亚胺培南耐药铜绿假单胞菌消毒剂及β内酰胺类抗生素耐药相关基因研究

目的 了解临床分离的对亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌消毒剂及G内酰胺类抗生素耐药相关基因存在状况。方法 自临床分离28株对亚胺培南耐药铜绿假单胞菌,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法检测耐药基因。结果28株中,qacE△1、TEM、OXA基因阳性株数(％)分别为24株(85．7％)、20株(71．4％)、1株(3．6％),此株0XA基因经序列分析确认为OXA-10型超广谱β内酰胺酶(GenBank注册号：AY841859)。25株(89．3％)oprD基因缺失,IMP、V1M、SHV、PER、VEB、GES、MIR、DHA基因均阴性。结论临床分离的对亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌耐消毒剂基因qacEA1及TEM基因携带率均很高,至少存在TEM、OXA-10两种β内酰胺酶基因,oprD基因缺失突变是对亚胺培南耐药的重要原因。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌β-内酰胺酶相关基因及Ⅰ类整合子的检测

目的 研究耐亚胺培南铜绿假单胞菌(PA)β-内酰胺酶相关基因及Ⅰ类整合子的携带情况.方法 采用K-B法对临床分离的PA进行药敏试验,选出26株耐亚胺培南PA,用PCR法检测其β-内酰胺酶相关基因和Ⅰ类整合子(int Ⅰ1和qacE△1-sull基因).结果 26株耐亚胺培南PA体外对15种抗菌药物的药敏结果显示对多黏菌素B的敏感率为100%,对头孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、阿米卡星的敏感率分别为61.54%、61.54%、65.39%、30.77%、50.00%.对复方新诺明的耐药率为100%.16种基因检出率由高到低依次为qacE△1-sull(92.31%),OprD2缺失(46.15%),TEM(42.31%),OXA-10(26.92%),VIM(11.76%),SPM(7.69%),VEB(7.69%),SHY(7.69%),未检出IMP、GIM、PER、GES、CARB、DHA、CTX-M、intⅠ 1基因.结论 耐亚胺培南PA的耐药主要与Ⅰ类整合子、OprD2缺失有关.     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药及基因分析

目的分析耐亚胺培南铜绿假单胞菌（IRPA）的耐药性及耐药基因。方法聚合酶链反应（PCR）法对IRPA耐药相关基因（IMP、SPM、VIM、GIM、GES、OXA-10）和膜微孔蛋白基因OprD2进行检测;用脉冲场凝胶电泳进行菌株同源性检测;用VITEK2Compact进行细菌鉴定及药敏试验。结果28株IRPA对哌拉西彬他唑巴坦、妥布霉素耐药率均为32．1％,对环丙沙星、左旋氧氟沙星耐药率分别为46．4％和67．9％,对其他抗菌药物均呈较高的耐药性（82．1％～100．0％）;有4株对16种抗菌药物均耐药。OprD2基因为25．0％（7／28）,SPM基因为14．3％（4／28）,OXA-10基因为3．6％（1／28）;VIM、GIM、GES耐药基因未检出。结论IRPA的多重耐药现象较严重,治疗IRPA引起的感染首选哌拉西林／他唑巴坦、妥布霉素;耐药基因以IMP、OprD2为主。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因的研究

目的:研究耐亚胺培南铜绿假单胞菌(IMPRPa)β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因的存在情况。方法:对60株临床分离的IMPRPa,采用聚合酶链(PCR)方法检测β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因IMP、VIM、OprD2,并对部分IMP、VIM基因的PCR扩增产物进行序列分析。结果:60株受试菌中,β-内酰胺类抗菌药物耐药相关基因检测阳性为:IMP7株,VIM18株,有3株菌同时携带IMP、VIM基因,IMP、VIM基因序列分析为IMP-1型和VIM-2型,OprD2基因缺失29株。结论:OprD2蛋白通道缺失和产金属β-内酰胺酶是IMPRPa耐亚胺培南的主要机制。     

多重耐药铜绿假单胞菌β-内酰胺类相关耐药基因研究

目的 调查我院2005年临床分离多重耐药铜绿假单胞菌（PA）的耐药性分析并探讨其耐药基因的存在状况。方法对31株临床分离的铜绿假单胞菌用纸片扩散法检测其药敏表型，采用聚合酶链反应（PCR）法检测β-内酰胺酶编码基因和外膜通道蛋白OprD2基因，并与相关药敏表型比较。结果31株铜绿假单胞菌对16种抗菌药物的耐药率为48．4％～100％；β-内酰胺酶编码基因PER、VIM、CARB、IMP、TEM、OXA-10的检出率分别为6．4％、3．2％、3．2％、3．2％、3．2％、3．2％，未检出GES、SHV、VER基因，31株外膜通道蛋白OprD2基因缺失，检出率为100％。结论本院多重耐药铜绿假单胞菌对β-内酰胺酶类抗生素的耐药主要与外膜通道蛋白OprD2基因缺失有关。     

耐亚胺培南鲍曼不动杆菌耐药机制研究

目的 研究鲍曼不动杆菌对亚胺培南的耐药机制。方法 对临床分离的3株耐亚胺培南的鲍曼不动杆菌，采用KB纸片扩散法（CLSI／NCCLS2004年标准）进行药敏试验，三维试验检测ESBLs和AmpC酶，PCR方法检测TEM、SHV、PER、VEB、AmpC、IMP、VIM、OXA-23和OXA-24等9种耐药基因型，PCR阳性产物进行基因测序，结果在GenBank基因库中比对分析。结果 3株鲍曼不动杆菌为多重耐药菌株，三维试验均产生ESBLs，1株产生AmpC酶，耐药基因型检测3株TEM阳性，2株PER阳性，2株AmpC酶阳性及SHV、VEB和IMP、VIM、OXA-24型等均为阴性；3株OXA-23型均阳性；另外27株对亚胺培南敏感鲍曼不动杆菌IMP、VIM，OXA-23和OXA-24型检测结果均阴性。结论 耐亚胺培南鲍曼不动杆菌携带TEM、PER、非诱导AmpC酶、OXA-23型碳青霉烯酶基因，产生OXA-23型碳青霉烯酶是主要耐药机制。     

铜绿假单胞菌耐亚胺培南相关基因OprD2研究

目的研究铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药机制。 方法取临床分离的铜绿假单胞菌18株，经K-B法检测耐药性，根据耐药性分为耐亚胺培南菌组12株和敏感菌组6株。另设1标准菌株ATCC27853。采用PCR法检测各菌株的OprD2基因，探讨OprD2基因突变与细菌对亚胺培南耐药之间的关系。结果12株耐药菌经OprD2基因扩增，8株阴性，4株阳性；6株敏感菌株及标准菌株扩增全部为阳性。统计学检验结果表明，对亚胺培南耐药菌组和敏感菌组OprD2基因阳性率的差异有极显著性（P＜0.01），且在耐药菌中发现了新的OprD2基因突变方式。 结论OprD2突变是铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的重要机制，突变的方式有缺失突变与插入失活。     

铜绿假单胞菌对碳青霉烯类抗生素的耐药性及其耐药表型与外膜蛋白OprD2的关系

目的 了解铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa，Pa）临床分离株对几种常用抗铜绿假单胞菌药物的敏感性；探索铜绿假单胞菌临床分离株对亚胺培南和美罗培南耐药性差异与其膜孔蛋白0prD2变化的关系。方法琼脂对倍稀释法测定142株Pa对亚胺培南、美罗培南等8种常用抗假单胞菌药物的最低抑菌浓度，从中筛出32株对亚胺培南和美罗培南不同耐药表型的Pa，提取外膜蛋白并采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）法分离，检测OprD2相对含量。结果耐药率最高的是亚胺培南（54．23％），其次是环丙沙星（45．07％）、美罗培南（28，87％）、氨曲南（19．72％）、阿米卡星（17.61％）、哌拉西林／三唑巴坦（14．08％）和头孢他啶（11．97％），头孢哌酮／舒巴坦耐药率最低（9．86％）。呈现多重耐药的菌株占38．73％（55／142），交叉耐药率高达40．84％（58／142）。在对亚胺培南耐药的菌株中，合并有其他肛内酰胺类抗生素耐药的菌株达到62．34％（48／77）。32株Pa外膜蛋白电泳结果显示OprD2相对含量在耐药组为0～3．5％（其中有一株为8.70％），敏感组为6．20％～10.20％。在碳青霉烯类耐药组与敏感组之间统计分析P〈0．05，耐碳青霉烯类组低于敏感组，但是在亚胺培南耐药、美罗培南敏感组与亚胺培南、美罗培南均耐药组之间差异无统计学意义。结论铜绿假单胞菌耐药菌株常见，且常呈多重耐药和交叉耐药。亚胺培南耐药率高于美罗培南。膜孔蛋白OprD2减少或缺失是我院Pa对亚胺培南耐药的主要原因之一。但在美罗培南耐药中所起的作用，有待进一步研究。     

骨科感染创面铜绿假单胞菌耐亚胺培南临床分析

目的：探讨骨科感染创面铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的原因和可能机制。方法：检测37株骨科感染创面铜绿假单胞菌外膜蛋白OprD2及金属β-内酰胺酶的表达情况,分析铜绿假单胞菌感染患者临床情况。结果：37株实验菌株中,15株对亚胺培南敏感,22株对亚胺培南耐药,其中有17例与ICU或呼吸内科住院有关,耐药株患者中APACHEⅡ评分达12以上占45．5％,平均住院时间（26．9±7．5）d,2周内有亚胺培南或美罗培南使用史者45．5％（10／22）;敏感株患者中APACHEⅡ评分〉12者6．7％,平均住院时间（13．5±6．6）d,2周内有亚胺培南或美罗培南使用史者0％（0／15）。OprD2相对含量耐亚胺培南菌株组为（2．65±0．54）％,明显低于亚胺培南敏感菌株组的（5．38±0．81）％（P〈0．01）。37株实验菌株中产金属β-内酰胺酶5株（13．5％）,并均在耐亚胺培南菌株组中。结论：他科输入、病情危重免疫力低下、住院时间长、碳青霉烯类抗生素使用是骨科感染创面铜绿假单胞菌对亚胺培能耐药的主要原因,而OprD2的含量减少和产金属β-内酰胺酶是骨科感染创面铜绿假单胞菌对亚胺培能耐药的重要机制。     

碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌在某院的耐药流行分析

目的:了解我院碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)耐药流行情况.方法:收集佳木斯大学附属第一医院CRKP,VITEK 2 Compact药敏鉴定,K-B法复核;mCIM初步鉴定碳青霉烯酶,PCR扩增相关耐药基因进行验证.结果:31株CRKP对亚胺培南、美罗培南及哌拉西林/他唑巴坦耐药率较高,对左氧氟沙星及阿米卡星耐药率较低;31株CRKP经表型鉴定有30株产碳青霉烯酶;30株CRKP全部携带KPC-2型碳青霉烯酶基因,1株携带NDM型,未检出OXA-48型,31株CRKP菌株12株分离自ICU病房.结论:CRKP以产KPC-2型酶为主,在ICU病房CRKP易传播流行.     

铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性分析及机制探讨

目的:研究铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药性及其机制。方法:取痰液中培养分离的铜绿假单胞菌55株,经K-B法检测耐药性。采用外膜蛋白图谱,对其外膜蛋白OprD2进行SDS-PAGE分析,双纸片增效法检测金属β-内酰胺酶。结果:根据耐药性分为铜绿假单胞菌亚胺培南菌耐药36株和敏感19株。铜绿假单胞菌亚胺培南耐药株不同程度OprD2减少,耐药组OprD2相对含量明显低于敏感组(P<0.01);产金属β-内酰胺酶6株,检出率10.9%。结论:OprD2的减少和产金属β-内酰胺酶是铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要原因。     

对亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌药敏情况分析

目的了解对亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌的药敏情况。方法细菌的鉴定及药敏试验均采用法国梅里埃公司的VITEK-2微生物鉴定与药敏系统,选择经VITEK-2测定对亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌(耐药株)136株及对亚胺培南敏感的铜绿假单胞菌(敏感株)134株,统计分析两者对丁胺卡那、庆大霉素、头孢他啶、头孢他啶/阿奇霉素、哌拉西林、哌拉西林/他唑巴坦等几种临床上常用抗生素的药敏情况。结果耐药株对以上6种抗生素的敏感率分别为:丁胺卡那20.6%、庆大霉素19.1%、头孢他啶/阿奇霉素70.6%、头孢他啶27.9%、哌拉西林63.2%、哌拉西林/他唑巴坦72.1%;而敏感株对此6种抗生素的敏感率则分别为32.8%、68.7%、92.5%、65.7%、88.1%和89.6%,明显高于耐药株。经x2检验,除丁胺卡那两者比较差异无统计学意义(P>0.05)外,对其余5种抗生素的敏感率两者比较差异有统计学意义(P均<0.05)。结论对亚胺培南耐药的铜绿假单胞菌引起的感染,头孢他啶/阿奇霉素、哌拉西林/他唑巴坦、哌拉西林是较好的选择,而丁胺卡那、庆大霉素及单独使用头孢他啶则不推荐。     

耐碳青霉烯酶铜绿假单胞菌外膜蛋白OprD2基因型的研究

目的分析耐亚胺培南铜绿假单胞菌携带耐药基因,为临床合理选用抗菌药物提供依据,为降低细菌的耐药性和控制医院感染提供参考依据。方法收集临床标本分离出的耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药性;聚合酶链式反应(PCR)检测碳青霉烯类相关基因及外膜蛋白基因OprD2的携带情况。结果 PCR法检测出携带OprD2基因5株(33.3%);携带blaVIM基因4株(26.7%);携带blaOXA-10基因8株(53.3%)。blaGES、blaIMP、blaGIM、blzSIM、blaTEM、blaPER、blaVEB基因均未检出。结论铜绿假单胞菌感染以上呼吸道为主,其耐药性高,应规范临床用药,加强铜绿假单胞菌耐药性监测,有效控制院内感染。     

铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药机制的研究

目的建立一种检测下呼吸道感染分离的铜绿假单胞菌对亚胺培南(IMP)耐药的筛选方法并研究其耐药机制。方法114株铜绿假单胞菌，用KB法筛选出亚胺培南耐菌株、可疑耐药株和敏感株；然后提取部分菌株外膜蛋白，进行SDS—PAGE电泳，比较三组菌株外膜蛋白的差异。结果114株铜绿假单胞菌中有13株耐药，37株可疑耐药(IMP抑菌圈内出现散在小菌落)3株中敏，61株敏感。在外膜蛋白SDS-PAGE电泳图谱上发现敏感株存在OprD2、OprE带，但耐药株、可疑耐药株缺乏OprD2；OprE带缺乏或者染色较淡。定量分析发现耐药株和可疑耐药株OprD2、OprE含量明显低于敏感株。结论KB法可以筛选出IMP可疑耐药的铜绿假单胞菌；IMP抑菌圈内出现散在菌落的菌株是耐药株；铜绿假单胞菌对IMP耐药的主要原因与外膜蛋白OprD2和OprE缺失或含量明显减少有关。     

Role of outer membrane protein OprD and penicillin-binding proteins in resistance of Pseudomonas aeruginosa to imipenem and meropenem

The main mechanism of imipenem resistance in Pseudomonas aeruginosa is via downregulation of the gene for OprD porin. In a previous study, it was shown that the level of resistance did not parallel with the degree of downregulation of the porin gene, thus arguing for the existence of other resistance mechanisms. Penicillin-binding protein (PBP) 2 and PBP3 are involved in carbapenem resistance in Escherichia coli. The genes for PBPs were sequenced in three imipenem-resistant clinical strains and these strains were conjugated with two susceptible P. aeruginosa PA0 strains, selecting for auxotrophic markers. In all the clinical and resistant isolates there was no obvious elevation of AmpC cephalosporinase. The active sites of PBP1b (ponB), PBP2 (pbpA), PBP3 (pbpB) and PBP6 (dacC) had no mutations in any of the examined strains. Production of oprD mRNA was significantly lower in clinical strains and transconjugants after selection for the proB marker (PA4565 at 5113 kb). The clinical strains had alterations in OprD that were not found in transconjugants. Our findings suggest that PBPs do not play a role in imipenem resistance in the clinical strains examined here, but that a regulatory gene for oprD contributing to carbapenem resistance is located close to the proB gene.     

铜绿假单胞菌的耐药性监测

目的 分析2007至2009年我院345株铜绿假单胞菌(PA)对抗菌药物的耐药情况.方法 细菌鉴定和药敏试验采用VITEK 2 Compact全自动细菌培养鉴定仪,统计方法 采用Whonet 5.3软件.结果 PA的标本来源主要为痰液,占分离总数的83.8%(289/345);其次为尿液(20株)和分泌物(20株);病区分布前3位为呼吸内科(102株)、神经内科(65株)和脑外科(36株).耐亚胺培南铜绿假单胞菌(IRPA)分离率为8.7%(28株);PA和IRPA对四环素、复方新诺明、氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、第一代和第二代头孢菌素耐药性均高(＞91%),对哌拉西林/他唑巴坦和妥布霉素耐药性均低(＜33%);PA对头孢他啶、头孢吡肟、左氧氟沙星、哌拉西林、庆大霉素耐药性较低(15%～38%),但IRPA对上述药物的耐药性较高(67%～86%),二者差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PA是院内感染的主要病原菌,IRPA对大多数抗菌药物耐药,应及时监测耐药株,采取有效的感染控制措施.

Abstract：

Objective To analyze the drug resistance of antibacterials of 345 pseudomonas aeruginosa(PA) and Imipenem resistant pseudomonas aeruginosa (IRPA) from 2007 to 2009. Methods The bacteria identification and drug sensitive test adopted the VITEK 2 Compact Full automaticity bacterial culture identification apparatus. Results The sources of PA sample were mainly from sputamentum, urine and secretion. The top three infected regions were respiration medicine, neurology and brain surgery. The dissolution rate of IRPA was 8.7% . The drug resistances of PA and IRPA to tetracycline, sinomin compositea, ampicillin, ampicillin/sulbactam, first and second cephalosporin were averagely higher than 91%. The drug resistances of PA and IRPA to piperacillin-tazobactam sodium and tobramycin were lower than 33%, which did not show significant change (P＞0.05). The drug resistance of PA to ceftazidime, cefepime, levofloxacin, piperacillin and gentamicin (from 15% to 38%) was lower than IRPA (from 67% to 86%) (P＜0.05). Conclusion PA is the infected main pathogenicbacteria in hospital infection.