红杉黄酮通过下调PI3K/AKT信号通路抑制胃癌细胞增殖侵袭等干细胞特性

目的：探究红杉黄酮影响胃癌细胞的分子机制。方法：通过梯度浓度红杉黄酮处理胃癌细胞系AGS细胞，再使用PI3K/AKT信号通路激活剂对细胞进行诱导。采用CCK-8检测红杉黄酮对AGS细胞的最佳抑制浓度及时间，使用平板克隆、Transwell、细胞划痕实验检测细胞的增殖、迁移、侵袭能力变化。Western blot检测PI3K/AKT信号通路关键蛋白p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT。结果：红杉黄酮呈浓度依赖抑制AGS细胞，其半抑制浓度为0.5 mmol/L，最佳处理时间为48 h。红杉黄酮处理AGS细胞后，p-PI3K与p-AKT表达下调，AGS细胞增殖减少，迁移、侵袭能力降低；PI3K/AKT信号通路激活剂处理后，p-PI3K与p-AKT表达被部分逆转，增殖、迁移、侵袭能力降低也得到部分改善。结论：红杉黄酮通过失活PI3K/AKT信号通路抑制胃癌细胞增殖、迁移、侵袭等恶性行为。     

丝裂霉素C抑制PI3K/AKT信号通路抗宫腔黏连SD大鼠子宫内膜纤维化的机制研究

目的探讨丝裂霉素C通过抑制PI3K/AKT信号通路对宫腔黏连SD大鼠内膜纤维化的作用及机制。方法将40只SD雌性大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、实验组1、实验组2,每组10只,建立宫腔黏连模型并进行丝裂霉素C治疗。观察各组大鼠子宫内膜组织形态变化,并行Western blot检测p-AKT、p-PI3K、Bcl-2、Bax蛋白含量。结果与对照组比较,模型组大鼠HE染色可见细胞结构紊乱,大量单层柱状上皮细胞被上皮细胞覆盖,黏膜下层腺体数量减少,细胞成纤维化增生增加;模型组大鼠子宫组织中p-AKT、p-PI3K、Bcl-2蛋白均显著升高,Bax蛋白表达显著降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,各实验组大鼠细胞胞浆及细胞核染色程度较浅,细胞成纤维化增生数量明显减少,其中以实验组2大鼠最为显著;各实验组大鼠p-AKT、p-PI3K、Bcl-2蛋白均显著降低,Bax蛋白表达显著升高(P<0.05);且实验组2大鼠p-AKT、p-PI3K、Bcl-2蛋白含量明显低于实验组1,Bax蛋白含量明显高于实验组1(P<0.05)。结论丝裂霉素C可抑制宫腔黏连大鼠成纤维细胞活力,诱导细胞凋亡,其作用机制与抑制PI3K/AKT信号通路相关蛋白有关。     

青藤碱通过调控PI3K/AKT通路介导的上皮间质转化抑制胰腺癌AsPC-1细胞侵袭和转移

目的 探讨青藤碱对胰腺癌AsPC-1细胞上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition，EMT）、侵袭和转移的影响及机制。方法 采用不同浓度青藤碱作用胰腺癌AsPC-1细胞后，划痕愈合试验检测细胞愈合能力，Transwell试验检测迁移细胞数和侵袭细胞数，Western blotting检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达。结果 青藤碱降低AsPC-1细胞相对迁移率、迁移细胞数、侵袭细胞数。青藤碱上调E-cadherin蛋白表达、下调N-cadherin、Vimentin蛋白表达。青藤碱降低p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值。胰岛素生长因子-1逆转青藤碱对E-cadherin蛋白表达的上调和对N-cadherin、Vimentin蛋白表达的下调作用。TGF-β逆转青藤碱对AsPC-1细胞相对迁移率、迁移细胞数、侵袭细胞数的降低作用。结论 青藤碱通过调控PI3K/AKT通路介导的EMT，抑制AsPC-1细胞侵袭和转移。     

芹菜素对子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的　研究芹菜素对子宫内膜癌细胞HEC-1-B增殖、侵袭、迁移、凋亡的影响及其作用机制。方法　取对数生长期的HEC-1-B细胞,加入0、20、40和80 μmol/L的芹菜素,采用CCK-8法检测培养24、48和72 h后细胞的光密度,计算增殖抑制率。流式细胞术检测细胞凋亡水平,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力变化。Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2以及磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、磷酸化PI3K（p-PI3K）、蛋白激酶B（AKT）和磷酸化AKT（p-AKT）的表达水平。结果　20~80 μmol/L范围内,随着芹菜素干预浓度的升高,HEC-1-B细胞的增殖明显受到抑制,细胞凋亡率升高,同时促凋亡蛋白Bax表达增高,抗凋亡蛋白Bcl-2表达下降。0、5、10和20 μmol/L范围内,随着芹菜素干预浓度的升高,HEC-1-B细胞侵袭和迁移能力下降。Western blot结果显示,40 μmol/L芹菜素能够下调PI3K/AKT通路蛋白p-PI3K和p-AKT的表达。结论　芹菜素能够抑制HEC-1-B细胞增殖、侵袭、迁移并促进其凋亡,其作用机制可能与PI3K/AKT信号通路有关。     

基于PI3K-Akt信号通路研究罗哌卡因对肺癌细胞A549细胞生物学功能的影响

目的探讨罗哌卡因(Ropivacaine)通过磷脂酰肌醇-3激酶(Phospoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(Protein kinase B,Akt)信号通路影响肺癌细胞A549增殖、迁移、侵袭和凋亡。方法采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测(0、100、200和400μg/ml)罗哌卡因组肺癌细胞A549的增殖。将A549细胞分为对照组(未给药)和罗哌卡因组(400μg/ml),采用Transwell小室法分析细胞迁移和侵袭,流式细胞术评估细胞凋亡,免疫印迹实验(Western blot)测定周期蛋白依赖性激酶4(Cyclin-dependent kinases4,CDK4)、基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloprotease 2,MMP-2)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated x protein,Bax)、PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、Akt和磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达。结果CCK-8结果显示,与0μg/ml罗哌卡因组比较,100、200和400μg/ml罗哌卡因组肺癌细胞A549的细胞存活率明显减少(P<0.05)。Transwell小室法结果表明,罗哌卡因组A549细胞的细胞迁移数和细胞侵袭数明显低于对照组(P<0.05)。流式细胞术结果发现,罗哌卡因组A549细胞的凋亡率明显高于对照组(P<0.05)。Western blot检测结果显示,与对照组比较,罗哌卡因组A549细胞中CDK4、MMP-2、Bcl-2、p-PI3K和p-Akt蛋白表达水平明显降低,Bax蛋白表达水平明显提高(P<0.05),而PI3K和Akt蛋白表达水平无明显变化。结论罗哌卡因可能通过抑制PI3K/Akt信号通路,进而抑制肺癌细胞A549的增殖、迁移和侵袭并促进其凋亡。     

扁蓄苷对人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡、周期及PI3K/AKT信号通路的影响

目的探讨扁蓄苷对乳腺癌MDA-MB-231细胞的凋亡、周期及PI3K/AKT信号通路的影响。方法以不同浓度的萹蓄苷作用于体外生长至对数期的MDA-MB-231细胞48 h后,采用噻唑蓝染色(MTT)法检测扁蓄苷对细胞增殖的影响,Hoechst 33258染色观察细胞染色质固缩情况,流式细胞术检测细胞周期,Western-blot检测PI3K/AKT信号通路核心蛋白PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT表达水平,RT-PCR技术检测通路下游细胞凋亡蛋白Bcl-2、Bcl-xl及周期相关蛋白CDK2基因表达情况。结果不同浓度的扁蓄苷(6.25、12.5、25、50、100μmol·L~(-1))作用于MDA-MB-231细胞48 h后,细胞增殖活性受到抑制(P <0.01),且具有浓度依赖性;扁蓄苷(12.5、50、100μmol·L~(-1))作用细胞48 h后,细胞核染色质固缩;当扁蓄苷浓度为50μmol·L~(-1)时,S期细胞所占百分比显著增高(P <0.05),当扁蓄苷浓度为100μmol·L~(-1)时,G2/M期细胞所占百分比显著增高(P <0.05);随着扁蓄苷浓度的增加,通路核心位点PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达水平明显降低(P <0.01),细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bcl-xl、细胞周期蛋白CDK2基因表达水平下调(P <0.05)。结论扁蓄苷可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,使细胞周期阻滞于S期、G2/M期,并诱导细胞凋亡。其机制可能是通过抑制PI3K/AKT信号通路下调Bcl-2、Bcl-xl、及CDK2基因表达进而诱导人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡。     

当归多糖(ASP)对脑神经胶质瘤细胞U251的体外抗增殖及促凋亡作用影响

目的考察当归多糖(ASP)对脑神经胶质瘤细胞U251的促凋亡作用,并通过MTT法检测细胞增殖抑制率、Transwell实验检测细胞侵袭、流式细胞仪检测细胞凋亡率和Western Blot检测蛋白质表达量变化深入研究其促凋亡作用机制。方法取对数生长期的细胞,运用MTT法检测不同浓度ASP作用于U251细胞不同时间后,U251细胞的体外增殖率;应用Transwell细胞侵袭实验检测ASP作用于U251细胞后,对U251细胞体外侵袭能力的抑制性;应用流式细胞仪检测不同浓度ASP作用于U251后,U251细胞的凋亡率;应用Western Blot方法检测ASP作用于U251细胞后,U251细胞的PI3K,p-PI3K,AKT和p-AKT蛋白的表达。结果 MTT法检测细胞抑制率结果表明,ASP作用于U251细胞后,与空白对照组相比,200.0 mg·L~(-1)药物组在24 h、48 h、72 h对细胞的抑制率升高(P<0.05);400.0 mg·L~(-1)和800.0 mg·L~(-1)药物组在24 h、48 h、72 h对细胞的抑制率显著升高(P<0.001);Transwell细胞侵袭实验结果表明,与空白对照组相比,400.0 mg·L~(-1)药物组在24 h、48 h、72 h对细胞侵袭的抑制率升高(P<0.05);800.0 mg·L~(-1)药物组在24 h、48 h、72 h对细胞侵袭的抑制率显著升高(P<0.001);流式细胞仪检测结果表明,与空白对照组相比,两个药物组(400.0 mg·L~(-1)和800.0 mg·L~(-1))ASP处理U251后,U251细胞的凋亡率均升高;Western Blot检测结果表明,与空白对照组相比,两个药物组(400.0 mg·L~(-1)和800.0 mg·L~(-1))ASP能下调凋亡相关蛋白PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT蛋白的表达,其中800.0 mg·L~(-1)ASP能显著下调p-AKT蛋白质表达,具有显著性差异(P<0.05)。结论 ASP能够显著抑制U251细胞的体外增殖、侵袭能力,且能够诱导细胞凋亡,可能的机制是通过调节PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白的表达来实现的。     

生长抑素联合人转录因子叉头框蛋白 D1通过磷脂酰肌醇 3激酶 /蛋白激酶 B通路调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的探讨生长抑素联合人转录因子叉头框蛋白 D1(FOXD1)通过磷脂酰肌醇 3激酶 /蛋白激酶 B(PI3K/AKT)通路调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究。方法研究于 2018年 12月至 2019年 12月进行,通过体外培养 PANC-1细胞,过不同浓度( 0 mg/L、100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L)的生长抑素( SST)处理细胞,记为生长抑素各剂量组,其中 0 mg/L和 400 mg/经L的生长抑素作为对照组( Control)和生长抑素组( SST);将过表达载体( pcDNA)和过表达 FOXD1(FOXD1)转染至 PANC-1细胞,经过 400 mg/L的生长抑素及 20 mol/L的 PI3K抑制剂 LY294002处理细胞,记为 SST+pcDNA组、 SST+FOXD1组和 SST+ FOXD1+LY294002组。四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法( MTT)检测细胞增殖; Transwell检测细胞迁移和侵袭;蛋白质印迹法( Western blotting)检测增殖细胞核抗原( PCNA)、基质金属蛋白酶 -2(MMP-2)、基质金属蛋白酶 -9(MMP-9)、 FOXD1和 PI3K/ AKT相关蛋白的表达;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应( qRT-PCR)检测 FOXD1 mRNA的表达。结果与 Control组相比, SST组可以抑制 FOXD1 mRNA(0.47±0.03)及蛋白表达( 0.42±0.04)、增殖( 0.52±0.05)、迁移( 66.8±7.2)和侵袭( 63.7±6.5)能力,下调 p-PI3K(0.43±0.04)、 p-AKT(0.39±0.03)蛋白表达;与 SST+pcDNA组相比, SST+FOXD1组可以促进以抑制 FOXD1 mRNA(0.67±0.05)及蛋白表达( 0.64±0.06)、增殖( 0.71±0.07)、迁移( 86.9±8.5)和侵袭( 81.5±7.3)能力,上调 p-PI3K(0.62±0.05)、 p-AKT(0.65±0.06)蛋白表达。与 SST+FOXD1组相比, SST+FOXD1+LY294002组可以抑制 FOXD1 mRNA(0.37±0.04)及蛋白表达(0.35±0.03)、增殖( 0.53±0.05)迁移(67.2±6.5)和侵袭( 62.5±5.2)。结论生长抑素通过调控 FOXD1的表达抑制胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能与抑制 PI3K/AKT通路有关。     

莪术醇通过调控PI3K/AKT通路促进人肝癌HepG2细胞凋亡

目的探讨莪术醇促进人肝癌HepG2细胞凋亡的作用是否与PI3K/AKT通路有关。方法采用MTT法检测不同浓度(0、10、25、50、100μmol·L~(-1))莪术醇干预HepG2细胞24、48 h的增殖抑制率,Hoechst 33258染色法观察细胞核凋亡形态,Western blot法检测不同浓度莪术醇及PI3K/AKT通路阻断剂LY294002对HepG2细胞p-PI3K、p-AKT、Caspase-3蛋白表达的影响。结果莪术醇对HepG2细胞的增殖有明显抑制作用,呈浓度依赖性,但干预48 h对比24 h差异无统计学意义;Hoechst 33258染色发现,莪术醇干预后,同一视野下细胞数目明显减少,细胞透亮,部分细胞核碎裂,核固缩,呈现典型的凋亡形态学特征;Western blot结果显示,莪术醇能显著降低细胞p-PI3K、p-AKT蛋白的表达,上调凋亡执行蛋白Caspase-3的表达,与LY294002联用后表现出良好的协同作用,对各蛋白表达的调控较单独用药更加明显。结论莪术醇能通过抑制PI3K/AKT通路诱导人肝癌HepG2细胞凋亡。     

血府逐瘀合剂对PDGF-BB诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移及PI3K/AKT/GSK-3β/β-catenin信号通路的影响

摘要：目的:探究血府逐瘀合剂对血小板衍生生长因子（PDGF）-BB诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移及磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶/糖元合成酶激酶3β/β-连环蛋白（PI3K/AKT/GSK-3β/β-catenin）信号通路的影响。方法:利用重组鼠PDGF-BB体外刺激大鼠胸大动脉平滑肌细胞A7R5诱导增殖、迁移模型,分为6组：对照组、PDGF-BB组、低剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组、高剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组、PI3K激活剂+PDGF-BB组、PI3K激活剂+高剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组,CCK-8法检测A7R5细胞增殖活力;流式细胞术检测A7R5细胞周期;细胞划痕实验检测A7R5细胞迁移情况;免疫印迹检测A7R5细胞增殖、迁移相关蛋白及PI3K/AKT/GSK-3β/β-catenin信号通路相关蛋白。结果:与对照组比较,PDGF-BB组A7R5细胞增殖率、迁移面积、S期比例,PCNA、cyclin D1、MMP9蛋白及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-GSK-3β/GSK-3β、胞核β-catenin/总β-catenin蛋白比值显著增加,G0/G1期比例、E-cadherin蛋白显著减少（P＜0.05）;与PDGF-BB组比较,低、高剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组A7R5细胞增殖率、迁移面积、S期比例,PCNA、cyclin D1、MMP9蛋白及p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-GSK-3β/GSK-3β、胞核β-catenin/总β-catenin蛋白比值显著减少,G0/G1期比例、E-cadherin蛋白显著增加,且高剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组优于低剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组（P＜0.05）;与高剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组比较,PI3K激活剂+高剂量血府逐瘀合剂+PDGF-BB组A7R5细胞增殖率、迁移面积、S期比例,PCNA、cyclin D1、MMP9蛋白,p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-GSK-3β/GSK-3β、胞核β-catenin/总β-catenin蛋白比值显著增加,G0/G1期比例、E-cadherin蛋白显著减少（P＜0.05）。结论:血府逐瘀合剂可抑制PDGF-BB诱导的血管平滑肌细胞增殖、迁移,可能通过抑制PI3K/AKT/GSK-3β/β-catenin信号通路而实现。     

PTEN/mTOR通路在高糖诱导的人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo凋亡中的作用机制探讨 #br#

目的 探讨高糖诱导人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/SVneo凋亡的相关机制。方法 体外培养人绒毛膜滋 养层细胞HTR-8/SVneo,分为空白对照组、高糖组、NC组（阴性对照组）、第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同 源物基因（PTEN）-siRNA 组（抑制 PTEN 表达组）及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路抑制剂（GDC-0349）组。 四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测HTR-8/SVneo细胞增殖能力;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法检测凋 亡相关蛋白及PTEN/mTOR通路相关蛋白表达情况。结果 与空白对照组比较,高糖组HTR-8/SVneo细胞增殖抑制 率、凋亡率及Bcl-2相关X蛋白（Bax）、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cleaved caspase-3）、PTEN蛋白表 达水平均显著升高（P＜0.05）,B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、磷酸化磷脂酰肌醇-3激酶（p-PI3K）/PI3K、磷酸化蛋白激酶B （p-AKT）/AKT、磷酸化 mTOR（p-mTOR）/mTOR 蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）;与高糖组、NC 组比较,PTENsiRNA组HTR-8/SVneo细胞增殖抑制率、凋亡率及Bax、cleaved caspase-3、PTEN蛋白表达水平均显著降低,Bcl-2、pPI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR 蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）;与 PTEN-siRNA 组比较,GDC-0349 组 HTR-8/SVneo细胞增殖抑制率、凋亡率及Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平均显著升高,Bcl-2、p-PI3K/PI3K、pAKT/AKT、p-mTOR/mTOR 蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）。结论 高糖可抑制人绒毛膜滋养层细胞 HTR-8/ SVneo增殖能力,诱导其凋亡,可能是通过上调PTEN表达、抑制PI3K/AKT/mTOR通路活化实现的。     

黑骨藤追风活络胶囊对类风湿关节炎大鼠PI3K/AKT/HIF-1α轴的影响

目的探讨黑骨藤追风活络胶囊对类风湿关节炎大鼠PI3K/AKT/HIF-1α轴的影响。方法本次试验选取雄性SD大鼠若干只,并随机分为空白组和造模组,其中造模成功的SD大鼠为造模组,将该组实验对象分为模型组、黑骨藤追风活络胶囊组以及黑骨藤追风活络胶囊联合PI3K抑制剂给药组,每组SD大鼠有8只。空白组大鼠按照其身体重量每日灌胃生理盐水,模型组、胶囊组、联合给药组每日灌胃给药羧甲基纤维素钠配制的混悬液,持续5周。对比对类风湿关节炎大鼠PI3K/AKT/HIF-1α轴的影响。结果治疗后1、2、3、4、5周,黑骨藤追风活络胶囊组、黑骨藤追风活络胶囊联合PI3K抑制剂给药组的足踢趾肿胀程度均低于本组治疗前,且均低于模型组,差异均具有统计学意义(P<0.05),但仍不及空白组。模型组大鼠的脾脏Caspase-1、Caspase-3、Cytochrome-C蛋白表达分别为(0.365±0.108)、(0.226±0.085)、(0.157±0.035)显著高于空白组的(0.049±0.032)、(0.029±0.033)、(0.079±0.054),差异具有统计学意义(P<0.05)。但是黑骨藤追风活络胶囊组和黑骨藤追风活络胶囊联合PI3K抑制剂给药组大鼠的脾脏Caspase-1、Caspase-3、Cytochrome-C蛋白表达低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05)。模型组大鼠的滑膜组织p-PI3K、p-AKT、HIF-1α、Bax、Bcl-2蛋白表达显著高于空白组,差异具有统计学意义(P<0.05)。黑骨藤追风活络胶囊组及黑骨藤追风活络胶囊联合PI3K抑制剂给药组大鼠的滑膜组织p-PI3K、p-AKT、HIF-1α、Bcl-2蛋白表达明显低于模型组,而Bax蛋白表达明显高于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论黑骨藤追风活络胶囊对类风湿关节炎中PI3K/AKT/HIF-1α信号通路的表达,引发多种细胞和蛋白调节。     

血管内皮生长因子反义寡核苷核对前列腺癌细胞PC3生长特性的影响

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷核对前列腺癌细胞PC3生长特性的影响。方法采用新型脂质体Oligofectamine携带VEGF反义寡核苷酸转染激素非依赖性前列腺癌细胞PC3,实验分为对照组、反义寡核苷核苷酸组和正义寡核苷酸组。Western Blot杂交的方法检测细胞VEGF蛋白的表达,四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测细胞增殖变化,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果新型脂质体可以携带VEGF反义寡核苷酸转染前列腺癌细胞PC3,与对照组和正义寡核苷酸组比较,反义寡核苷酸组细胞VEGF蛋白的表达明显下降,增殖受到明显抑制,凋亡率增加。结论新型脂质体Oligofectamine可以携带VEGF反义寡核苷酸成功转染前列腺癌细胞PC3,抑制VEGF的表达,进而抑制肿瘤细胞的增殖,促进其凋亡。     

低频超声联合微泡对比剂通过PI3K/AKT通路对乳腺癌耐药株MCF-7/ADR多药耐药的逆转机制研究

目的 探索低频超声联合微泡（LFUSMB）通过磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）通路对乳腺癌 耐药株MCF-7/阿霉素（ADR）多药耐药的逆转效果及机制。方法 CCK-8法筛选LFUSMB作用时间并测定ADR对 MCF-7/ADR 细胞的半抑制浓度（IC50）。将 MCF-7/ADR 细胞分组为：对照（C）组,采用 MCF 细胞培养基正常培养; ADR组,采用加入ADR（终质量浓度20 mg/L）的MCF细胞培养基培养;LFUSMB+ADR组,采用加入ADR（终质量浓度 20 mg/L）的MCF细胞培养基培养并经LFUSMB处理30 s;LFUSMB+ADR+740 YP（PI3K/AKT通路活化剂）组,采用加 入 ADR（终质量浓度 20 mg/L）和 740 YP（终质量浓度 50 mg/L）的 MCF 细胞培养基培养并经 LFUSMB 处理 30 s。 Annexin V-FIFC/PI 法检测 MCF-7/ADR 细胞凋亡率,Western blot 检测 P 糖蛋白（P-gp）、抗多药耐药蛋白（MRP）1、 MRP2、乳腺癌抗性蛋白（BCRP/ABCG2）、PI3K、AKT、p-PI3K、p-AKT蛋白表达。结果 采用LFUSMB干预30 s进行 后续研究。LFUSMB 30 s组ADR对MCF/ADR细胞的IC50低于未超声处理组,相对耐药逆转倍数约为8.20倍。ADR 组细胞凋亡率较C组增高（P＜0.05）,MRP1、MRP2、P-gp、BCRP/ABCG2、p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT 蛋白水平无明 显变化;LFUSMB+ADR组细胞凋亡率较ADR组增高,MRP1、MRP2、P-gp、BCRP/ABCG2、p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT 蛋白水平显著下调（P＜0.05）。与 LFUSMB+ADR 组比较,LFUSMB+ADR+740 YP 组细胞凋亡率显著降低,MRP1、 MRP2、P-gp、BCRP/ABCG2 蛋白水平显著增高（P＜0.05）。结论 LFUSMB 可通过抑制 PI3K/AKT 通路活化,下调 MRP1等腺苷三磷酸结合盒（ABC）家族蛋白表达,逆转乳腺癌MCF-7/ADR细胞耐药性。     

小檗碱通过调控PI3K/Akt通路抑制喉癌细胞生长和转移

目的探讨小檗碱对喉癌Hep2细胞增殖、凋亡和侵袭的影响以及相关作用机制。方法培养Hep2细胞分为空白对照组和5、10、20μmol·L-1小檗碱组,CCK-8检测Hep2的增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,划痕实验检测细胞迁移情况,Transwell法检测细胞侵袭能力,Western blot法检测凋亡蛋白酶激活因子1(Apaf1)、剪切后半胱天冬酶(cl-caspase)-9、cl-caspase-3蛋白、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和p-p65蛋白表达水平。结果与空白对照组相比,5、10、20μmol·L-1小檗碱组细胞增殖活性显著降低(P <0.01);凋亡细胞百分比显著增加(P <0.01),Apaf1、cl-caspase-9和cl-caspase-3蛋白水平显著上调(P <0.01);划痕愈合率显著降低(P <0.01),侵袭细胞数目显著减少(P <0.01);细胞中VEGF、MMP-2、MMP-9、PI3K、p-Akt、p-p65蛋白水平显著降低(P <0.01),且均呈浓度依赖性。结论小檗碱通过调控PI3K/Akt通路抑制喉癌细胞增殖、侵袭和迁移,诱导细胞凋亡。     

智脑胶囊调控PI3K/AKT/GSK-3β信号通路诱导阿尔茨海默病模型细胞增殖的研究

目的:探讨智脑胶囊(Zhinao Capsule,ZNC)对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)体外细胞模型增殖的影响及其作用机制。方法:采用全反式维甲酸(all trans retinoic acid,ATRA)+冈田酸(okadaic acid,OA)刺激人神经母细胞瘤细胞(human neuroblastoma cell,SK-N-SH)建立AD体外模型,CCK8法筛选ZNC含药血清最佳作用浓度和时间;流式细胞术、RT-qPCR和Western blot法检测最佳浓度ZNC含药血清作用最佳时间后,对SK-N-SH细胞周期、凋亡及PI3K、AKT、GSK-3β mRNA、总蛋白和磷酸化蛋白表达的影响。结果:ATRA＋OA刺激后,SK-N-SH细胞活力降低,细胞凋亡增加,p-PI3K、p-AKT和p-GSK-3β蛋白表达显著降低,GSK-3β mRNA和总蛋白表达明显升高;给予ZNC干预后,不仅可明显促进SK-N-SH细胞增殖,抑制其凋亡,还可显著升高p-PI3K、p-AKT和p-GSK-3β蛋白表达,降低GSK-3β mRNA和总蛋白表达。结论:智脑胶囊可促进AD模型细胞增殖,其机制可能与调控PI3K/AKT/GSK-3β信号通路有关。     

TP53基因沉默介导PI3K/PTEN/AKT信号通路对肾透明细胞癌侵袭转移的调控机制

目的探讨肿瘤蛋白p53基因(TP53)沉默介导PI3K/PTEN/AKT信号通路对肾透明细胞癌侵袭转移的调控机制。方法取60例肾透明细胞癌组织标本,免疫组化分析TP53蛋白在肾透明细胞癌组织中的表达;取人肾透明细胞癌细胞株RLC-310进行细胞培养;细胞转染表达载体分为空白组(A组)、阴性对照组(B组)、sh TP53组(C组)、PTEN抑制剂bpv组(D组)、phen+sh TP53组(E组)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western Blot检测各组细胞TP53、同源性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、AKT的m RNA和蛋白表达水平;CCK-8法检测各组细胞增殖能力;划痕愈合试验检测各组细胞的迁移能力;Transwell侵袭试验检测各组细胞的侵袭能力。结果TP53蛋白在肾透明细胞癌组织中高表达(P<0.05);与A组和B组相比,C组的TP53,PI3K,AKT m RNA和蛋白表达水平显著下降,PTEN m RNA和蛋白表达水平均显著上升,且细胞增殖能力、迁移率、侵袭率均显著下降(P<0.05);D组TP53,PI3K,AKT m RNA和蛋白表达水平显著上升,PTEN m RNA和蛋白表达水平显著下降,且细胞增殖能力、迁移率、侵袭率均显著上升(P<0.05);同时,E组TP53下降(P<0.05),而其他指标与A组和B组相当(P>0.05)。结论沉默TP53基因抑制PI3K/PTEN/AKT信号通路,从而抑制肾透明细胞癌细胞浸润转移功能,并可逆转phen诱导的肾透明细胞癌细胞浸润转移。     

白杨素通过PI3K/AKT信号通路抑制LPS诱导的软骨细胞自噬

目的探索白杨素对脂多糖诱导的大鼠软骨细胞骨关节炎模型中对软骨细胞自噬的作用及其机制。方法提取10只SPF级SD大鼠关节软骨正常细胞进行体外分离培养,通过LPS诱导大鼠软骨细胞自噬。实验分为空白对照组、LPS组、白杨素(CHR)组和LPS+CHR组;CCK-8法检测各分组细胞的活性、Rhodamine123检测各组细胞中线粒体膜电位、DCFH-DA检测各组细胞的活性氧,Western blot法检测各组细胞中PI3K、AKT、p-PI3K、p-AKT、Beclin-1及LC3Ⅱ的蛋白表达。结果白杨素对LPS诱导的软骨细胞自噬具有抑制作用,且当白杨素浓度为10 mmol·L^-1时抑制自噬作用最为显著;白杨素能够抑制LPS所致LPS诱导的软骨细胞的活性氧(ROS)的增加;白杨素抑制了细胞受损后线粒体膜电位的降低;同时白杨素抑制Beclin-1、LC3Ⅱ蛋白的表达,抑制PI3K和AKT的磷酸化。结论白杨素可能通过抑制PI3K/AKT信号通路,下调自噬蛋白Beclin-1和LC3Ⅱ的表达抑制自噬,进而保护软骨细胞。     

吲哚-3-原醇对人肺癌细胞株A549的促凋亡和增殖抑制作用

目的探讨吲哚-3-原醇(Indol-3-carbinol,I3C)对肺腺癌细胞株A549细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法将对数生长期的A549细胞分别用不同浓度的I3C处理(0、25、50、100μg/m L)。细胞培养72 h后,采用M TT观察I3C对A549细胞的增殖抑制作用;Annexin V-PI/FITC检测细胞凋亡;Western blotting检测细胞中PI3K、p-AKT、Bax、Bcl-2、Cleavage-PARP、Clevage-Caspase3蛋白的变化。结果 I3C可以呈浓度依赖性地诱导A549细胞的增殖抑制和凋亡,上调Bax和Cleavage-PARP、Cleavage-Caspase3表达,下调PI3K、p-AKT和Bcl-2,对AKT表达无明显影响。结论 I3C可通过抑制PI3K/AKT信号通路而诱导A549细胞增殖抑制和凋亡。     

姜黄素与卡铂联合用药对鼠卵巢癌转基因细胞系的影响

目的探讨姜黄素与卡铂联合用药对鼠卵巢癌转基因细胞系T1、T2、T3的影响。方法采用MTT法检测卡铂、姜黄素单独及联合用药对鼠卵巢癌转基因细胞系增殖的影响,RT-PCR及Western blot检测各组细胞中K-RAS、PI3K、AKT的表达水平。结果通过MTT法检测细胞增殖抑制率,各浓度卡铂单独作用于鼠卵巢癌转基因细胞系T1、T2、T3的增殖抑制率<30%,与姜黄素联用后,增殖抑制率均>30%(P<0.05),对转染了AKT的T2、T3作用更明显。联合组T1、T2、T3细胞的K-RAS、PI3K(p-PI3K)、AKT(p-AKT)的mRNA及蛋白表达量低于卡铂单用组。结论鼠卵巢癌转基因细胞系T1、T2、T3对卡铂具有耐药性。姜黄素可逆转其对卡铂的耐药性,且对含有AKT的T2、T3作用更加明显。姜黄素的逆转作用可能与抑制K-RAS、PI3K、AKT的表达有关,其也可能直接抑制PI3K/AKT信号通路。