氯吡格雷活性代谢物在人体内的血药浓度测定

目的：采用液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）建立人血浆中氯吡格雷活性代谢产物浓度测定的方法。方法：血浆经冷冻干燥处理,以Accucore C₁₈为色谱柱;乙腈（含0.01%甲酸）-水（含0.01%甲酸）为流动相,流速0.4 mL·min^-1,柱温30 ℃,进样量2 μL;通过正离子模式多反应监测扫描分析,离子通道分别为氯吡格雷活性代谢产物衍生物（CAMD）m/z 504.2→155.1,内标氯雷他定m/z 382.8→336.9。结果：血浆中氯吡格雷活性代谢产物衍生物在0.5~500 ng·mL^-1范围内线性关系良好;最低检测限为0.5 ng·mL^-1;提取回收率为83.81%~97.65%;日内和日间精密度的RSD均小于9.86%。结论：本方法准确可靠,简便快速且灵敏度高,适用于人血浆中氯吡格雷活性代谢物的测定,可进一步用于研究氯吡格雷活性代谢产物的药代动力学特征。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆中非索非那定的浓度及其应用

目的：建立超高效液相色谱-串联质谱法（UHPLC-MS/MS）测定人血浆中非索非那定的浓度,并用于灯盏花素对人P-糖蛋白体内活性影响的研究。方法：200 μL血浆经500 μL乙腈沉淀蛋白后,采用Waters ACQUITY UPLC^® BEH C₁₈柱（50 mm×2.1 mm,1.7 μm）为色谱柱,以乙腈（A）-0.1%甲酸水（B）为流动相梯度洗脱,流速为0.3 mL·min^-1;质谱采用电喷雾正离子模式离子化（ESI⁺）和多反应监测模式（MRM）扫描,非索非那定和苯海拉明（内标）的定量离子对分别为m/z 502.2→466.5和m/z 256.1→167.1。结果：非索非那定和苯海拉明的保留时间分别为2.19 min和1.89 min。人血浆中非索非那定的提取回收率、方法过程效率和基质效应均值分别为84.3%~89.6%、86.3%~90.8%和101.2%~104.2%;线性范围为1.00~1 000 ng·mL^-1（r=0.999 5）;日内、日间精密度RSD ≤ 10.9%,准确度RE%为-7.6%~5.0%;稳定性RSD和RE均在±15%内。18名志愿者给予灯盏花素或安慰剂后,非索非那定的达峰浓度C_max为（699±321）vs（710±331）ng·mL^-1、0到24 h的血浆浓度-时间曲线下面积AUC_0-24为（2 687.3±1 188.8）vs（3 015.0±1 550.2）ng·h·mL^-1、表观口服清除率CL/F为（51.3±23.8）vs（49.6±26.3）L·h^-1。结论：建立的基于UHPLC-MS/MS测定人血浆中P-糖蛋白底物非索非那定浓度的分析方法灵敏、简单,并成功应用于灯盏花素对人P-糖蛋白体内活性影响的研究。     

高效液相色谱串联质谱法同时检测人血浆伊马替尼及代谢物

目的：建立一种同时测定人血浆中伊马替尼及其活性代谢产物N-去甲基伊马替尼的高效液相色谱串联质谱（HPLC-MS/MS）法,并应用于检测胃肠间质瘤患者伊马替尼及代谢物的浓度。方法：血浆样品经甲醇沉淀蛋白后,以含0.1%甲酸的水溶液和甲醇溶液为流动相;采用梯度洗脱,Waters ACQUITY UPLC BEH C₁₈（2.1 mm×50 mm,1.7 μm）色谱柱进行分离,流速为0.3 mL·min^-1;柱温为35℃。ESI离子源,正离子模式,多反应监测,用于定量分析的离子对为m/z494.2→m/z394.3（伊马替尼）、m/z480.3→m/z394.3（N-去甲基伊马替尼）、m/z502.5→m/z394.4（内标,伊马替尼-D₈）。结果：伊马替尼和N-去甲伊马替尼的线性范围均为50~10 000 ng·mL^-1,定量下限为50 ng·mL^-1,伊马替尼及代谢物的准确度分别为97.9%~109.0%,95.5%~103.5%,日内和日间变异系数<10%。结论：本方法简便、准确、灵敏、专属性强,适用于人血浆中伊马替尼及其代谢物浓度的检测。     

HPLC-ELSD法快速测定生脉注射液中糖类成分含量

目的：利用高效液相色谱-蒸发光散射检测法（HPLC-ELSD）建立生脉注射液中糖类成分快速定量分析方法。方法：采用Alltech Prevail^TM Carbohydrate ES （4.6 mm×250 mm,5 μm）色谱柱,以乙腈和水为流动相梯度洗脱,流速0.8 mL·min^-1,柱温30℃,进样量20 μL,ELSD漂移管温度65℃。结果：生脉注射液中果糖、葡萄糖、蔗糖和麦芽糖成分达到基线分离,浓度在179.0~2 864 μg·mL^-1（r=0.996 8）,49~784 μg·mL^-1（r=0.998 1）,39~642 μg·mL^-1（r=0.996 8）,30~480 μg·mL^-1（r=0.999 3）范围内均呈现良好的线性关系。平均回收率（n=3）在98.34%~100.7%之间,RSD ≤ 3.8%。结论：该方法快速、准确,可用于生脉注射液中糖类成分的定量检测。     

超高效液相色谱串联质谱法测定大鼠血浆中埃索美拉唑质量浓度及药动学研究

目的：建立超高效液相色谱串联质谱（UPLC-ESI-MS/MS）法测定大鼠血浆中埃索美拉唑的含量,并应用于药动学研究。方法：血浆样品经蛋白沉淀法处理后,采用Agilent ZORBAX Eclipse Plus C₁₈色谱柱（50 mm×2.1 mm,1.8 μm）,以A（0.1%甲酸）-B（乙腈）（80：20）为流动相,柱温为35℃,采用电喷雾电离源（ESI）源,以多反应监测（MRM）方式进行正离子检测。通道分别为m/z 346→198（埃索美拉唑）和m/z 254→156（内标,磺胺甲卟唑）,用非室模型计算药动学参数。结果：埃索美拉唑的线性范围为0.2~20 ng·mL^-1（r=0.999 7）,检出限为0.12 ng·mL^-1,日内日间精密度均小于10%。低、中、高3个浓度提取回收率均大于90%,达峰时间（t_max）为（1.5±0.5）h,达峰浓度（C_max）为（620.65±2.89）ng·mL^-1,药物浓度-时间曲线下面积（AUC_0-t）为（2 530.68±60.17）ng·h·mL^-1,半衰期（t_1/2）为（3.87±0.03）h。结论：该方法操作简便、快速、准确度高、重复性好,可用于大鼠血浆中埃索美拉唑的测定和药动学研究。     

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定食蟹猴血浆中地高辛、安非他酮及活性代谢物浓度和药动学评价

目的：建立同时测定食蟹猴体内地高辛、安非他酮及其活性代谢物血浆浓度的方法，并评价药动学特征。方法：以乙腈沉淀蛋白处理血浆样品。色谱柱Agilent Zorbax SB-C8（4.6×100 mm 3.5 μm）；流动相为甲醇-水（含5 mmol·L^-1甲酸铵，pH 3.6），梯度洗脱；质谱条件为电喷雾离子源，正离子模式，扫描方式为多反应离子监测，m/z 798.4→651.3（地高辛）；m/z 240.2→184.0（安非他酮）；m/z 256.3→238.0（羟基安非他酮）；m/z 242.2→168.1（赤式/苏式羟化安非他酮）；m/z 172.2→128.2（甲硝唑，内标）。食蟹猴3只，♂，体质量2~4 kg，0.1 mg·5 mL^-1·kg^-1地高辛和1.5 mg·5 mL^-1·kg^-1盐酸安非他酮静滴给药。给药前后0.08，0.25，0.5，1，1.5，2，4，6，8，12，24，48 h采血。测定地高辛、安非他酮及其活性代谢物浓度。结果：血浆标准曲线在0.25~100 ng·mL^-1（地高辛），0.2~1 000 ng·mL^-1（安非他酮/羟基安非他酮），0.2~50 ng·mL^-1（赤式/苏式羟化安非他酮），定量范围内线性良好（r≥0.995）。批内批间精密度均小于13.7%，绝对回收率为83.8%~104.2%，基质效应小于10.6%。地高辛、安非他酮、羟基安非他酮、赤式、苏式羟化安非他酮药动学参数C_max分别为（29.32±7.31）、（254.00±68.23）、（22.43±7.56）、（1.53±0.27）、（3.96±0.42） ng·mL^-1，T_max分别为（0.14±0.10）、（0.08±0）、（1.50±0.00）、（1.17±0.29）、（4.06±1.46） h，AUC_0-48h分别为（123.87±9.59）、（550.68±17.43）、（160.47±62.92）、（9.26±3.65）、（24.43±5.28） ng·h·mL^-1，半衰期分别为（21.26±3.77）、（5.54±1.76）、（3.96±1.21）、（5.58±2.40）、（4.06±1.46） h。结论：和已报道的方法比较，建立的分析方法灵敏、准确，样品处理简便、快速，适用于药动学研究以及地高辛-安非他酮药物相互作用的评价，也能为临床个体化用药实践提供方法学参考。     

液-质联用法同时测定人血浆中霉酚酸及其代谢物浓度及其在肝移植患者药动学研究中的应用

目的:建立LC-MS/MS法同时测定血浆中霉酚酸(MPA)及其代谢物MPAG与AcMPAG浓度,用于治疗药物监测与药动学研究。方法:100μl血浆标本加入300μl含内标吲哚美辛的乙腈沉淀,离心后取上清液进样。色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C₁₈柱(3.5μm, 2.1 mm×100 mm),流动相为2 mmol·L^-1甲酸铵水溶液-甲醇,采用梯度洗脱的方法,流速0.3 ml·min^-1。用多反应监测进行定量,ESI负离子方式进行检测,用于定量分析的检测离子分别为m/z 319.1→274.9(MPA)、m/z 495.3→174.4(MPAG与AcMPAG)与m/z 356.1→312.0(内标吲哚美辛)。24例肝移植患者,采用包括霉酚酸钠肠溶片(EC-MPS)的三联免疫抑制方案,测定服药后MPA及其代谢物浓度并计算药动学参数。结果:MPA在0.10~50.5μg·ml^-1,MPAG在1.13~450μg·ml^-1,AcMPAG在0.11~22.4μg·ml^-1范围内线性良好(r²>0.99)。MPA、MPAG、AcMPAG提取回收率为77.3%~92.6%;基质效应为76.0%~86.7%;回收率为94.2%~116.4%;日内及日间变异均小于15%。24例肝移植患者用药1周后MPA、MPAG、AcMPAG的主要药动学参数分别如下:峰浓度C_max为(18.8±10.9),(154±118),(3.07±2.85)μg·ml^-1;达峰时间T_max为(3.82±2.66),(4.74±2.51),(4.51±2.72)h;曲线下面积AUC_0-12为(45.2±20.3),(1456±1195),(18.3±16.2)μg·h·ml^-1;消除半衰期t_1/2为(3.21±2.56),(9.26±4.33),(5.57±5.76)h。结论:本研究所建立的方法快速准确、灵敏、专属性强,适用于MPA及其代谢物的血药浓度监测和人体药动学研究。     

液相色谱-质谱联用法同时测定大鼠血浆中柔红霉素和汉防己甲素的浓度

目的:建立一种灵敏快速的LC-MS/MS方法,能够同时测定大鼠血浆中的柔红霉素(DNR)和汉防己甲素(Tet)含量。方法:色谱柱使用的是BDS HYPERSIL-C₈柱(2.1 mm×100 mm,3 μm);采用乙腈-5 mmoL·L^-1醋酸铵(46:54 V/V)作为流动相, 其中含千分之四的甲酸;流速设为0.2 ml·min^-1。采用醋酸乙酯对血浆样品进行液液萃取,选择阿霉素(DOX)为内标,进行HPLC-MS/MS分析,正离子扫描, MRM模式检测。DNR、Tet和IS的定量检测离子对分别为m/z 528.4→321.3,m/z 623.1→381.8,m/z 544.4→397.6。结果:大鼠血浆中检测DNR及Tet的线性范围分别为2~500 ng·ml^-1,0.5~400 ng·ml^-1,DNR与Tet高、中、低浓度提取回收率均>86%,日内精密度RSD<7.3%,日间精密度RSD<4.9%,准确度RE在-0.4%~4.5%范围内。结论:本方法可灵敏、快速地测定大鼠血浆中DNR及Tet 浓度。     

超高效液相色谱串联质谱法测定人血浆中克拉霉素缓释片的浓度及其药动学

目的：建立高效、灵敏、快速的超高效液相色谱-电解质-质谱/质谱（UPLC-ESI-MS/MS）测定人血浆中克拉霉素浓度的方法,并应用于药动学研究。方法：血浆样品先经碳酸钠溶液碱化,经乙醚液-液萃取后,以0.05 mol·L^-1乙酸铵水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,色谱柱采用BEH C₁₈ （50 mm×2.1 mm,1.7 μm）色谱柱,克拉霉素和内标罗红霉素定量分析的离子对分别为m/z 748.6→157.9和m/z 837.0→679.2。结果：克拉霉素的线性范围为1~3 000 ng·mL^-1且线性关系良好,日内日间精密度均小于10.0%,准确度在-7.6%~6.0%之间,样品运行时间为2.0 min。结论：该法灵敏、快速,适用于克拉霉素高通量样本的分析, 已成功应用于克拉霉素人体药动学研究。     

LC-MS/MS法测定人血浆中利培酮和9-羟基利培酮的浓度及临床应用

目的：建立简单快速的液相串联质谱法（LC-MS/MS）测定人血浆中利培酮及其代谢物9-羟基利培酮的浓度。方法：血浆样本采用甲醇沉淀蛋白法处理,以地西泮为内标,采用ES Industries Sonoma C₁₈（2）色谱柱（100 mm×2.1 mm,3 μm）分离化合物;流动相包括A-50%甲醇水溶液（含6 mmol·L^-1乙酸铵）、B-0.1%甲酸乙腈溶液;梯度洗脱,总流速0.60 mL·min^-1;进样量10 μL;柱温30℃。采用正离子MRM模式扫描,电喷雾电离,利培酮、9-羟基利培酮及地西泮内标离子通道分别为m/z411.3→m/z191.1、m/z427.2→m/z207.0和m/z285.1→m/z193.1。依据《中国药典》（2015年版）通则中9012"生物样品定量分析方法验证指导原则"对所建方法进行验证。结果：利培酮在0.16~101.40 μg·L^-1的浓度范围内线性关系良好（r>0.999）,9-羟基利培酮在0.40~256.80 μg·L^-1浓度范围内线性关系良好（r>0.999）;在定量下限,低、中、高浓度批内与批间精密度的标准偏差（RSD）均小于10.9%,准确度符合要求;含分析物血浆样品在不同储存条件下结果稳定。该法已成功应用于临床样本治疗药物监测。运用此方法监测分析一千多份临床样本得出总利培酮临床实际测定浓度范围为13.30~93.22 μg·L^-1。结论：本研究建立了测定血浆中利培酮及其代谢物9-羟基利培酮浓度的快速、简便、实用的LC-MS/MS方法。利培酮临床实际测定浓度范围相比于神经精神药理学与药物精神病学协会专家组推荐治疗浓度范围更宽,且多次监测的患者中女性血药浓度相对于男性更趋于稳定。     

液相色谱串联质谱法测定兔眼玻璃体内二十碳五烯酸的浓度

目的:建立适用于兔眼玻璃体内二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)浓度测定的LC-MS/MS方法,为研究EPA在玻璃体内的药动学提供技术支持。方法:应用Q Trap 4500液质联用仪,采用电喷雾电离源,在负离子方式选择反应监测(MRM)模式下测定兔眼玻璃体内注射EPA后不同时间的药物浓度。50μL玻璃体样品经乙腈沉淀蛋白并浓缩处理后用于定量分析。色谱分离采用XDB C₁₈柱(50 mm×4.6 mm,1.8μm),流动相为甲醇-水-甲酸(90∶10∶0.1,V/V/V),流速:1.00mL·min-1;进样量:2μL。监测的离子反应分别为m/z301.0→m/z257.3(EPA)和m/z526.0→m/z401.0(内标,格列喹酮)。每个样品的分析时间为3 min。结果:玻璃体内EPA在0.02~5.00mg·L^-1范围内线性关系良好,最低定量限为0.02mg·L^-1;提取回收率大于90%;日内和日间精密度(RSD)均小于11.6%;基质效应可忽略;EPA玻璃体样品室温放置6 h、-20℃放置3 d、-70℃一次冻融稳定,处理后样品室温放置20 h稳定。兔眼内注射EPA后的主要药动学参数如下:Cmax为1.05 mg·L^-1,tmax为0.5 h,t_1/2为4.72 h,AUC(0-t)为3.614 mg·L^-1·h,AUC(0-∞)为4.296 mg·L^-1·h。结论:所建立的EPA浓度测定的LC-MS/MS方法灵敏、准确、简便、稳定,适用于EPA在兔眼内的药动学研究。     

HPLC-MS/MS法定量研究氧化白藜芦醇对沙奎那韦在大鼠体内药动学的影响

目的:应用高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)技术建立大鼠血浆中沙奎那韦的定量测定方法,并用于氧化白藜芦醇对沙奎那韦在大鼠体内药动学研究。方法:液相色谱分离采用C₁₈反相色谱柱(150mm×2.1mm,5.0μm),流动相为乙腈/水(含0.2mmol·L^-1甲酸铵),流速为300μL·min^-1;质谱检测采用电喷雾正离子(ESI^+)模式,多反应监测。血浆样品采用液-液萃取方式提取,检测反应为m/z671.4→570.4(沙奎那韦),m/z721.4→296.2(利托那韦,内标)。将10只SD大鼠分为2组,对照组与实验组分别灌胃给予沙奎那韦(30mg·kg^-1)、沙奎那韦(30mg·kg^-1)+氧化白藜芦醇(40mg·kg^-1),于不同时间取血,测定血药浓度。结果:沙奎那韦在1.0~100.0ng·mL^-1范围内呈良好的线性关系(r=0.998 5),日内和日间精密度均小于12.16%,偏差为0.89%~6.24%,回收率为67.85%~82.38%,血浆样品稳定性好。同时服用氧化白藜芦醇时,大鼠体内沙奎那韦达峰浓度C_max、C_max1显著降低,而C_max、T_max、t_1/2、CL/F均无显著差异。结论:HPLC-MS/MS测定方法准确度高、专属性强、灵敏度高、快速高效。沙奎那韦的药时曲线存在双峰现象;氧化白藜芦醇可以显著降低沙奎那韦的达峰浓度,但对口服生物利用度等其他药动学参数没有显著性影响。     

超高效液相色谱串联质谱法快速测定尼扎替丁在人体血浆中的含量

目的: 建立超高效液相色谱串联质谱法测定人体血浆中尼扎替丁的含量。方法: 血浆以甲醇直接沉淀蛋白, 上清液用于目标物的检测;色谱柱为Waters ACQUITY UPLC BEH C₁₈;流动相为5 mmol·L^-1醋酸铵水溶液-甲醇 (65:35, V/V);流速:0.20 mL·min^-1;进样量:3 μL;柱温:35 ℃;样品室温度:6 ℃;采用电喷雾正离子模式电离, 尼扎替丁和内标雷尼替丁的监测离子分别为(m/z)332.2→155.0, (m/z)315.2→130.0。结果: 尼扎替丁的线性范围为10~3 000 ng·mL^-1, 平均回收率为93.2%~101.1%, 批内、批间RSD均小于15%。结论: 本研究建立的分析方法快速、准确、灵敏、简便, 适用于尼扎替丁人体药动学方面的研究。     

高效液相串联质谱法测定小鼠肺组织中美罗培南的含量

目的：采用液相色谱-质谱串联技术（HPLC-MS/MS）,建立测定小鼠肺组织中美罗培南含量的方法,为研究美罗培南在肺内分布的药动学奠定基础。方法：采用Diamonsil C₁₈（150 mm×4.6 mm,5 μm）色谱柱进行分离,流动相为乙腈-0.1%甲酸水,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,内标选择厄他培南。电喷雾离子化源（ESI）,正负离子切换,美罗培南为正离子检测模式,内标厄他培南为负离子检测模式。多反应监测（MRM）方式进行定量分析,用于定量分析的离子对分别为美罗培南m/z 384.1→141.2,内标厄他培南m/z 474.4→265.2。结果：小鼠肺组织匀浆中美罗培南在15.625~2 000 ng·mL^-1范围内线性关系良好（r=0.999 7）,平均提取回收率为98.05%~102.54%,日内、日间精密度均小于15%。结论：采用本法测定小鼠肺组织中美罗培南的浓度,灵敏度高,专属性强,可用于肺组织样品中美罗培南快速有效的分析以及美罗培南在肺组织分布的药动学研究。