miR-130b-3p靶向肝细胞生长因子调控妊娠滋养层细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的研究miR-130b-3p靶向肝细胞生长因子(HGF)调控妊娠滋养层细胞增殖、迁移、侵袭的分子机制。方法以实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测正常妊娠妇女胎盘组织和妊娠期子痫前期患者胎盘组织中miR-130b-3p的表达。分别建立抑制miR-130b-3p表达和过表达HGF的JEG-3细胞株,用噻唑蓝法检测细胞活力;用Transwell法检测细胞的迁移及侵袭能力;以蛋白质印迹法检测HGF蛋白的表达,用双荧光素酶报告基因实验验证miR-130b-3p对HGF的靶向作用。结果与正常妊娠妇女胎盘组织(0.29±0.01)相比,妊娠期子痫前期患者胎盘组织(0.60±0.03)中miR-130b-3p的表达显著升高(P<0.05)。anti-miR-NC组和anti-miR-130b-3p组滋养层细胞JEG-3的迁移数分别为85.67±8.67,130.67±12.67,侵袭细胞数分别为74.33±4.66,115.67±12.67,差异有统计学意义(P<0.05)。pcDNA3.1组和pcDNA3.1-HGF组迁移数分别为81.50±12.50,116.00±18.00,侵袭数分别为75.00±8.00,94.50±12.50,差异均有统计学意义(均P<0.05)。anti-miR-130b-3p+si-NC组和anti-miR-130b-3p+si-HGF组迁移细胞数分别为131.67±10.67,108.00±6.00,侵袭细胞数分别为117.30±18.67,96.33±8.67,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论miR-130b-3p通过靶向下调HGF可抑制妊娠滋养层细胞的增殖、迁移和侵袭。     

微小 RNA-203a-3p下调 Mink相关肽 1基因表达抑制非小细胞肺癌细胞转移潜能的实验研究

目的 探讨微小RNA-203a-3p(miR-203a-3p)对非小细胞肺癌恶性生物学行为的影响及机制.方法 本研究于2018年7月至2019年6月进行,正常肺上皮细胞BEAS-2B以及肺癌细胞H1299、SPC-A-1、NC-H446购自中国科学院上海细胞库;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-203a-3p和Mink相关肽1(KCNE2)mRNA表达水平;蛋白质印迹法检测KCNE2蛋白表达;将SPC-A-1细胞分为miR-203a-3p(转染miR-203a-3p模拟物)组、miR-con组(转染miR-203a-3p模拟物阴性对照)、si-KCNE2组(转染KCNE2干扰表达载体)、si-con组(转染KCNE2干扰表达载体阴性对照)、miR-203a-3p+pcDNA组(转染miR-203a-3p模拟物和KCNE2过表达载体阴性对照)、miR-203a-3p+pcDNA-KCNE2组(转染miR-203a-3p模拟物和KCNE2过表达载体);四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)法检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期素依赖蛋白激酶6(CDK6)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测miR-203a-3p和KCNE2的靶向关系.结果 与BEAS-2B细胞相比,肺癌细胞H1299、SPC-A-1、NC-H446中miR-203a-3p表达水平显著降低[(0.27±0.05)、(0.18±0.07)、(0.25±0.04)比(1.00±0.24)],KCNE2 mRNA表达水平显著升高[(4.37±0.43)、(5.24±0.34)、(6.39±0.35)比(1.00±0.08)],KCNE2蛋白表达水平显著升高[(0.73±0.07)、(0.75±0.06)、(0.59±0.05)比(0.38±0.04)](P<0.05).与miR-NC组相比,miR-203a-3p组SPC-A-1细胞活性降低[48 h为(0.42±0.05)比(0.55±0.05),72 h为(0.63±0.07)比(0.84±0.09)],迁移细胞数减少[(79.90±5.21)个比(172.13±8.57)个],侵袭细胞数减少[(45.89±3.50)个比(101.83±9.55)个];Cyclin D1、CDK6、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平降低(P<0.05).与si-NC组相比,si-KCNE2组SPC-A-1细胞活性降低[48 h为(0.44±0.05)比(0.58±0.05),72 h为(0.63±0.08)比(0.94±0.09)],迁移细胞数减少[(71.71±4.52)个比(174.56±13.67)个],侵袭细胞数减少[(35.68±3.27)个比(81.37±5.46)个];Cyclin D1、CDK6、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平降低(P<0.05).miR-203a-3p靶向调控KCNE2的表达;KCNE2过表达部分逆转miR-203a-3p对肺癌细胞SPC-A-1的作用.结论 miR-203a-3p可通过下调KCNE2抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭.     

微 RNA-130a靶向人类 RUNT相关转录因子 3对肺癌 A549细胞增殖和转移的影响

目的 探讨微RNA(miR)-130a与人类RUNT相关转录因子3(RUNX3)的靶向关系及其对非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质转化的影响.方法 将体外培养的A549细胞分为对照组(未处理)、anti-miR-NC组(转染miR-130a inhibi?tor阴性对照)、anti-miR-130a组(转染miR-130a inhibitor)、anti-miR-130a+siNC组(转染miR-130a inhibitor和NC-siRNA)和anti-miR-130a+siRUNX3组(转染miR-130a inhibitor和RUNX3-siRNA),采用实时定量PCR检测各组细胞中miR-130a和RUNX3mRNA的表达水平,蛋白质印迹法(Western Blot)检测各组细胞中RUNX3蛋白和上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达水平,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测各组细胞增殖能力,克隆形成实验检测各组细胞的克隆形成能力,Transwell小室实验检测各组细胞侵袭与迁移能力,荧光素酶实验检测miR-130a和RUNX3的靶向关系.结果 荧光素酶实验证实,RUNX3是miR-130a的潜在靶基因.与anti-miR-NC组相比,下调miR-130a可抑制A549细胞增殖[(94.72±6.05)％比(51.28±3.24)％]、克隆[(36.15±2.06)％比(15.46±1.25)％]、侵袭[(90.25±5.48)个比(42.18±3.26)个]、迁移[(118.55±9.86)个比(73.48±6.75)个](P<0.05),促进E-cadherin蛋白表达[(0.26±0.03)比(0.48±0.04)](P<0.05),而抑制N-cadherin、Vimentin蛋白表达[(0.52±0.03)比(0.25±0.02);(0.68±0.05)比(0.35±0.03)](P<0.05);与anti-miR-130a+siNC组相比,共转染anti-miR-130a与siRUNX3可成功增强A549细胞增殖[(52.16±3.12)％比(72.23±6.13)％]、克隆[(16.08±1.05)％比(22.12±1.34)％]、侵袭[(41.59±3.02)个比(68.32±4.26)个]、迁移能力[(72.26±5.18)个比(98.25±6.02)个](P<0.05),抑制E-cad?herin蛋白表达[(0.52±0.04)比(0.33±0.03)](P<0.05),而促进N-cadherin、Vimentin蛋白表达[(0.27±0.03)比(0.46±0.03);(0.33±0.02)比(0.53±0.04)](P<0.05).结论 miR-130a可通过靶向RUNX3抑制A549细胞增殖、侵袭、迁移和上皮间质转移.     

长链非编码 RNA SNHG16靶向微小 RNA-7-5p对喉癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA SNHG16对喉癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其作用机制.方法 选取2016年10月至2018年12月重庆医科大学附属第三医院收治的25例喉癌病人,于术中切取喉癌组织及其相应癌旁组织并冻存.体外培养喉癌Hep-2细胞,Hep-2细胞,按照随机数字表法分为si-NC组(转染无意义干扰序列si-NC)、si-SNHG16组(转染si-SNHG16)、si-SNHG16+anti-miR-NC组(共转染si-SNHG16与anti-miR-NC)、si-SNHG16+anti-miR-7-5p组(共转染si-SNHG16与anti-miR-7-5p).采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测喉癌及其癌旁组织中SNHG16、微小RNA-7-5p(miR-7-5p)的表达.采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)、Transwell实验检测抑制SNHG16表达后Hep-2细胞的增殖、迁移及侵袭能力的变化.生物信息学预测SNHG16的靶标miRNA,双荧光素酶报告实验验证SNHG16与miR-7-5p的靶向作用.抑制miR-7-5p表达验证SNHG16对Hep-2细胞增殖、迁移、侵袭的作用.结果 喉癌组织中SNHG16的表达水平较癌旁组织升高(P<0.05),miR-7-5p的表达水平明显降低(P<0.05);与si-NC组相比,si-SNHG16组抑制SNHG16的表达后可明显抑制Hep-2细胞的增殖能力[48 h:(0.95±0.09)比(0.47±0.05),P<0.05],迁移[(124±12)比(51±5),P<0.05]及侵袭细胞数[(115±11)比(43±4),P<0.05]减少;SNHG16可靶向结合miR-7-5p;抑制miR-7-5p可逆转抑制SNHG16对Hep-2细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用.结论 抑制SN-HG16表达可负性调控miR-7-5p的表达而减弱喉癌细胞增殖、迁移及侵袭能力.     

lncRNA LINC00858靶向微小 RNA-363-3p促进肝癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨LINC00858通过靶向miR-363-3p对肝癌HCCLM3细胞生物学行为的影响.方法 选取2017年1月至2019年1月青海省第五人民医院收治的肝癌病人30例,获取其肝癌组织及其癌旁组织.设置si-NC组、si-LINC00858组、si-LINC00858+anti-miR-NC组和si-LINC00858+anti-miR-363-3p组.实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测LINC00858和miR-363-3p表达水平;双荧光素酶报告实验验证LINC00858和miR-363-3p的靶向关系;CCK-8检测细胞增殖活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;蛋白质印迹法(Western blotting)法检测相关蛋白表达.结果 肝癌组织中LINC00858高表达(2.85±0.27),miR-363-3p低表达(0.58±0.05).LINC00858靶向调控miR-363-3p;抑制LINC00858能够上调p21表达,下调细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达,降低细胞活力、迁移数、侵袭数(P<0.05).干扰miR-363-3p表达逆转了抑制LINC00858表达对肝癌HCCLM3细胞增殖、迁移和侵袭的影响.结论 抑制LINC00858通过靶向上调miR-363-3p抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭.     

miR-891a-5p通过CPEB1调控结肠癌细胞生物过程的机制研究

目的 探讨miR-891a-5p通过细胞质多聚腺苷酸化元件结合蛋白1(CPEB1)调控结肠癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的机制。方法 运用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（qPCR）检测结肠癌组织、癌旁组织、人正常结肠上皮细胞和人结肠癌细胞中miR-891a-5p的表达;将LOVO细胞分为A组（不做任何处理）、B组（转染anti-miRcon）、C组（转染anti-miR-891a-5p）、D组（共转染anti-miR-891a-5p和si-con）、E组（共转染anti-miR-891a-5p和siCPEB1）、F组（转染miR-con）、G组（转染miR-891a-5p）;CCK-8法检测细胞增殖率、Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡率;蛋白免疫印迹实验检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、胱天蛋白酶-3酶原（Pro-caspase-3）、裂解的胱天蛋白酶-3(C-caspase-3)、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、上皮细胞钙黏蛋白（E-cadherin）和波形蛋白（Vimentin）的蛋白表达;Transwell实验检测细胞迁移、侵袭;双荧光素酶报告基因检...     

舒芬太尼通过miR-365-3p/AKT1抑制胃癌细胞迁移、侵袭的研究

摘要：目的:探讨舒芬太尼对微小RNA-365-3p（miR-365-3p）/蛋白激酶B-α（AKT1）表达及其对胃癌细胞迁移、侵袭的影响。方法:采用不同浓度的舒芬太尼(终浓度0.5,5,50,500 nmol·L-1)分别处理胃癌细胞48 h,Transwell实验检测胃癌细胞迁移及侵袭能力,实时定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测胃癌细胞中miR-365-3p的表达。分别将miR-NC（miR-NC组）、miR-365-3p mimics（miR-365-3p组）、anti-miR-NC（anti-miR-NC组）、anti-miR-365-3p（anti-miR-365-3p组）转染至胃癌细胞,检测胃癌细胞迁移及侵袭能力变化。靶基因网站预测miR-365-3p的靶基因,双荧光素酶报告基因验证miR-365-3p与AKT1的靶基因关系。将anti-miR-365-3p、pcDNA-AKT1及其阴性对照分别转染至胃癌细胞12 h后用舒芬太尼处理48 h,分别为舒芬太尼+anti-miR-NC组、舒芬太尼+anti-miR-365-3p组、舒芬太尼+pcDNA3.1组、舒芬太尼+pcDNA-AKT1组,检测各组胃癌细胞迁移及侵袭能力变化,蛋白免疫印迹（Western Blot）检测细胞中钙黏附蛋白E（E-cadherin）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、p-AKT1蛋白表达。结果:舒芬太尼可抑制胃癌细胞迁移、侵袭及MMP-2表达,促进miR-365-3p、E-cadherin表达;miR-365-3p过表达可通过上调E-cadherin表达及下调MMP-2的表达进而抑制胃癌细胞迁移及侵袭能力;双荧光素酶报告基因实验证明AKT1是miR-365-3p的靶基因,miR-365-3p可负性调控靶基因AKT1的表达;抑制miR-365-3p表达或AKT1过表达可逆转舒芬太尼对胃癌细胞迁移、侵袭的抑制作用。结论:舒芬太尼可通过上调miR-365-3p表达而抑制AKT1表达进而抑制胃癌细胞迁移及侵袭。     

微小 RNA-744-5p靶向整合素连接激酶对膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的 探讨微小RNA-744-5p(miR-744-5p)对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制.方法 选取2016年2月至2018年11月枣庄矿业集团枣庄医院接收的经病理确诊的56例膀胱癌病人病理组织切片,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测56例膀胱癌组织和对应癌旁组织中miR-744-5p表达水平.分别转染miR-744-5p模拟物(mimics)、miR-744-5p抑制剂或共转染miR-744-5p mimics与整合素连接激酶(ILK)过表达载体至膀胱癌BIU-87、T739细胞,MTT检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,蛋白质印迹法(Western Blotting)检测过细胞中细胞周期蛋白(Cyclin D1)、P21、基质金属蛋白酶(MMP-2)和钙黏附蛋白E(E-cadherin)蛋白表达.双荧光素酶报告基因实验验证miR-744-5p与ILK调控关系.结果 与癌旁组织相比,膀胱癌组织中miR-744-5p表达水平显著降低[(0.98±0.10)比(0.25±0.02),P<0.05].过表达miR-744-5p后,BIU-87和T739细胞OD值、迁移数和侵袭数及Cyclin D1和MMP-2蛋白表达降低(P<0.05),而P21和E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05).抑制miR-744-5p后,BIU-87和T739细胞OD值、迁移数和侵袭数升高(P<0.05).miR-744-5p靶向结合并负调控ILK,过表达ILK逆转过表达miR-744-5p对BIU-87和T739细胞增殖、迁移和侵袭的影响.结论 膀胱癌组织中miR-744-5p呈低表达,过表达miR-744-5p可阻碍膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭,而抑制miR-744-5p则起相反的作用,其可能通过靶向负调控ILK表达发挥作用.     

微小 RNA-218-5p靶向 Jagged 1调控人牙周膜干细胞的活性和骨向分化

目的 研究微小RNA-218-5p(miR-218-5p)对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)活性和骨向分化的影响并探讨其机制,为牙周炎的治疗提供研究基础.方法 将anti-miR-218-5p组(转染anti-miR-218-5p)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-JAG1组(转染pcDNA-JAG1)、anti-miR-218-5p+si-NC组(共转染anti-miR-218-5p和si-NC)、anti-miR-218-5p+si-JAG1组(共转染anti-miR-218-5p和si-JAG1),用脂质体法转染至hPDLSCs细胞;运用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测细胞中miR-218-5p、Ⅰ型胶原蛋白(Col-1)、骨钙素、Runt相关转录因子2(Runx2)的表达;蛋白质印迹法(Westrn blotting)检测细胞中Jagged 1(JAG1)的蛋白表达;MTT法检测细胞活性;茜素红染色实验检测细胞的矿化结节;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性.结果 与anti-miR-NC组相比,anti-miR-218-5p组hPDLSCs细胞培养48、72 h时,细胞活性升高[48 h:(0.44±0.04)比(0.62±0.06);72 h:(0.53±0.05)比(0.83±0.08);P<0.001],细胞的矿化结节明显升高,Col-1[(0.26±0.03)比(0.74±0.07)]、骨钙素[(0.21±0.02)比(0.54±0.05)]、Runx-2[(0.29±0.03)比(0.61±0.06)]蛋白相对表达量均显著升高(均P<0.001).与pcDNA组相比,pcDNA-JAG1组hPDLSCs细胞培养48、72 h时,细胞活性显著升高[48 h:(0.42±0.04)比(0.59±0.05);72 h:(0.55±0.05)比(0.81±0.08);P<0.001],Col-1[(0.34±0.03)比(0.71±0.07)]、骨钙素[(0.23±0.02)比(0.48±0.04)]、Runx-2[(0.25±0.03)比(0.56±0.05)]蛋白表达量均显著升高(均P<0.001).miR-218-5p可靶向调控JAG1的表达.抑制JAG1可逆转抑制miR-218-5p对hPDLSCs的活性和骨向分化作用.结论 抑制miR-218-5p可促进人牙周膜干细胞活性和骨向分化,其机制与靶向JAG1有关.     

长链基因间非编码 RNA 00963通过靶向微小 RNA-148b-3p对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的 探讨长链基因间非编码RNA00963(LINC00963)对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响及作用机制.方法 本研究于2018年8月至2019年5月进行;正常结直黏膜上皮细胞NCM460以及结直肠癌细胞系HT29、SW480、SW1116购自中国科学院上海细胞库,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测微小RNA-148b-3p(miR-148b-3p)和LINC00963的表达水平;双荧光素酶报告实验检测miR-148b-3p和LINC00963的靶向关系.将HT29细胞分为miR-NC组、miR-148b-3p组、si-NC组、si-LINC00963组、si-LINC00963+anti-miR-NC组、si-LINC00963+anti-miR-148b-3p组;蛋白质印迹法(Western Blotting)检测蛋白表达;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;Transwell检测各组细胞迁移和侵袭.结果 与NCM460细胞相比,HT29、SW480、SW1116细胞中miR-148b-3p的表达水平显著降低[(0.32±0.04)、(0.48±0.04)、(0.39±0.04)比(1.03±0.09)],LINC00963的表达水平显著升高[(3.13±0.31)、(2.76±0.27)、(2.91±0.28)比(1.00±0.09)],差异有统计学意义(P<0.05).LINC00963靶向调控miR-148b-3p的表达.干扰LINC00963后,细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达水平降低,细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)表达水平升高,HT29细胞活性[48 h为(0.43±0.04)比(0.65±0.06),72 h为(0.56±0.05)比(1.05±0.09)]降低,及迁移数量减少[(39.65±3.42)个比(81.24±8.06)个],侵袭数量减少[(32.14±3.28)个比(69.54±6.27)个],差异有统计学意义(P<0.05).过表达miR-148b-3p后,Cyclin D1、MMP-2、MMP-9表达水平降低,p21表达水平升高,HT29细胞活性[48 h为(0.49±0.04)比(0.67±0.06),72 h为(0.62±0.06)比(1.06±0.09)]降低,及迁移数量减少[(45.32±4.28)个比(86.27±8.25)个],侵袭数量减少[(39.54±4.03)个比(73.65±7.24)个],差异有统计学意义(P<0.05).抑制miR-148b-3p表达可逆转干扰LINC00963对HT29细胞的作用.结论 干扰LINC00963可通过上调miR-148b-3p抑制结直肠癌HT29细胞的增殖、迁移和侵袭.     

微RNA-132-3p靶向第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物调控葡萄膜黑色素瘤细胞增殖与凋亡

目的 研究微RNA(miR)-132-3p在葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡中的作用及其作用机制。方法 该研究起止时间为2018年2月至2019年7月。定量聚合酶链反应（qPCR）检测正常葡萄膜上皮细胞ARPE-19和葡萄膜黑色素瘤细胞SP6.5、M23中miR-132-3p表达。SP6.5细胞中转染miR-132-3p干扰质粒（anti-miR-132-3p）、第10号染色体上缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物（PTEN）过表达质粒（pcDNA3.1-PTEN）或共转染anti-miR-132-3p和PTEN干扰质粒（si-PTEN）,MTT法和流式细胞术分别检测细胞增殖与凋亡,蛋白质印迹法检测PTEN、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、周期素依赖激酶抑制剂p21(P21)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达,生物信息学预测结合双萤光素酶报告实验分析miR-132-3p与PTEN的靶向关系。结果 与ARPE-19细胞相比,SP6.5、M23细胞中miR-132-3p表达量（0.26±0.02比0.94±0.09、0.81±0.08）明显升高（P<...     

微小RNA-152-3p 对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制研究

目的探讨微小RNA(miR)-152-3p对结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法2019年2月至2020年4月,将结肠癌SW480细胞分为miR-152-3p模拟物阴性对照(miR-NC)组、miR-152-3p模拟物(miR-152-3p)组、抑制物(anti-miRNC)组、miR-152-3p抑制物(anti-miR-152-3p)组、阴性对照(si-NC)组、沉默转移相关蛋白2(si-MTA2)组、miR-152-3p模拟物+空载体(miR-152-3p+pcDNA3.1)组、miR-152-3p模拟物+过表达MTA2(miR-152-3p+pcDNA3.1-MTA2)组,均用脂质体法转染至结直肠癌SW480细胞中,另取未转染结直肠癌SW480细胞记为Control组。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-152-3p和MTA2 mRNA的表达水平;蛋白质印迹法测定蛋白的表达;MTT法检测细胞活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果结肠癌HCT116、SW480及LoVo细胞中miR-152-3p表达分别为0.72±0.04、0.29±0.02、0.49±0.01,人正常结肠上皮细胞NCM460中miR-152-3p表达为1.06±0.12,与正常结肠上皮细胞NCM460相比,结肠癌细胞HCT116、LoVo、SW480中MTA2 mRNA和蛋白较高,miR-152-3p较低(P<0.05);Control组、miR-NC组、miR-152-3p组、si-NC组及si-MTA2组结肠癌SW480细胞吸光度分别为0.92±0.22、0.96±0.17、0.31±0.07、0.99±0.17及0.32±0.09,细胞迁移数分别为(172.00±23.52)个、(169.00±20.66)个、(53.67±12.22)个、(155.67±16.8)个及(54.33±8.74)个,细胞侵袭数分别为(124.67±10.02)个、(122.33±9.45)个、(26.00±5.00)个、(108.33±10.02)个及(42.00±4.00)个,与miR-NC 组相比,miR-152-3p 组SW480细胞中细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、基质金属蛋白酶(MMP)-2及SW480细胞活性、迁移和侵袭数量均较低,周期素依赖激酶抑制剂p21(P21)及上皮钙黏素(E-cadherin)较高(P<0.05);与si-NC组相比,si-MTA2组SW480细胞中cyclin D1、MMP-2及SW480细胞活性、迁移和侵袭数量均较低,P21及E-cadherin较高(P<0.05)。转染miR-152-3p和MTA2野生型表达载体的结肠癌SW480细胞荧光素酶活性显著降低(P<0.05)。相比miR-152-3p+pcDNA3.1组,miR-152-3p+pcDNA3.1-MTA2组SW480细胞中P21、E-cadherin的表达较低,MTA2、cyclin D1、MMP-2蛋白的表达较高,SW480细胞活性、迁移、侵袭数量较高(P<0.05)。结论miR-152-3p可能通过下调MTA2抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

长链非编码 RNA母系表达基因 8靶向微小 RNA-497-5p调控血管瘤血管内皮细胞的增殖和凋亡

目的 探讨长链非编码RNA母系表达基因8(MEG8)靶向微小RNA(miR)-497-5p对血管瘤血管内皮细胞的增殖和凋亡的影响.方法 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测河南中医药大学第一附属医院2017年1月至2018年6月收集的52例血管瘤组织和与其对应的瘤旁正常皮肤组织中MEG8和miR-497-5p的表达水平.血管瘤血管内皮细胞HemEC分为si-NC组、si-MEG8组、miR-NC组、miR-497-5p组、si-MEG8+anti-miR-NC组、si-MEG8+anti-miR-497-5p组.四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和P21、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl相关X(Bax)蛋白的表达水平.双荧光素酶报告基因实验验证MEG8和miR-497-5p的靶向关系.结果 与瘤旁正常皮肤组织相比,血管瘤组织中MEG8表达水平[(0.82±0.08)比(0.33±0.03)]升高(P<0.05),miR-497-5p表达水平[(0.34±0.03)比(0.84±0.08)]降低(P<0.05).与si-NC组比较,si-MEG8组HemEC细胞存活率[(39.61±4.06)％比(103.50±11.04)％]、cyclin D1和Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率[(26.57±2.73)％比(8.33±0.85)％]、P21和Bax蛋白表达升高(P<0.05).与miR-NC组比较,miR-497-5p组HemEC细胞存活率[(48.87±5.09)％比(104.11±10.64)％]、cy?clin D1和Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率[(21.26±2.45)％比(8.33±0.85)％]、P21和Bax蛋白表达升高(P<0.05).MEG8和miR-497-5p直接特异性结合.与si-MEG8+anti-miR-NC组比较,si-MEG8+anti-miR-497-5p组HemEC细胞存活率[(86.10±8.81)％比(40.23±4.35)％]、cyclin D1和Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05),凋亡率[(15.32±1.67)％比(26.81±2.94)％]、P21和Bax蛋白表达降低(P<0.05).结论 抑制MEG8通过靶向miR-497-5p能够抑制血管瘤血管内皮细胞增殖,促进细胞凋亡,进而遏制血管瘤的发生发展.     

微小 RNA-301b-3p靶向第 10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物对骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-301b-3p(miR-301b-3p)对骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制.方法 本研究起止时间为2019年3—9月.人成骨细胞(hFOB)和骨肉瘤细胞U2OS、MG63购自美国菌种保藏中心.U2OS细胞分为miRNA抑制物阴性对照(anti-miR-NC)组、miR-301b-3p抑制物(anti-miR-301b-3p)组、anti-miR-301b-3p+小干扰RNA阴性对照(si-NC)组、anti-miR-301b-3p+第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)小干扰RNA(si-PTEN)组;实时荧光定量PCR(RT-qP-CR)检测miR-301b-3p表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验检测miR-301b-3p和PTEN的靶向关系.结果 与hFOB细胞相比,U2OS、MG63中miR-301b-3p表达水平[(0.89±0.09),(0.70±0.07)比(0.20±0.02)]显著升高.与anti-miR-NC组比较,anti-miR-301b-3p组U2OS细胞活性[(0.59±0.06)比(1.33±0.13)]显著降低,而凋亡率[(22.06±2.31)％比(7.48±0.78)％]、PTEN蛋白表达[(0.69±0.07)比(0.35±0.03)]显著升高.PTEN是miR-301b-3p的直接靶基因.与anti-miR-301b-3p+si-NC组比较,anti-miR-301b-3p+si-PTEN组U2OS细胞活性[(1.16±0.12)比(0.56±0.06)]显著升高,而凋亡率[(10.28±1.16)比(22.12±2.34)]显著降低.结论 抑制miR-301b-3p表达可通过调控PTEN抑制骨肉瘤细胞增殖,促进细胞凋亡.     

微小 RNA-335-3p靶向小鼠双微体基因调控骨髓瘤细胞的增殖和凋亡

目的 探讨微小RNA(miR)-335-3p对骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 2018年5月至2019年1月,培养正常骨髓细胞MNC和骨髓瘤细胞KM3和U266,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中miR-335-3p表达水平.将KM3细胞分为miR-NC组(转染模拟对照序列)、miR-335-3p组[转染miR-335-3p模拟物(miR-335-3p mimics)]、pcDNA3.1+miR-335-3p组(共转染空载体和miR-335-3p mimics)和pcDNA3.1-MDM2+miR-335-3p组[共转染小鼠双微体基因(MDM2)过表达载体和miR-335-3p mimics],MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡的影响,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(P21)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白和Bcl-2相关X(Bax)蛋白表达.双荧光素酶报告基因实验验证KM3细胞中miR-335-3p与MDM2调控关系.结果 骨髓瘤细胞KM3和U266中miR-335-3p表达水平分别为0.24±0.01、0.38±0.02,显著低于正常骨髓细胞MNC中的miR-335-3p表达水平0.77±0.03(均P<0.05).与miR-NC组比较,miR-335-3p组KM3细胞吸光度[48 h:(0.60±0.03)比(0.99±0.06);72 h:(0.82±0.05)比(1.67±0.07)]、细胞中cyclin D1和Bcl-2蛋白表达均降低(均P<0.05),细胞凋亡率[(24.31±0.99)％比(8.13±0.83)％]、细胞中P21和Bax蛋白表达均升高(均P<0.05).miR-335-3p在KM3细胞中负调控MDM2表达.与pcDNA3.1+miR-335-3p组比较,pcDNA3.1-MDM2+miR-335-3p组KM3细胞吸光度[48 h:(0.80±0.05)比(0.63±0.04);72 h:(1.28±0.06)比(0.88±0.05)]、细胞中cyclin D1和Bcl-2蛋白表达均升高(均P<0.05),凋亡率[(15.34±0.66)％比(23.98±1.41)％]、细胞中P21、Bax蛋白表达均降低(均P<0.05).结论 miR-335-3p可能通过下调MDM2表达抑制骨髓瘤细胞的增殖,并诱导细胞凋亡.     

微小 RNA-520a-5p通过靶向调控鼠双微体基因影响胶质瘤细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭

目的探讨微小 RNA-520a-5p(miR-520a-5p)在胶质瘤发生发展中的作用和机制。方法选取 2016年 5月至 2018年 11月在宝鸡高新人民医院治疗的胶质瘤病人肿瘤组织作 56例为研究对象。实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)检测 56例胶质瘤组织和 56例正常脑组织中 miR-520a-5p表达水平。体外培养胶质瘤 U251细胞,转染 miR模拟对照序列( miR-NC)、 miR-520a-5p9模拟物( miR-520a-5p mimics)至 U251细胞,分别采用四甲基噻唑蓝染色法( MTT)、流式细胞仪、 Transwell和蛋白质印迹法检测过表达 miR-520a-5p对 U251细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭及细胞中鼠双微体基因( MDM2)、细胞周期蛋白 D1(cyclin D1)、 P21、B淋巴细胞瘤 -2相关蛋白( Bax)、 B淋巴细胞瘤 -2(Bcl-2)、基质金属蛋白酶 2(MMP-2)和 E-钙黏蛋白( E-cadherin)蛋白表达的影响。双萤光素酶报告基因实验验证 miR-520a-5p与 MDM2靶向关系,蛋白质印迹法检测转染 miR-520a-5p mimics、miR-520a-5p抑制剂( anti-miR-520a-5p)对 U251细胞中 MDM2蛋白表达的影响。共转染 miR-520a-5p mimics和 MDM2过表达载体( pcD. NA3.1-MDM2)至 U251细胞,上述相同方法观察过表达 MDM2能否逆转过表达 miR-520a-5p对 U251细胞增殖、迁移和侵袭及相关蛋白表达的影响。结果与正常脑组织相比,胶质瘤组织中 miR-520a-5p表达降低( P<0.05)。与转染 miR-NC的 U251细胞比较,转染 miR-520a-5p mimics的 U251细胞 24 h、48 h和 72 h的 OD值［(0.36±0.04)比( 0.50±0.05)、(0.49±0.05)比( 0.95±0.09)、(0.71±0.07)比( 1.36±0.13)］、迁移细胞数［(67±6.26)比( 144±13.38)］、侵袭细胞数［(59±5.47)比( 135±13.12)］均降低( P<0.05),凋亡率［( 21.17±2.06)%比( 7.82±0.77)%］升高( P<0.05)细胞中 cyclin D1、Bcl-2和 MMP-2的蛋白表达水平均降低( P<0.05)而 P21、Bax和 E-cadherin的蛋白表达水平均升高( P<0.05miR-520a-5p可与 MDM2的 3’UTR靶向结合,mimics的 U251细胞中 MDM2蛋白水平显著低于转染 miR-NC的细胞,而转染 anti-miR-520a-5p的 U251细胞中 MDM2的蛋白水平显著高于转染 anti-miR-NC的细胞。与共转染 miR-520a-5p mimics与 pcDNA3.1的 U251细胞比较,共转染 miR-520a-5p mim. ics与 pcDNA3.1-MDM2的 U251细胞 24 h、48 h和 72 h的 OD值、迁移细胞数、侵袭细胞数均升高( P<0.05)凋亡率降低( P< 0.05)。,同时转染miR-520a-5p,细胞中 cyclin D1、Bcl-2和 MMP-2的蛋白表达水平均升高( P<0.05),而 P21、Bax和 E-cadherin的蛋白表达水平均降低( P<0.05)。结论 miR-520a-5p在胶质瘤组织中表达降低,过表达 miR-520a-5p可能通过靶向负调控 MDM2抑制胶质瘤 U251细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导其凋亡。