丹参-红花药对配伍前后对大鼠肝药酶亚型CYP1A2、CYP2E1和CYP3A4活性的影响

目的 研究丹参、红花药对配伍前后对大鼠肝药酶亚型CYP1A2、CYP2E1和CYP3A4活性的影响。方法 分别选用咖啡因、氯唑沙宗和咪达唑仑作为CYP1A2、CYP2E1和CYP3A4的探针药物。将大鼠随机分为4组,即空白对照组、丹参（1.2 g生药/kg）组、红花（0.4 g生药/kg）组、丹参（1.2 g生药/kg）+红花（0.4 g生药/kg）组,按上述剂量ig给药7 d。于末次给药后30 min,尾iv探针药物咖啡因、氯唑沙宗和咪达唑仑溶液,在不同的时间点取血进行检测;以甲硝唑为内标,采用HPLC法检测探针药物咖啡因、氯唑沙宗和咪达唑仑的量,评价各药物组对大鼠CYP3A4、CYP2E1和CYP1A2活性的影响。结果 与空白对照组比较,丹参组咖啡因、氯唑沙宗和咪达唑仑的清除率（CL）有所增强,曲线下面积（AUC）减少,其半衰期（t_1/2）有减少趋势,但差异均不显著;红花组咖啡因和氯唑沙宗的CL有所降低,但差异不显著,咪达唑仑的CL显著降低（P<0.01）,氯唑沙宗的AUC增加,但差异不显著,咖啡因和咪达唑仑的AUC明显增加（P<0.05、0.01）;丹参+红花组咖啡因和氯唑沙宗的CL明显降低（P<0.05）,曲线下面积（AUC）明显增加（P<0.05）,其t_1/2有延长趋势,但差异不显著。结论 丹参、红花配伍后对CYP450亚型CYP1A2和CYP2E1有抑制作用,这可能是丹参、红花配伍协同增效的作用机制之一。     

天然维生素E对CYP3A4活性影响的体内研究

目的：阐明天然维生素E在体内对CYP3A4活性的影响。方法：12名健康男性志愿者,随机分两组,采用两阶段双周期交叉设计,一组口服天然维生素E600mg/d,另一组不服药,连续14d。在第15天两组均口服咪达唑仑7.5mg,在0、0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、12、24h采外周静脉血5mL,洗脱4周交叉进行下阶段试验。采血后0.5h内进行离心和分离血浆,运用HPLC-MS-MS分别测定血浆中咪达唑仑总药物浓度、1-OH咪达唑仑药物浓度,分析比较不同处理组间药代动力学参数的差异。结果：天然维生素E服用组与对照组咪达唑仑及其代谢产物1-OH咪达唑仑的血浆药物浓度变化相近。天然维生素E服用组与对照组之间咪达唑仑及其代谢产物1-OH咪达唑仑的曲线下面积AUC0-24h和峰浓度Cmax数据相近（P〉0.05）。结论：在本试验中服用天然维生素E并未影响CYP3A4的体内活性。     

金雀异黄酮在体内对CYP3A活性的影响

目的:阐明金雀异黄酮在体内对细胞色素氧化酶P-4503A(CYP3A)活性的影响。方法:本试验采用双周期交叉临床试验。临床试验按照两阶段交叉方案进行。第一阶段随机分成的2组受试者随机给予金雀异黄酮片或安慰剂处理14 d,第15天给所有受试者米哒唑仑探针药,经过14 d洗脱期后交叉重复试验,分别以0~36 h血浆中米哒唑仑的血浆曲线下面积、半衰期作为CYP3A的活性指标。HPLC测定其活性。服药后0~36 h血中咪达唑仑以及1’-羟基咪达唑仑用HPLC-MS/MS方法测定。结果:经金雀异黄酮处理后,咪达唑仑AUC0-36 h明显降低[(144±55)ng.mL-1.hvs(126±40)ng.mL-1.h,P<0.05],AUC0-∞显著降低[(209±57)vs(181±43)ng.mL-1.h,P<0.05],Cmax显著降低[(49±20)vs(36±14),P<0.05]。结论:金雀异黄酮对体内CYP3A酶活性具有显著的诱导作用,应当关注经CYP3A代谢的药物与金雀异黄酮合用时可能发生的潜在的药物相互作用。     

探针药咪哒唑仑评价肝药酶抑制状态下CYP3A体内外代谢活性的实验研究

目的 以咪哒唑仑为探针药，研究大鼠肝药酶CYP3A抑制状态下对药物体内外代谢活性的影响，以建立评价CYP3A药物代谢功能的药动学指标。方法 ①体内实验：以咪哒唑仑（MDZ）为CYP3A底物，酮康唑（KTZ）为CYP3A选择性抑制剂，通过静脉注射负荷剂量（1．2、10、30mg／kg）与恒速滴注（0．7、2．0、3．0mg／hr／ks）相结合的方法，使KTZ达到不同的稳态血药浓度（约1．49、7．16、36．25μg／ml），以实现对CYP3A的持续抑制。恒速滴注开始后2h，大鼠舌静脉注射MDZ10mg／kg，在不同时间点采集血和肝样品；     

速效救心丸对大鼠体内CYP450酶活性影响的研究

目的采用Cocktail探针药物法研究速效救心丸对大鼠体内药物代谢酶CYP2E1和CYP3A4的影响,为临床用药提供参考。方法 Wistar大鼠,随机分为,①实验组:灌胃给予速效救心丸(给药体积0.5mL/100g,给药剂量64.8mg·kg-1);②对照组:灌胃给予等体积的纤维素钠混悬液。采用高效液相色谱法(HPLC)测定探针底物氯唑沙宗和咪达唑仑的血药浓度,计算其药代动力学参数,考察大鼠体内CYP2E1及CYP3A4酶的活性。结果实验组氯唑沙宗的代谢无显著性差异,咪达唑仑的代谢明显减慢。结论速效救心丸对大鼠的CYP2E1酶活性无明显影响,对CYP3A4酶活性有抑制作用。     

刺五加注射液对大鼠肝CYP3A活性的影响

目的:考察刺五加注射液对大鼠肝细胞色素P4503A活性的影响。方法:制备大鼠空白肝微粒体,加入刺五加注射液孵育,HPLC法测定咪达唑仑浓度,计算咪达唑仑代谢速率评价刺五加注射液体外对大鼠CYP3A酶的影响。大鼠随机分为对照组和实验组,分别尾静脉注射生理盐水和刺五加注射液,连续7 d,制备肝微粒体,进行孵育反应,评价刺五加注射液体内对大鼠CYP3A的影响。结果:刺五加注射液体外对大鼠CYP3A酶具有抑制作用,测得刺五加注射液抑制CYP3A酶的IC50为5.00 mL/100mL。大鼠连续7 d静脉注射刺五加注射液,使探针药物咪达唑仑的代谢减少了21.11%。结论:刺五加注射液对大鼠CYP3A的活性有抑制作用。     

钝化NF-κB的活化对酒精性肝损伤大鼠CYP3A的影响

目的研究核转录因子-κB(nuclear fastor kappa B,NF-κB)在酒精性肝损伤大鼠模型中的作用及对细胞色素P4503A(cytochrome P450 3A,CYP3A)代谢活力的影响。方法采用白酒灌胃法复制大鼠酒精性肝损伤模型,肝脏组织HE染色和血清中ALT和AST水平测定观测大鼠肝损伤情况,采用免疫组化法检测肝脏NF-κB的蛋白表达,通过HPLC法检测CYP3A的探针药物咪哒唑仑的血浆药物浓度,采用热板法观察大鼠舔足反应来体现咪哒唑仑的代谢情况,从而反映咪哒唑仑特异性代谢酶CYP3A的代谢活力。结果酒精性肝损伤模型组表现为轻度脂肪变性和炎症坏死,NF-κB明显活化,CYP3A代谢活力增强(P<0.05);钝化NF-κB的活化后,肝脏脂肪变性程度明显减轻,CYP3A代谢活力下调(P<0.05)。结论钝化NF-κB活化,可以减轻酒精性肝损伤的程度,并下调酒精性肝损伤导致的CYP3A代谢活性的增强。     

体外探讨五味子乙素对大鼠肝微粒体CYP3A的影响及其作用机制

目的通过体外药物代谢实验探讨五味子乙素对CYP3A活性的影响,并探讨其作用机制。方法以大鼠肝微粒体为载体,选取咪达唑仑为药物"探针",建立高效液相色谱法(HPLC)检测五味子乙素对肝微粒体代谢咪达唑仑的影响,体外给药测定其IC50值以及相关酶动力学参数,并推测其可能的作用机制。结果孵育体系内源性物质不干扰测定,方法快捷、稳定、灵敏度高。结果显示五味子乙素呈剂量依赖性抑制体外肝微粒体咪达唑仑代谢,其IC50为5.50g.L-1,据此计算其Ki为4.32mol·L-1。结论五味子乙素体外抑制大鼠肝微粒体CYP3A活性,其作用机制为可逆性抑制,属于非竞争性抑制类型。     

金银花提取物及主要成分对药物代谢酶CYP3A4的活性抑制作用研究

目的:考察金银花提取物及其主要成分绿原酸、咖啡酸和芦丁对CYP3A4活性的抑制作用.方法:采用重组人CYP3A4孵育法,以咪达唑仑作为该酶的活性探针药物,采用液相色谱-质谱联用法(LC-MS/MS)测定代谢产物1′-羟基咪达唑仑的浓度,计算代谢产物的初始生成速度,比较加入待测药物和空白对照时代谢产物的初始生成速度.结果:金银花提取物、绿原酸、芦丁对该酶有抑制作用,IC50值分别为2.13 mg/mL、28.8 μmol/L和17.6 μmol/L,且金银花提取物和绿原酸对该酶的抑制作用不可逆,咖啡酸的抑制作用很弱,几乎不会导致药物相互作用.结论:金银花可能影响联合使用的CYP3A4的底物药物的代谢.     

中国汉族人群中CYP3AP1基因型与CYP3A活性的相关性研究

目的:研究中国汉族人群中CYP3AP1基因型的分布特征及其与CYP3A活性的相关性.方法:以口服7.5mg咪哒唑仑后1小时血浆中1′-羟化咪哒唑仑与咪哒唑仑的比值作为CYP3A活性的衡量指标,测定191名中国汉族健康受试者的CYP3A活性,并利用多聚酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法对已知CYR3A活性受试者的DNA进行CYP3AP1基因分型.结果:CYP3AP1不同基因型个体的CYR3A活性存在显著差异(P<0.05).A_(-44)等位基因纯合子个体的CYP3A活性低于A_(-44)G杂合子,而G_(44)等位基因纯合子个体的CYP3A活性最高.结论:CYP3AP1基因型与体内CYP3A活性的增加存在相关性.     

Pharmacokinetics of midazolam in CYP3A4- and CYP3A5-genotyped subjects

Objective We investigated whether differences in pharmacokinetics of midazolam, a CYP3A probe, could be demonstrated between subjects with different CYP3A4 and CYP3A5 genotypes.Methods Plasma concentrations of midazolam, and of total (conjugated + unconjugated) 1OH-midazolam, and 4OH-midazolam were measured after the oral administration of 7.5 mg or of 75 µg of midazolam in 21 healthy subjects.Results CYP3A5*7, CYP3A4*1E, CYP3A4*2, CYP3A4*4, CYP3A4*5, CYP3A4*6, CYP3A4*8, CYP3A4*11, CYP3A4*12, CYP3A4*13, CYP3A4*17 and CYP3A4*18 alleles were not identified in the 21 subjects. CYP3A5*3, CYP3A5*6, CYP3A4*1B and CYP3A4*1F alleles were identified in 20, 1, 4 and 2 subjects, respectively. No statistically significant differences were observed for the AUC_inf values between the different genotypes after the 75-µg or the 7.5-mg dose.Conclusion Presently, CYP3A4 and CYP3A5 genotyping methods do not sufficiently reflect the inter-individual variability of CYP3A activity.     

Comparative analysis of substrate and inhibitor interactions with CYP3A4 and CYP3A5

To evaluate the role that cytochrome (CYP) 3A5 plays in hepatic drug metabolism, the substrate selectivity and inhibitory potential of over 60 compounds towards CYP3A4 and CYP3A5 were assessed using Escherichia coli recombinant cell lines. CYP3A4-mediated metabolism predominated for many of the compounds studied. However, a number of drugs gave similar CL_int estimates using CYP3A5 compared with CYP3A4 including midazolam (CL_int?=?3.4 versus 3.3?µl?min^–1?pmol^–1). Significant CYP3A5-mediated metabolism was also observed for several drugs including mifepristone (CL_int?=?10.3 versus 2.4?µl?min^–1?pmol^–1), and ritonavir (CL_int?=?0.76 versus 0.47?µl?min^–1?pmol^–1). The majority of compounds studied showed a greater inhibitory potential (IC₅₀) towards CYP3A4 compared with CYP3A5 (eightfold lower on average). A greater degree of time-dependent inhibition was also observed with CYP3A4 compared with CYP3A5. The range of compounds investigated in the present study extends significantly previous work and suggests that CYP3A5 may have a significant role in drug metabolism particularly in populations expressing high levels of CYP3A5 and/or on co-medications known to inhibit CYP3A4.     

CYP3A5~*3和CYP3A4~*18B基因多态性对肾移植患者环孢素药代动力学的影响

目的回顾性研究肾脏移植后1mon,CYP3A5*3和CYP3A4*18B基因多态性对CsA药代动力学参数的影响。方法采用PCR-RFLP方法分析了63名肾脏移植患者CYP3A5*3和CYP3A4*18B基因型;荧光偏正免疫法用于检测肾移植患者静脉全血中的CsA浓度。结果在63名肾移植患者中,CYP3A5*3和CYP3A4*18B突变等位基因发生频率分别为0.770(95CI:0.767～0.773),0.235(95CI:0.235～0.241),而且这些等位基因表现出完全连锁不平衡。在移植术后1mon内,携带CYP3A4*1/*1野生型纯合子患者的C0以及剂量校正谷血浓度(C0/D)均明显高于携带CYP3A4*1/*18B杂合子或CYP3A4*18B/*18B突变型纯合子患者(P<0.05,Mann-WhitneyUtest);CYP3A5*1/*1基因型组的给药剂量明显高于CYP3A5*1/*3或CYP3A5*3/*3基因型组(P=0.004<0.01,Kruakal-Wallistest);CYP34*18B和CYP3A5*3联合考虑,对于CYP3A5表达组,同样发现C0、C0/D在CYP3A4*1/*1组C0以及C0/D均明显高于CYP3A4*1/*18B或CYP3A4*18B/*18B组(P<0.05,Mann-WhitneyUtest);而其他药动学参数在CYP3A5*3及CYP3A4*18B各组间相比差异则没有统计学意义。结论CYP3A5*3和(或)CYP3A4*18B基因多态性对肾移植后1monCsA药代动力学有一定影响,移植前CYP3A5*3基因型的分析仍需进一步研究。     

The involvement of CYP1A2 and CYP3A4 in the metabolism of clozapine

Aims Clozapine (CLZ), an atypical neuroleptic with a high risk of causing agranulocytosis, is metabolized in the liver to desmethylclozapine (DCLZ) and clozapine N-oxide (CLZ-NO). This study investigated the involvement of different CYP isoforms in the formation of these two metabolites. Methods Human liver microsomal incubations, chemical inhibitors, specific antibodies, and different cytochrome P450 expression systems were used. Results K_m and V_max values determined in human liver microsomes were lower for the demethylation (61±21 μm, 159±42 pmol min⁻¹ mg protein⁻¹ mean±s.d.; n=4), than for the N-oxidation of CLZ (308±1.5 μm, 456±167pmol min⁻¹ mg protein⁻¹; n=3). Formation of DCLZ was inhibited by fluvoxamine (53±28% at 10 μm ), triacetyloleandomycin (33±15% at 10 μm ), and ketoconazole (51±28% at 2 μm ) and by antibodies against CYP1A2 and CYP3A4. CLZ-NO formation was inhibited by triacetyloleandomycin (34±16% at 10 μm ) and ketoconazole (51±13% at 2 μm ), and by antibodies against CYP3A4. There was a significant correlation between CYP3A content and DCLZ formation in microsomes from 15 human livers (r=0.67; P=0.04). A high but not significant correlation coefficient was found for CYP3A content and CLZ-NO formation (r=0.59; P=0.09). Using expression systems it was shown that CYP1A2 and CYP3A4 formed DCLZ and CLZ-NO. K_m and V_max values were lower in the CYP1A2 expression system compared to CYP3A4 for both metabolic reactions. Conclusions It is concluded that CYP1A2 and CYP3A4 are involved in the demethylation of CLZ and CYP3A4 in the N-oxidation of CLZ. Close monitoring of CLZ plasma levels is recommended in patients treated at the same time with other drugs affecting these two enzymes.     

CYP3A4,CYP3A5和MDR1基因多态性对环孢素处置的影响

环孢素是一个广泛用于器官移植患者的免疫抑制剂,具有治疗指数窄,不同个体间药代动力学差异较大的特点。它主要通过肝脏和小肠的CYP3A4和CYP3A5代谢;同时它又是药物转运体的底物。不同个体间药物代谢酶和转运体活性的差异可能是造成不同器官移植患者环孢素药代动力学差异的主要原因。而遗传因素即编码药物代谢酶和转运体基因序列的差异可能是其产生活性差异的分子机制。因此,从编码药物代谢酶和转运体的基因入手,可能会为器官移植患者提供最优的治疗方案。     

Development of template systems for ligand interactions of CYP3A5 and CYP3A7 and their distinctions from CYP3A4 template

Starting from established CYP3A4 Template (DMPK. 2019, and 2020), CYP3A5 and CYP3A7 Templates have been constructed to be reliable tools for verification of their distinct catalytic properties. A distinct occupancy was observed on CYP3A4-selective ligands, but not on the non-selective ligands, in simulation experiments. These ligands often invade into Bay-1 region during the migration from Entrance to Site of oxidation in simulation experiments. These results offered an idea of the distinct localization of Bay-1 residue on CYP3A5 Template, in which the Bay-1 residue stayed closely to Template border. The idea also accounted for the higher oxidation rates of CYP3A5, than of CYP3A4, of noscapine and schisantherin E through their enhanced sitting-stabilization. Typical CYP3A7 substrates such as zonisamide and retinoic acids took their placements without occupying a left side region of Template for their metabolisms. In turn, the occupancies of the left-side region were inevitably observed among poor ligands of CYP3A7. Altered extent of IJK-Interaction or localization of a specific residue at the left-side would thus explain distinct catalytic properties of CYP3A7 on Template. These data suggest the alteration of each one of Template region, from CYP3A4 Template, led to the distinct catalytic properties of CYP3A5 and CYP3A7 forms.     

多药耐药蛋白和CYP3A4介导的中草药-西药相互作用

据近年的流行病学报告，国内外越来越多的人终身服用各种中草药，包括各类疾病患者（如：癌症等）和健康人群。随着中草药与处方西药联合应用治疗疾病的日益增多，越来越多的人注意到这两者的同时使用可能引起的中草药-西药相互作用会影响到治疗药物的活性。目前已知P-糖蛋白（P-gp）和CYP3A4一起能构成许多口服吸收药物的高效屏障，然而50％以上的临床用药都会被CYP3A4代谢或被P-gp转运。本文综述了多药耐药蛋白和CYP3A4介导的中草药-西药相互作用，同时也讨论了中草药-西药相互作用的关键因素。     

探针药物法测定CYP450 3A的活性

目的：以睾酮为探针药物采用高效液相色谱法测定GYP4503A的活性。方法：采用大鼠肝微粒体体外代谢模型,以有机溶剂乙腈终止反应并沉淀蛋白,上清液进高效液相色谱分析。根据Lineweaver-Burk双倒数作图法方程式计算酶动力学参数。结果：在蛋白浓度为1．0mg&#183;mL^-1,反应时间为5min时酶促反应近似直线进行,测得酶动力学参数Km值为38．84μmol&#183;L^-1,Vmax值为1．83μmol&#183;L^-1&#183;min^-1&#183;mg^-1 protein。结论：本方法简便、有效,适合实验室用于测定CYP4503A的活性,为进一步研究药物相互作用奠定了基础。     

三氯乙烯对3种细胞色素P450酶基因表达的影响

目的 探讨三氯乙烯（Trichloroethylene,TCE)对人体淋巴细胞瘤细胞株（MCL-5）中3种细胞色素P450酶基因（CYP1A1、CYP2E1、CYP3A4）表达的影响,并研究剂量反应关系和时间反应关系,方法 用常规的细胞培养方法,0.5、1.0、1.5、2.0mmol/L TCE处理细胞12、24、48、72h。利用提纯RNA和cDNA的药盒,合成cDNA,然后逆转录聚合酶反应（RT-PCR）表达3种CYP450基因,以β-Actin作为内对照,分析不同处理剂量和时间时基因表达的强度。结果 在MCL-5细胞株中都有基本的表达,CYP1A1表达在用1.0、1.5、2.0mmol/LTCE处理48h后有被上调的趋势,而且上调趋势随处理时间延长耐加强;CYP2E1、CYP3A4表达不受TCE处理时间长短的影响。3种CYP450酶基因的表达受TCE剂量的影响。3随0.5mol/L,1.0、1.5、2.0mmol/L剂量的增加有上调的趋势,结论 TCE对CYP450酶系统中的CYP2E1、CYP1A1、CYP3A4基因有明显的诱导作用。这些基因被诱导后的结果。可能会导致相对应酶活性的增加,同时加强对TCE的代谢,使TCE的代谢产物增加。     

慢性间断性低氧对大鼠肝脏CYP3A_2和CYP2E_1的影响研究

目的研究慢性间断性低氧对大鼠肝脏CYP3A2和CYP2E1的影响。方法将大鼠随机分为对照组、低氧3d组、低氧7d组、低氧14d组、低氧28d组,低氧处理结束24h后,常规腹腔注射麻醉,摘取眼球血液2ml制备血清,并测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬酸氨基转移酶(AST)、红霉素N-脱甲基酶(ERD)、苯胺羟化酶(ANH)活性;取新鲜肝组织以制备微粒体和提取核糖核酸(RNA),并以RT-PCR进行基因片段扩增以检测大鼠肝脏细胞色素CYP3A2、CYP2E1的mRNA表达水平。结果慢性间断性低氧对血清ALT、AST活性无明显影响;低氧7d后,大鼠肝脏ERD、ANH活性明显升高,28d时诱导率分别为155.5%、42.2%;同时,CYP3A2、CYP2E1mRNA的表达水平也分别增加了220.5%、102.8%。结论慢性间断性低氧能显著增加大鼠肝脏ERD、ANH活性,其机制可能与其在转录水平上提高肝脏CYP3A2和CYP2E1的基因表达水平有关。