二甲双胍对晚期糖基化终产物诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：观察晚期糖基化终产物（advanced glycation endproducts,AGEs）对血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）增殖的影响及二甲双胍的干预作用。方法：生长状态良好的VSMCs,用不同浓度的AGEs（50、100、200、400 mg/L）干预细胞不同时间（12、24、48、72 h）;不同浓度的二甲双胍（10-3,10-4,5×10-5,10-5,10-6mol/L）与200 mg/L AGEs共干预不同时间（12、24、48、72 h）,MTT法测定VSMCs增殖。结果：50 mg/L AGEs干预72 h时表现出促进增殖的作用,200 mg/L AGEs干预12 h即有增殖促进作用,24 h时作用最强,400 mg/L AGEs各时间点作用同200 mg/LAGEs组;10-3与10-4mol/L二甲双胍干预24 h抑制作用最强,持续到72 h,10-6mol/L抑制增殖作用降低,24 h起效,72 h时仍有作用。结论：AGEs呈浓度和时间依赖性地促进VSMCs增殖;二甲双胍可抑制AGEs诱导的VSMCs增殖作用。     

二甲双胍增强Ishikawa细胞对顺铂化疗敏感性的实验研究

目的观察二甲双胍体外增强顺铂对子宫内膜癌Ishikawa细胞化疗敏感性的作用,并探讨可能的作用机制。方法实验分为空白对照组、二甲双胍组(培养液中二甲双胍终浓度为10mmol/L)、顺铂组(培养液中顺铂终浓度为20μmol/L)、联合组(培养液中二甲双胍和顺铂的终浓度分别为10mmol/L和20μmol/L),各组作用24h,CCK-8法和细胞克隆形成法检测细胞增殖抑制率和存活率,金氏公式评价二药协同效果;Transwell法检测细胞侵袭力;流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡率;蛋白质印迹法检测葡萄糖调节蛋白(GRP)78蛋白表达水平。结果二甲双胍、顺铂均可抑制Ishikawa细胞增殖、诱导细胞凋亡、降低细胞存活率和侵袭力;二甲双胍可阻滞细胞周期于G0/G1期,顺铂单独或联用二甲双胍可阻滞细胞周期于G2/M期,并能下调GRP78蛋白表达水平(P<0.05),二药联用上述作用效果更为显著(P<0.01)。结论二甲双胍能够增强顺铂对子宫内膜癌Ishikawa细胞的化疗敏感性,这种作用部分是通过下调GRP78蛋白实现的。     

荜茇酰胺对H1975非小细胞肺癌细胞增殖的影响

目的 探讨荜茇酰胺对体外培养的H1975非小细胞肺癌细胞增殖的影响及其机制.方法 采用不同浓度荜茇酰胺(0、1.25、2.5、5、10、20、30、40和50 μmol/L)孵育H1975细胞72 h,MTT法检测细胞生存率.采用荜茇酰胺0、2.5、5和10 μmol/L孵育H1975细胞,细胞集落形成实验和划痕实验分别测定细胞增殖和迁移情况,流式细胞术测定细胞凋亡情况和活性氧(ROS)水平,倒置显微镜观察ROS荧光水平、细胞焦亡情况和ROS变化对细胞焦亡的影响,Western blot法分析加斯德明E(GSDME)、GSDME-N端、GSDMD和前体Caspase-3蛋白表达的变化.结果 荜茇酰胺能够浓度依赖性地抑制细胞生长、集落形成和细胞迁移,诱导细胞凋亡和焦亡,提高细胞内ROS水平,下调GSDME、前体Caspase-3和GSDMD蛋白表达,上调GSDME-N端蛋白表达(P＜0.05).降低ROS水平后,抑制细胞焦亡(P＜0.05).结论 荜茇酰胺能促进H1975细胞凋亡,通过提高细胞内ROS水平诱导细胞焦亡;其机制可能与ROS作用于GSDMD/GSDME蛋白有关.     

EGF及其受体在二甲双胍抑制人肺腺癌细胞增殖中的作用

目的 探讨降糖药物二甲双胍对人肺腺癌A549细胞表皮生长因子(Epidermal GrowthFactor,EGF)及其受体(Epidermal Growth Factor Receptor,EGFR)表达的影响.方法 用不同浓度二甲双胍作用于体外培养的人肺癌细胞后,MTT比色法检测其对A549细胞生长的抑制作用;流式细胞仪及Hoechst33342染色荧光显微镜检测细胞凋亡情况,免疫印迹法(Western blot)检测二甲双胍对肺腺癌细胞EGF及EGFR的表达.结果 二甲双胍明显抑制肺癌细胞的生长增殖,且呈剂量依赖性;流式细胞仪检测显示:随着二甲双胍作用浓度的增加,肺腺癌细胞的凋亡率也逐渐增加,实验组细胞凋亡率分别为(10.65±0.81)％、(21.56± 1.21)％;与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);Hoechst33342染色可见实验组细胞皱缩,核染色质浓缩及核碎裂等现象;western blot显示:随着二甲双胍作用浓度的增大,EGF及EGFR表达呈现逐渐下调的趋势.结论 二甲双胍可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖,并促进其凋亡,其机制可能与下调A549细胞内EGF及EGFR的表达密切相关.     

二甲双胍对人肝癌Hep-G2细胞表皮生长因子及其受体表达的影响

目的 观察二甲双胍对人肝癌Hep-G2细胞表皮生长因子（EGF）及其受体（EGFR）的影响.方法 体外培养人肝癌Hep-G2细胞,用不同浓度二甲双胍进行干预,3-（4,5-二甲基噻唑-2）-2,5-二苯基四氨唑溴盐法检测二甲双胍对Hep-G2细胞生长的影响;Hoechst 33342染色荧光显微镜观察细胞的形态学变化,流式细胞术观察细胞凋亡;蛋白质印迹法（Western blot）检测EGF、EGFR的表达.结果 二甲双胍对肝癌细胞的活性具有明显的抑制作用,且呈剂量依赖性;以10 mmol/L作用终浓度抑制效果最明显,其48 h的细胞吸光度为（0.477 ±0.025）,与对照组（0.602±0.026）比较差异有统计学意义（P＜0.01）;逐渐增加二甲双胍的作用浓度,细胞凋亡率随之逐渐增加,药物组细胞凋亡率分别为（10.76±0.96）％、（20.77±1.16）％,与对照组（5.21±0.13）％相比差异均有统计学意义（P＜0.05）;Hoechst33342染色可见明显的细胞皱缩,核染色质浓缩,核碎裂等凋亡形态学变化;Western blot结果显示,EGF及其受体蛋白的表达随着二甲双胍作用浓度的增加而逐渐下调.结论 在体外,二甲双胍能够抑制人肝癌Hep-G2细胞增殖及诱导细胞凋亡,其抗肿瘤机制可能与细胞内EGF及EGFR表达下调有关.     

二甲双胍对胰腺癌BxPC-3细胞恶性表型的影响

目的:探索二甲双胍对胰腺癌BxPC-3细胞恶性表型的影响。方法:以Smad4基因天然缺失型人胰腺癌BxPC-3细胞为对象,采用CCK-8法和流式细胞术分别检测不同剂量二甲双胍(5、10、20 mmol/L)作用24 h后的细胞增殖和凋亡情况,并计算细胞存活率和凋亡率;采用Transwell迁移试验检测不同剂量二甲双胍(10、20 mmol/L)作用24 h后的细胞迁移情况,记录迁移细胞数;采用实时定量聚合酶链反应法和Western blotting法分别检测细胞中钙黏着蛋白E(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、补体反应基因32(RGC-32)的mRNA及蛋白表达情况。结果:与对照组和5 mmol/L二甲双胍组比较,10、20 mmol/L二甲双胍组细胞的存活率均显著降低,凋亡率均显著升高,且20 mmol/L二甲双胍组细胞的凋亡率显著高于10 mmol/L二甲双胍组(P<0.05)。与对照组比较,10、20 mmol/L二甲双胍组迁移细胞数均显著减少,且20 mmol/L二甲双胍组显著少于10 mmol/L二甲双胍组(P<0.05);10、20 mmol/L二甲双胍组细胞中E-cadherin mRNA及其蛋白的相对表达量均显著升高,且20 mmol/L二甲双胍组E-cadherin mRNA的相对表达量显著高于10 mmol/L二甲双胍组;10 mmol/L二甲双胍组细胞中Vimentin mRNA,20 mmol/L二甲双胍组细胞中Vimentin mRNA及其蛋白以及10、20 mmol/L二甲双胍组细胞中RGC-32 mRNA及其蛋白的相对表达量均显著降低,且20 mmol/L二甲双胍组Vimentin mRNA及其蛋白、RGC-32 mRNA的相对表达量均显著低于10 mmol/L二甲双胍组(P<0.05或P<0.01)。结论:二甲双胍可剂量依赖性地通过Smad4非依赖性通路抑制BxPC-3细胞的增殖和迁移,促进其凋亡,这可能与胰腺癌细胞上皮间质转化过程以及RGC-32表达受到抑制有关。     

氯沙坦抑制ROS/ERK1/2信号途径减轻AGEs诱导的大鼠脑血管平滑肌细胞增殖

目的探讨果糖制备的糖基化终末产物(AGEs)对大鼠脑基底动脉血管平滑肌细胞(BASMC)的增殖以及氯沙坦对增殖的影响和机制。方法培养大鼠脑基底动脉血管平滑肌细胞,用CCK8法测定不同浓度(1,5,10μmol/L)氯沙坦对果糖制备的AGEs(200mg/L)预处理48h诱导血管平滑肌细胞增殖的影响。用western blotting检测AGEs以及氯沙坦处理后对ERK蛋白表达影响。结果 AGEs刺激血管平滑肌细胞增殖(0.827±0.069比0.364±0.052,P<0.01)。给予氯沙坦(5,10μmol/L)后,细胞增殖明显下降(0.658±0.064和0.381±0.058比0.827±0.069,P<0.01)。AGEs还使平滑肌细胞内活性氧簇(ROS)生成增多,并显著增加ERK1/2蛋白表达,氯沙坦则明显抑制ROS和ERK1/2蛋白水平。结论果糖制备的AGEs诱导脑基底动脉血管平滑肌细胞增殖,氯沙坦可能通过阻断AT1受体而抑制ROS和ERK1/2表达,减少平滑肌细胞的异常增殖。     

黄腐醇对肺癌细胞株A549体外抑制作用及其可能机制

目的 探讨黄腐醇对人肺癌细胞株A549的体外抑制作用及其可能机制.方法 体外培养A549细胞,采用MTT法检测黄腐醇10、20 μmol/L或联用N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)5 mmol/L对细胞生长的作用,细胞集落实验检测细胞的集落形成能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况和活性氧(ROS)含量,Western blot法检测p53、p21、转录激活因子4(ATF4)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的蛋白表达.结果 黄腐酵呈浓度和时间依赖性地抑制A549细胞生长(P＜0.05).与对照组相比,黄腐醇10,20 μmol/L均可减少A549细胞集落的数量,促进细胞凋亡,增加细胞内ROS含量以及p53、p21、ATF4、CHOP蛋白表达(P＜0.05);而NAC预处理后,可降低黄腐醇诱导的ROS含量以及细胞抑制率(P＜0.05).结论 黄腐酵能够体外抑制肺癌细胞生长并促进细胞凋亡,可能与黄腐酵升高肿瘤细胞内ROS含量、调节细胞周期和内质网应激相关蛋白的表达有关.     

二甲双胍对晚期糖基化终产物诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨二甲双胍对晚期糖基化终产物( AGE)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响.方法 采用传代细胞培养法培养VSMC细胞;将100、200、400mg/L的AGE分别作用于VSMC,且设200 mg/L BSA组与空白对照组;10-5、10-3、10-3mol/L的二甲双胍+200 mg/L的AGE分别作用VSMC,于加药后12、24、48及72 h观察增殖变化;后用四氮唑蓝法测定其吸光度值.结果 各浓度AGE组在不同时间均能促进VSMC增殖;其中,100 mg/L AGE组12 h时对VSMC就有增殖作用,而200 mg/L AGE组增殖作用最明显,且在24h作用最强;400mg/L组同200 mg/L组相比无统计学差异(P＞0.05);各浓度二甲双胍组在24h、48 h、72 h各组均能抑制VSMC增殖,相比均有统计学意义(P＜0.05);各浓度二甲双胍组相比,10-4mol/L、10-3 mol/L组24h抑制作用最强,经比较有统计学意义(P＜0.05).结论 二甲双胍对AGE诱导的VSMC增殖有抑制作用.     

GLP-1对AGEs诱导H9C2心肌细胞凋亡的保护作用研究

目的研究胰高血糖素样肽素-1(glucogon like pep tide-1,GLP-1)对晚期糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)诱导H9C2心肌细胞凋亡的保护作用机制。方法体外培养H9C2细胞,实验分为4组:正常对照组、100 mg·L~(-1)AGEs试验组、AGEs(100 mg·L~(-1))+GLP-1(10 nmol·L~(-1))组、AGEs(100 mg·L~(-1))+NAC(5 mmol·L~(-1))组,处理24 h。通过CCK-8比色法检测细胞存活率,相差显微镜观察细胞形态,双氯荧光素(DCFH-DA)染色荧光显微镜摄片观察细胞内活性氧(ROS)水平;RT-PCR法测定Bax、Bcl-2 mRNA基因的表达;运用Hoechst 33258检测试剂盒及流式细胞术检测心肌细胞的凋亡率,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达量。结果与正常组相比,100 mg·L~(-1)AGEs组降低H9C2细胞生存率,活性氧(ROS)生成量增加;与AGEs组相比,AGEs+GLP-1组细胞生成率提高,活性氧(ROS)生成量减少。与正常组相比,AGEs组促凋亡蛋白Bax表达增加,抑制凋亡蛋白Bcl-2减少,细胞凋亡率升高;AGEs+GLP-1组较AGEs组下调促凋亡蛋白Bax,上调凋亡抑制蛋白Bcl-2,细胞凋亡率减少。结论 GLP-1对AGEs诱导的心肌细胞凋亡具有保护作用,其保护机制与减少活性氧(ROS)有关。     

Autocamtide 2-相关抑制肽对心肌成纤维细胞分泌细胞因子及基质金属蛋白酶表达的抑制研究

目的：观察钙-钙调素依赖性蛋白激酶（CaMK）Ⅱ抑制剂（autocamtide 2-相关抑制肽,AIP）在大鼠心肌成纤维细胞增殖中的作用及其分子机制。方法：培养新生1～3 d乳鼠心肌成纤维细胞（3代）,分为正常对照组（CON）,血管紧张素Ⅱ（AngⅡ,0.1 umol/L）组,AngⅡ（0.1μmol/L）＋AIP（0.2μmol/L）组,AngⅡ（0.1μmol/L）＋AIP（0.5μmol/L）组,AngⅡ（0.1μmol/L）＋AIP组（1.0μmol/L）;MTT法及细胞记数法分别测定心肌成纤维细胞增殖;ELISA法测定细胞因子（TGF-β1,TNF-a）;RTPCR检测基质金属蛋白酶-2,9（MMP-2,9）mRNA水平;免疫印记法检测MMP-2,9的蛋白表达。结果：AIP（0.5μmol/L,1.0μmol/L）抑制AngⅡ引起的心肌成纤维细胞增殖,并呈剂量依赖;AIP（0.5μmol/L,1.0μmol/L）抑制AngⅡ引起的细胞因子分泌,并呈剂量依赖AIP（0.5μmol/L,1.0μmol/L）预防0.1μmol/LAngⅡ引起的MMP-2,9 mRNA及蛋白的表达增加。结论：AIP（0.5μmol/L,1.0μmol/L）对AngⅡ诱导的心肌纤维化具有保护作用,其机制可能与AIP预防心肌成纤维细胞增殖、细胞因子分泌以及对基质金属蛋白酶的调节有关。     

依达拉奉对谷氨酸所致神经干细胞损害的保护作用

目的探讨依达拉奉对谷氨酸所致神经干细胞损害的保护作用及机制。方法取大鼠13.5 d胚胎皮质,提取神经干细胞,分为谷氨酸处理组(500μmol/L)、依达拉奉干预组(500μmol/L谷氨酸+500 ng/mL依达拉奉)和正常对照组。谷氨酸及依达拉奉处理24 h后,应用光学显微镜高倍下观察各组细胞的形态和数量;并对各组细胞作DAPI及TUNEL染色,计数阳性细胞。结果与正常对照组比较,谷氨酸处理组细胞的数量减少(P<0.05);依达拉奉组细胞的数量较谷氨酸组明显增多(P<0.05)。谷氨酸处理组的TUNEL阳性细胞明显多于正常对照组(P<0.05),依达拉奉组的TUNEL阳性细胞明显少于谷氨酸组(P<0.05)。结论依达拉奉通过拮抗谷氨酸诱导的细胞凋亡对谷氨酸所致的神经干细胞损害起到保护作用。     

柚皮素对氧化应激所致成骨细胞凋亡的影响及机制研究

目的：观察柚皮素对氧化应激导致的成骨细胞凋亡的影响,并探讨其机制。方法体外分离培养成骨细胞,细胞分空白对照组、单纯 H2 O2作用组、H2 O2＋0 J．1μmol／L 柚皮素组、H2 O2＋1μmol／L柚皮素组、H2 O2＋10μmol／L柚皮素组。 MTT法检测成骨细胞活力;流式细胞术检测成骨细胞凋亡率;荧光显微镜观察活性氧（ ROS）含量;比色法检测丙二醛（ MDA）含量;Real time-PCR和Western-blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3表达情况。结果与空白对照组比较,单纯H2 O2处理组细胞活性明显降低,凋亡率及ROS、MDA含量明显增加;同时Bcl-2 mR-NA和蛋白表达明显下调,Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达明显上调（ P ＜0．05）。与单纯H2 O2处理组比较,柚皮素预处理24 h能够明显增强细胞活性,降低细胞凋亡率及ROS、MDA含量,上调Bcl-2 mRNA和蛋白表达,下调Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达,呈剂量依赖性（ P ＜0．05）。结论柚皮素在氧化应激条件下能够促进成骨细胞增殖,抑制成骨细胞凋亡,其机制与上调Bcl-2表达,下调Bax、Caspase-3表达有关。     

Apocynin改善TNF-α诱导肝细胞胰岛素抵抗的机制研究

目的：探讨NADPH氧化酶（NOX）的P47PHOX亚基膜转位的抑制剂Apocynin对TNF-α诱导的胰岛素抵抗以及氧化应激水平的影响。方法：实验分为4组：对照组、TNF-α（4ng/mL）处理组、TNF-α＋Apocynin（100μmol/L）处理组和Apocynin（100μmol/L）处理组。蒽酮法检测细胞内糖原合成;用DCFH-DA探针标记,流式细胞术检测细胞内活性氧的水平;Westernblotting检测JNK、p-JNK、IRS1、p-IRS1的表达。结果：与对照组比较,TNF-α刺激HepG2后活性氧水平显著增加,细胞内糖原合成障碍。Apocy-nin能显著降低TNF-α诱导的细胞内活性氧的水平,并促进细胞内糖原合成。TNF-α激活JNK,同时抑制胰岛素信号通路,Apocynin能抑制TNF-α对JNK的激活,并且促进胰岛素信号通路敏感性。单独用Apocynin处理对细胞内活性氧和糖原合成以及下游信号通路均无显著影响。结论：Apocynin能降低TNF-α诱导的细胞内活性氧的水平,改善TNF-α诱导肝细胞胰岛素抵抗状态。     

胡桃醌对血管形成的影响及其机制初探

目的：观察胡桃醌对内皮细胞系EAHY.926细胞活性和迁移性、大鼠主动脉微血管样结构和鸡胚尿囊膜血管生成的影响。方法：不同浓度胡桃醌作用于EAHY.926细胞株48 h后MTT法检测细胞存活率。大鼠主动脉无血清培养,加入100、50、25、12.5μmol/L浓度的胡桃醌,观察其对微血管结构的影响。选用7日龄鸡胚进行鸡胚绒毛尿囊膜血管生成实验。结果：200、100、50μmol/L浓度胡桃醌对EAHY.926细胞活性有明显的抑制作用（P〈0.05）,IC_（50）为122.848μmol/L;25、12.5μmol/L的胡桃醌促进EAHY.926细胞株的生长（P〈0.05）。100、50、25μmol/L的胡桃醌均可抑制大鼠主动脉微血管形成（P〈0.01）,12.5μmol/L的胡桃醌可明显减少内皮细胞的爬行数量,延缓其爬行速度（P〈0.01）。200、100、50、25μmol/L胡桃醌对鸡胚绒毛尿囊膜已存在的血管有不同程度的刺激作用,出现不同程度的充血、出血,最终凝血,且呈剂量依赖性;而12.5μmol/L的胡桃醌作用区域无新生血管形成。结论：胡桃醌具有抗血管生成作用。     

紫草素对人黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响

目的探讨紫草素对人黑素瘤细胞增殖及黑素合成的影响。方法采用MTT法测定紫草素对人A375黑素瘤细胞增殖的影响,NaOH裂解法测定黑素合成。并分成实验组（紫草素组）、对照组（空白组）和阳性对照组[甲氧沙林（8-MOP）组],对其结果进行比较分析。结果紫草素浓度在0.25～1μmol/L对人A375黑素瘤细胞增殖无影响（P〉0.05）,2μmol/L和4μmol/L的紫草素对于A375黑素瘤细胞的增殖有一定的抑制作用（P〈0.05或P〈0.01）。紫草素对于人A375黑素瘤细胞中酪氨酸酶活性呈剂量依赖性激活作用。实验组与对照组比较,0.25、0.5及1μmol/L紫草素对人A375黑素瘤细胞酪氨酸酶活性有激活作用,差异有统计学意义（P〈0.01）;且阳性对照组紫草素作用优于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）;实验组浓度为0.25、0.5及1μmol/L紫草素溶液和阳性对照组与对照组比较,对于人A375黑素瘤细胞中黑素合成有激活作用,差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。结论紫草素对于培养的人黑素瘤细胞酪氨酸酶活性及黑素生成有较强的剂量相关性激活作用。     

香菇多糖对人膀胱癌BIU-87细胞增殖的抑制作用

目的探讨香菇多糖对人膀胱癌BIU-87细胞增殖的影响以及作用机制。方法配制不同浓度（0、10、100、500、1000、2000μmol／L）的香菇多糖溶液,每个浓度取100μl为不同浓度组,分别作用于经培养处理后的BIU-87细胞,检测各组细胞的增殖和凋亡情况、线粒体膜电位变化以及活性氧含量。结果BIU-87细胞的OD值随香菇多糖浓度的增大逐渐降低,各组OD值与对照组（0μmol／L）比较差异均有统计学意义（P〈0．05）;不同浓度的香菇多糖对BIU-87细胞捌亡率无显著影响（P〉0．05）,但细胞死亡率与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）;BIU-87细胞线粒体膜电位水平随着香菇多糖浓度的增大呈下降趋势,除10μmlol／L组外,其余各组与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）;活性氧水平则随着香菇多糖浓度的增大而呈上升趋势,各组与对照组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论香菇多糖可使人膀胱癌BIU-87细胞线粒体膜电位去极化,诱发细胞内活性氧的产生,导致细胞死亡,从而抑制肿瘤的生长。     

冬凌草甲素通过PI3K/Akt通路诱导MDA-MB-231细胞的凋亡

目的：研究冬凌草甲素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖产生的影响,初步探讨其作用机理。方法：体外培养人乳腺癌MDA-MB-231细胞,采用6、12、24μmol/L冬凌草甲素对其进行处理,采用倒置显微镜进行细胞形态学观察,MTT比色法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting检测凋亡相关蛋白procaspase-3、PARP及Akt、p-Akt、p-GSK3β表达的变化。结果：冬凌草甲素作用MDA-MB-231细胞24h后,可观察到细胞凋亡的形态学改变,以24μmol/L组最为明显。实验组与对照组相比,细胞存活率显著降低、凋亡率显著升高（P〈0.01）,具有时间和剂量依赖性,凋亡相关蛋白procaspase-3下调,caspase-3底物PARP被逐步剪切,并伴随p-Akt、p-GSK3β蛋白水平下调（P〈0.05）。结论：冬凌草甲素可有效抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖,诱导其凋亡,机制与PI3K/Akt通路的抑制有关。     

西红花酸对晚期糖基化终产物诱导牛血管内皮细胞E-选择素表达的抑制作用

目的：研究西红花酸（crocetin）对晚期糖基化终产物（advanced glycation end products,AGEs）诱导牛主动脉血管内皮细胞（bovine Endothelial cells,BECs）E-选择素（E-selectin）表达的抑制作用。方法：分离纯化新生牛全血的中性粒细胞与单核细胞,用虎红染色法测定西红花酸对牛单核细胞/中性粒细胞与BECs黏附的影响,Cell-based ELISA法和sABC免疫细胞化学法测定E-选择素蛋白表达变化。结果：AGEs（100μg/mL）能促进中性粒细胞和单核细胞对BECs的黏附（P〈0.01 vs control）,用西红花酸（1,0.1,0.01μmol/L）预孵内皮细胞12h后,再用AGEs作用24h,中性粒细胞和单核细胞对BECs的黏附较AGEs模型组降低,且呈剂量依赖性关系（P〈0.05或0.01）。Cell-based ELISA测定结果显示,AGEs作用4h内,BECs中的E-selectin表达水平上升,之后E-selectin表达下降,8h时,恢复接近正常水平。而西红花酸（1,0.1μmol/L）能使E-selectin表达下降。sABC免疫化学结果也证实西红花酸对AGEs诱导BECs中E-selectin表达有抑制作用。结论：西红花酸可通过抑制黏附分子E-selcetin蛋白表达,从而抑制中性粒细胞和单核细胞对内皮细胞的黏附作用,这可能是西红花酸减轻糖尿病血管病变的作用机制之一。