MG132诱导人血管平滑肌细胞凋亡及对caspase3表达的影响

目的观察蛋白酶体抑制剂MG132对人脐静脉血管平滑肌细胞(VSMC)的致凋亡作用及其对凋亡相关的天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶3(caspase3)表达的影响。方法采用多个浓度(2.5,5,10μmol/L)的蛋白酶体抑制剂MG132处理人脐静脉VSMC48h;DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡率;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测caspase3基因转录水平;免疫细胞化学检测细胞caspase3蛋白表达。结果蛋白酶体抑制剂MG132处理48h后细胞凋亡率增加;RT-PCR检测发现细胞内凋亡相关基因caspase3mRNA表达上调;免疫细胞化学检测细胞caspase3蛋白表达水平升高。结论蛋白酶体抑制剂MG132能够诱导人脐静脉VSMC凋亡,其作用呈量-效关系;MG132诱导VSMC凋亡的机制可能与MG132抑制泛素-蛋白酶体途径(UPP)活性,促进caspase3基因转录,使细胞内caspase3增加而促进细胞凋亡。     

蛋白酶体抑制剂MG132诱导HepG2细胞凋亡及其机制研究

目的观察蛋白酶体抑制剂MG132对人肝癌细胞HepG2的致凋亡作用,并从泛素蛋白酶体途径(UPP)相关基因E1、E2和E3及天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶3(Caspase3)表达初步探讨MG132的致细胞凋亡机制。方法采用多个浓度(2、5、10μmol·L-1)的蛋白酶体抑制剂MG132处理HepG2细胞;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率,DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测UPP相关基因E1、E2、E3和凋亡相关基因Caspase3的转录水平;免疫细胞化学检测Caspase3蛋白表达。结果对照组HepG2细胞凋亡率低于5%,在2、5和10μmol·L-1MG132作用下,细胞凋亡率分别为42.9%、66.1%、72.8%,MG132诱导HepG2细胞凋亡具有量效关系;RTPCR检测发现细胞内UPP相关基因E1、E2、E3mRNA表达下降,而凋亡相关基因Caspase3mRNA表达上调;免疫组化检测Caspase3蛋白表达水平升高。结论蛋白酶体抑制剂MG132能够诱导HepG2细胞凋亡,其机制可能与MG132抑制UPP活性,使细胞内Caspase3蛋白降解减少,同时上调Caspase3基因转录,促进细胞凋亡。     

MG132诱导人血管内皮细胞凋亡及对caspase-3表达的影响

目的　观察蛋白酶体抑制剂MG132对人血管脐静脉内皮细胞(ECV -304)的致凋亡作用及其对凋亡相关的天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶3表达的影响。方法　采用两个浓度(2, 5μmol·L-1 )的蛋白酶体抑制剂MG132处理ECV -304细胞;DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率;RT -PCR检测细胞内凋亡相关基因caspase -3的转录水平;免疫细胞化学检测细胞caspase 3蛋白表达。结果　对照组ECV -304细胞凋亡率低于5%,在2μmol·L-1MG132作用下,凋亡率为11. 3%,MG132浓度升至5μmol·L-1,细胞凋亡率增致44 .5%,MG132诱导ECV 304细胞凋亡具有量-效关系;RT -PCR检测发现细胞内凋亡相关基因caspase 3mRNA表达上调;免疫细胞化学检测细胞caspase- 3蛋白表达水平升高。结论:蛋白酶体抑制剂MG132能够诱导血管内皮细胞凋亡,其机制可能与MG132抑制UPP活性,促进caspase- 3基因转录,使细胞内caspase -3增加而促进细胞凋亡。     

MG132诱导HepG_2细胞凋亡及其对p53表达的影响

目的观察蛋白酶体抑制剂MG132对人肝癌细胞系HepG2的致凋亡作用及其对凋亡相关基因p53蛋白表达的影响。方法采用多个浓度(2,5,10μmol/L)的蛋白酶体抑制剂MG132处理HepG2细胞;流式细胞术和Hoechst荧光染色检测细胞凋亡;免疫细胞化学检测HepG2细胞p53蛋白含量。结果对照组HepG2细胞凋亡率低于5%,在2,5,10μmol/LMG132作用下,细胞凋亡率分别为42.9%,66.1%和72.8%,MG132诱导HepG2细胞凋亡具有剂量—效应关系。经Hoechst荧光染色可见细胞染色质浓缩等凋亡改变。免疫组织化学检测HepG2细胞p53蛋白表达水平增高。结论蛋白酶体抑制剂MG132能够诱导HepG2细胞凋亡,其作用呈剂量—效应关系;p53蛋白表达增加与MG132抑制泛素—蛋白酶体系统降解细胞内p53蛋白有关。     

泛素蛋白酶体抑制剂MG-132对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究泛素蛋白酶体抑制剂对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:将泛素蛋白酶体抑制剂MG-132加入胃癌细胞SGC7901,用四氮唑蓝(MTT)法测定细胞生长抑制效应,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫细胞化学检测生存素的表达。结果:MG-132对胃癌细胞有显著的抑制作用,24,48h的IC50分别为80.9,9.1μmol·L-1;MG1325.0μmol·L-1作用胃癌细胞24,48,72,96h后,细胞凋亡率分别为(4.2±s0.6)%,(30±4)%,(47±6)%,(53±6)%,生存素在胃癌细胞中呈高表达,经MG132作用后,表达明显降低。结论:MG132能显著抑制胃癌细胞的增殖、诱导其凋亡,并下调生存素的表达。     

蛋白酶体抑制剂MG132对胃癌细胞系AGS和SNU484增殖的影响

目的研究蛋白酶体抑制剂MG132对胃癌细胞系AGS和SNU484细胞成活率和凋亡情况的影响及其可能的分子机制。方法蛋白酶体抑制剂MG132(1μM,10μM)处理胃癌细胞系AGS和SNU484。利用MTT法检测细胞生长状态,采用流式细胞仪测定细胞凋亡情况,利用Western blot法检测肿瘤抑制基因SMAD4蛋白表达水平。结果MG132能够以时间和剂量依赖的方式抑制AGS和SNU484的细胞增殖,且AGS对MG132的敏感性要高于SNU484细胞。MG132呈剂量依赖的方式诱导AGS和SNU484细胞凋亡。探讨相关分子机制发现MG132能够上调SMAD4蛋白的表达水平。结论用MG132处理胃癌细胞可引起细胞增殖抑制,其可能的分子机制为上调肿瘤抑制基因SMAD4的表达。蛋白酶体抑制剂可能会成为一类新的抗胃癌的药物。     

泛素-蛋白酶体抑制剂对食管癌细胞增殖的影响

泛素-蛋白酶体通路(ubiquitin-proteasome pathway, UPP)是调节细胞多种生物学过程如细胞周期、基因转录、抗原提呈的关键环节,本文用泛素-蛋白酶体抑制剂MG-132来阻断UPP,研究对食管癌细胞增殖的影响.     

蛋白酶体抑制剂MG132对急性髓系白血病细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨蛋白酶体抑制剂MG132对急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞增殖与凋亡的影响。方法 qRT-PCR检测9株血液肿瘤细胞株内ADRM1 mRNA表达。利用shRNA干扰HL60细胞内ADRM1表达,将不同浓度的MG132作用于ADRM1干扰前后的HL60细胞24 h,CCK-8法检测各组细胞增殖与活力;Western blot检测各组细胞内ADRM1、UCH37蛋白表达;流式细胞仪分析不同浓度MG132作用下,HL60、NB4细胞凋亡情况。结果血液肿瘤细胞株内ADRM1 mRNA表达上调。成功构建ADRM1 shRNA与scrambled shRNA HL60细胞株。ADRM1基因干扰及给予MG132后,各实验组细胞增殖抑制,活力下降,此时细胞内ADRM1、UCH37蛋白表达下调。随着MG132浓度提高,HL60、NB4细胞凋亡增加;MG132对HL60细胞的促凋亡作用强于NB4细胞。结论血液肿瘤细胞株内ADRM1 mRNA过表达;ADRM1蛋白下调后,UCH37蛋白亦下调,细胞增殖抑制;MG132通过下调ADRM1、UCH37蛋白表达,诱导AML细胞凋亡,抑制细胞增殖与活力;MG132对不同分型AML细胞的促凋亡作用存在个体差异。     

泛素-蛋白酶体抑制剂MG-132对食管癌细胞凋亡和生存素表达的影响

目的:研究泛素-蛋白酶体抑制剂MG-132对食管癌细胞凋亡和生存素(survivin)表达的影响。方法:将泛素-蛋白酶体抑制剂MG-132加入食管癌细胞Eca9706中,采用MTT法测定细胞生长抑制率,经流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫细胞化学法检测survivin的表达。结果:MG-132对食管癌细胞生长具有显著抑制作用,作用24、48、72、96h后的IC50分别为120.2、18.1、—12.2、—16.9μmol/L;5.0μmol/L的MG-132作用于食管癌细胞24、48、72、96h后,细胞凋亡率分别为(3.1±0.4)%、(31.7±3.5)%、(50.4±4.8)%、(66.6±6.2)%;Survivin在食管癌细胞中呈高表达,经MG-132作用后,表达明显降低。结论:MG-132能显著抑制食管癌细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与下调survivin表达有关。     

缬沙坦对人脐静脉平滑肌细胞凋亡的影响

目的:研究血管紧张素受体阻滞剂缬沙坦对人脐静脉血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的调节作用,以探讨缬沙坦抗动脉粥样硬化的作用机制.方法:荧光显微镜观察缬沙坦作用后VSMC凋亡的形态学变化,用流式细胞仪测定缬沙坦用药前后VSMC凋亡率并作周期分析,用流式细胞仪检测缬沙坦对凋亡相关基因Bax,Bcl-2和caspase3表达的影响.结果:缬沙坦高浓度 血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)组的VSMC凋亡率较AngⅡ模型组明显提高,缬沙坦单药高、中、低浓度组的VSMC凋亡率较对照组明显提高.细胞周期分析表明,AngⅡ 缬沙坦组与AngⅡ组比较,G0/G1期百分率显著升高,S期百分率显著降低,且具有浓度依赖性.Bax和caspase 3基因经高浓度缬沙坦组作用24 h后表达水平增加,Bcl-2则没有改变.结论:缬沙坦对AngⅡ诱导VSMC的增殖有抑制作用;缬沙坦可能促进VSMC凋亡;缬沙坦促进VSMC凋亡可能与Bax和caspase基因表达增加有关.     

Caspase-3-dependent apoptosis in vascular smooth muscle cell by proteasome inhibition

The effects of a number of substances on neointima formation following angioplasty have been investigated in animal models. It was suggested that delivering of proteasome inhibitor to the site of vascular injury would be a potential therapeutic approach in prevention of vascular restenosis. But the mechanisms underlying biologic activities of proteasome inhibition in vascular smooth muscle cells (VSMCs) are largely unknown. We have investigated effects of proteasome inhibition on VSMCs using proteasome inhibitor MG115. MG115 induced apoptotic death in VSMCs as determined by viability, morphology, and DNA fragmentation. Proteasome inhibition was accompanied by up-regulation of p53, p21, and p27. In contrast, there were no appreciable alterations in the levels of Bcl-2 and Bax. Proteasome inhibition was followed by activation of caspase-3 but not of -8. The induction of apoptosis was suppressed by treatment with a selective inhibitor of the caspase-3 family, z-DEVD-fmk but not by NG-monomethyl-L-arginine. These results indicate that proteasome inhibition induces apoptosis in VSMCs by activation of caspase-3.     

Effects of abciximab and tirofiban on vitronectin receptors in human endothelial and smooth muscle cells

human umbilical venous endothelial cells. 7E3 binding correlated with alphavbeta3-expression in all cell types. Integrin-mediated cell functions were analysed with adhesion and spreading assays on vitronectin. In human umbilical venous endothelial cells, these functions were mediated by alphavbeta3 and in human iliac arterial smooth muscle cells by alphavbeta5. In human umbilical venous smooth muscle cells, both vitronectin receptors were involved. Abciximab potently inhibited alphavbeta3-mediated cell adhesion and spreading. With tirofiban, no significant inhibition of vascular cell functions was observed. The present data demonstrate that vitronectin-cell interactions in vascular cells are mediated via two distinct integrin-receptors, alphavbeta3 and alphavbeta5. Abciximab, which solely inhibits alphavbeta3-mediated cell functions, may be particularly effective in human endothelium and in beta3-integrin expressing vascular smooth muscle cells.     

Proteasome inhibitor MG132 reduces growth of As4.1 juxtaglomerular cells via caspase-independent apoptosis

The proteasome inhibitor MG132 has been shown to induce apoptotic cell death through the formation of reactive oxygen species (ROS). Here, we investigated the molecular mechanisms of MG132 in As4.1 juxtaglomerular cell death in relation to apoptosis and levels of ROS and glutathione (GSH). MG132 inhibited the growth of As4.1 cells with an IC₅₀ of approximately 0.3–0.4 μM at 48 h and induced cell death, accompanied by the loss of mitochondrial membrane potential (MMP; ∆Ψ_m), Bcl-2 decrease, activations of caspase-3 and caspase-8, and PARP cleavage. MG132 increased intracellular ROS levels and GSH-depleted cell numbers. However, caspase inhibitors, especially Z-VAD (pan-caspase inhibitor) intensified cell growth inhibition, cell death, MMP (∆Ψ_m) loss, and Bcl-2 decrease in MG132-treated As4.1 cells. Z-VAD also slightly intensified increases in ROS levels and GSH depletion in MG132-treated As4.1 cells. In conclusion, MG132 reduced the growth of As4.1 cells via caspase-independent apoptosis. The changes in ROS and GSH levels by MG132 and caspase inhibitors partially influenced the growth inhibition and death of As4.1 cells.     

血管内皮生长因子受体-3在血管内皮细胞和平滑肌细胞中的表达

目的探讨血管内皮细胞生长因子受体-3（VEGFR-3）在血管内皮细胞和平滑肌细胞中的表达。方法分离人脐带中的脐静脉和脐动脉,冰冻切片后以免疫荧光法检测VEGFR-3的表达。结果VEGFR-3荧光信号表达于脐静脉内皮细胞和平滑肌细胞,以及脐动脉内皮细胞、平滑肌细胞和外周细胞。结论血管内皮细胞和平滑肌细胞均表达VEGFR-3。