。继而,利用CCK8法和酶联免疫吸附测定法（ELISA）分析B7-H3基因干扰细胞株对T细胞体外增殖和细胞因子的分泌。结果乳腺癌组织和细胞中高表达B7-H3分子,成功通过RNAi技术构建低表达B7-H3基因乳腺癌细胞株。体外生物学功能分析表明,与转染空载体的MCF-7/mock细胞相比,B7-H3表达干扰细胞能有效增强T细胞增殖以及对IFN-γ的分泌。结论乳腺癌中高表达协同刺激分子B7-H3能有效逃避T淋巴细胞对其的作用和杀伤。     

抗肿瘤干细胞药物体外活性评价方法

目的以乳腺癌MCF-7细胞和盐霉素钠为例,建立体外抗癌干细胞药物活性评价的简单方法。方法无血清、含有生长因子的DMEM/F12培养基培养MCF-7细胞,观察细胞的生长及体外干细胞球形成能力;流式细胞仪检测CD44+/CD24-细胞含量;将无血清培养的、富集的MCF-7干细胞以不同的数量接种到Nu/Nu裸鼠皮下,观察并检验致瘤能力;CCK-8法检测药物对悬浮乳状球样细胞生长的作用。结果用无血清、含有生长因子的DMEM/F12培养基培养的MCF-7细胞,增殖缓慢,呈悬浮乳状球样;流式细胞仪检测CD44+/CD24-细胞含量,10%胎牛血清的RPMI1640培养的MCF-7干细胞为(12.8±0.6)%,无血清培养的MCF-7干细胞为(97.1±2.4)%;裸鼠接种无血清培养的、富集的MCF-7干细胞约100个细胞即可见肿瘤生成。盐霉素钠对无血清培养条件下的富含癌干细胞的MCF-7细胞有较高的毒性。结论所获得的CD44+/CD24-细胞具有乳腺癌干细胞特性,且超低黏附培养板和无血清环境可以促进悬浮球状细胞团的形成,CCK-8法是一种简便的体外评价抗癌干细胞药物的检测方法。     

Comparison of photodynamic treatment produced cell damage between human breast cancer cell MCF-7 and its multidrug resistance cell

BackgroundMultidrug resistance (MDR) of breast cancer is a major obstacle in chemotherapy of cancer treatments. Recently the anti-tumor effects of Chlorin e6 (Ce6) mediated photodynamic therapy (Ce6-PDT) were reported in skin cancer and hepatoma in vitro. However, its therapeutic potential in killing human breast cancer especially those with MDR and the differences between MCF-7 and MCF-7/ADR after PDT treatment has not been fully investigated.MethodsMTT assay was used to measure cell survival rate of MCF-7 cells and MCF-7/ADR cells. Intracellular reactive oxygen species (ROS) generation was measured by monitoring the fluorescence intensity of dichlorofluorescein (DCF) by flow cytometry. Nuclear morphology changes and DNA damage in both MCF-7 and MCF-7/ADR after Ce6-PDT were analyzed by hochest33342 staining and comet assay. Western blot and monodansylcadaverine (MDC) staining were used to monitor autophagic response in MCF-7/ADR.ResultsCe6-PDT induced cell viability decrease, intracellular ROS generation, and DNA damage in concentration-dependent and cell-specific manner, and MCF-7 was more sensitive to Ce6-PDT than MCF-7/ADR cells at the same PDT condition. PDT treatment could trigger cell death via apoptosis in MCF-7 cells but autophagic cell death in MCF-7/ADR cells.ConclusionThese results suggested that MCF-7 was more sensitive to Ce6-PDT than MCF-7/ADR, and PDT treatment could trigger apoptotic response in MCF-7 cells, but stimulate autophagic response in MCF-7/ADR cells.     

携紫杉醇和Herceptin高分子造影剂联合超声体外寻靶及显影效果研究

目的 探讨携紫杉醇(Pac)和注射用曲妥珠单克隆抗体(Herceptin)高分子造影剂(Pac-PLGA-HER)联合超声体外寻靶能力及显影效果.方法 通过双乳化法和碳二亚胺法制备载Pac靶向高分子造影剂.将MCF-7细胞种植于12个培养皿中,培养24 h,分为4组,每组3个:非靶向造影剂组(Pac-PLGA组)、靶向造影剂组(Pac-PLGA-HER组)、靶向造影剂+超声组(Pac-PLGA-HER+超声组)和抗体封闭组.在激光共聚焦显微镜下对比观察高分子造影剂与细胞的结合能力.观察体外显影效果,并用DFY型定量仪进行定量,采用独立样本t检验进行统计学分析.结果 靶向载Pac高分子造影剂平均粒径为(596±12) nm,体外寻靶能力实验显示靶向载Pac高分子造影剂可与MCF-7细胞大量结合.体外显影实验示靶向与非靶向载Pac高分子造影剂平均声强分别为(134.50±10.19)和(135.11±11.49) dB,平均灰阶分别为147.83±11.12和148.50±12.63,两者比较差异均无统计学意义(t均为-0.097,P均＞0.05).结论 携Pac和Herceptin的高分子造影剂对高表达HER2的人乳腺癌MCF-7有较强的结合能力,在体外显影实验中有较好的显影效果.