基于一测多评法定量的四季三黄片质量评价研究

目的 建立同时测定四季三黄片中黄芩苷、去甲汉黄芩素苷、千层纸素A-7-O-β-D葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、千层纸素A等7种成分的一测多评法。方法 采用HPLC,岛津VP-ODS色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.1%三氟乙酸溶液为流动相,梯度洗脱;流速1.0 mL·min^-1;柱温30℃;检测波长276 nm。以黄芩苷为内参物,建立去甲汉黄芩素苷、千层纸素A-7-O-β-D葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素和千层纸素A的相对校正因子,同时采用一测多评法和外标法测定四季三黄片中7个成分的含量,并将2种方法的测定结果进行比较。结果 7种成分在各自范围内线性关系良好(r>0.999 8),平均加样回收率97.0%～102.1%,RSD为1.2%～2.5%。共测定了4个企业29批四季三黄片中7种成分的含量,结果一测多评法与外标法测定结果无明显差异。不同企业样品间各成分含量存在明显差异。结论 建立的含量方法能够反映出投料用黄芩饮片的质量状况,进而全面有效地评价四季三黄片的质量,为其质量标准的提升奠定基础。     

高效液相色谱法同时测定金花清感颗粒中14种成分含量

目的：建立高效液相色谱法（HPLC）同时测定金花清感颗粒中新绿原酸、马钱苷酸、绿原酸、咖啡酸、獐牙菜苷、连翘酯苷A、芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、黄芩苷、连翘苷、牛蒡子苷、汉黄芩苷、黄芩素、白杨素、千层纸素共14种成分的含量,为金花清感颗粒的质量控制提供参考。方法：采用Agilent-Eclipse XDB-C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,以乙腈（A）-0.1%磷酸水（B）为流动相,进行梯度洗脱,检测波长230 nm,流速1.0 mL·min^-1,柱温30℃,进样量10 μL。结果：建立了同时测定金花清感颗粒中14种成分含量的HPLC检测方法,新绿原酸、马钱苷酸、绿原酸、咖啡酸、獐牙菜苷、连翘酯苷A、芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、黄芩苷、连翘苷、牛蒡子苷、汉黄芩苷、黄芩素、白杨素和千层纸素分别在1.03~20.50,0.72~14.76,1.76~43.93,0.50~10.02,2.50~49.97,2.50~50.02,1.40~27.98,9.66~193.14,1.05~20.90,8.89~177.76,3.39~67.84,0.55~10.92,0.09~10.12,0.20~10.45 μg·mL^-1范围内线性关系良好（r≥0.999 0）,平均加样回收率（n=9）分别为95.85%,97.66%,104.92%,96.40%,96.67%,95.57%,95.61%,99.45%,96.54%,97.38%,96.56%,96.71%,102.42%,97.77%,RSD均小于3.0%。10批金花清感颗粒中上述14种成分的含量范围分别为1.19~1.42,0.20~0.37,6.51~7.72,0.20~0.25,2.12~2.80,1.75~2.46,0.89~1.14,14.41~16.58,0.41~0.64,15.85~20.01,2.80~3.44,0.38~0.53,0.02~0.03,0.07~0.11 mg·g^-1。结论：建立的HPLC法稳定可靠,重复性好,简便可行,可用于金花清感颗粒质量控制评价。     

黄芩透过人胎盘屏障体外模型药物成分研究

目的研究黄芩透过人胎盘屏障药物成分。方法用尤斯灌流室技术建立人胎盘屏障体外模型,预平衡30 min后,于母体池加入10 mg·mL-1黄芩溶液,分别于5~240 min内在胎儿池取样,用高效液相色谱技术分析样品中所含药物成分。色谱柱:Agilent Zorbax-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%甲酸水(梯度洗脱),内标为葛根素,流速为1.0 mL·min^-1,检测波长为278 nm,柱温20℃,进样量为5μL。结果从5 min开始,黄芩苷、汉黄芩苷、汉黄芩素即可透过人胎盘屏障;黄芩素和千层纸素A从20 min开始才透过胎盘屏障;30 min后检测到的11种药物成分均可透过胎盘屏障,且在后续取样时间点未见新的物质生成。结论黄芩中的5种黄酮类成分(黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素和千层纸素A)均可透过人胎盘屏障体外模型。     

LC-MS/MS法同时测定小儿豉翘清热颗粒中13个成分的含量

目的:建立LC-MS/MS法同时测定小儿豉翘清热颗粒中栀子苷、芍药内酯苷、芍药苷、连翘酯苷A、甘草苷、黄芩苷、连翘苷、千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、大黄酸、甘草酸共13个成分的含量。方法:采用Poroshell 120 SB-C₁₈色谱柱(100 mm×3.0 mm, 2.7μm),以0.1%甲酸水与甲醇-乙腈(1∶1)为流动相,梯度洗脱,流速0.45 mL·min^-1,柱温40℃;采用电喷雾(ESI)离子源,多反应监测模式(MRM)进行负离子扫描。结果:栀子苷质量浓度在9～900 ng·mL^-1,芍药内酯苷在1～100 ng·mL^-1,芍药苷在12～1 200 ng·mL^-1,连翘酯苷A在12～1 800 ng·mL^-1,甘草苷在1～100 ng·mL^-1,黄芩苷在8～800 ng·mL^-1,连翘苷在5～500 ng·mL^-1,千层纸素A-7-O-β...     

HPLC法同时测定清开灵注射液中黄芩苷和千层纸素A-7-O-β-d-葡糖醛酸苷的含量

目的:建立同时测定清开灵注射液中黄芩苷和千层纸素A-7-O-β-d-葡糖醛酸苷含量的方法,并比较不同厂家、批号产品中黄芩苷和千层纸素A-7-O-β-d-葡糖醛酸苷的含量差异。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C18,流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液(梯度洗脱),流速为1.0 ml/min,检测波长为274 nm,柱温为30℃,进样量为10μl。结果:黄芩苷、千层纸素A-7-O-β-d-葡糖醛酸苷检测质量浓度分别在10.1²52.0、1.0252.0、1.0⁶.0μg/ml范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.999 9);精密度、稳定性、重复性试验的RSD≤1.6%;平均加样回收率分别为99.64%、99.03%,RSD分别为2.7%、0.9%(n=6)。不同厂家、批号产品中黄芩苷、千层纸素A-7-O-β-d-葡糖醛酸苷的质量浓度范围分别为4.1516.0μg/ml范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系(r=0.999 9);精密度、稳定性、重复性试验的RSD≤1.6%;平均加样回收率分别为99.64%、99.03%,RSD分别为2.7%、0.9%(n=6)。不同厂家、批号产品中黄芩苷、千层纸素A-7-O-β-d-葡糖醛酸苷的质量浓度范围分别为4.151⁴.849、0.0974.849、0.097⁰.157 mg/ml。结论:该方法简单、准确、可靠,适用于清开灵注射液的质量控制;不同厂家、批号清开灵注射液中黄芩苷和千层纸素A-7-O-β-d-葡糖醛酸苷的含量存在较大差异。     

RP-HPLC法测定不同产地黄芩中5种黄酮苷元成分的含量

目的:建立测定不同产地黄芩中5种黄酮苷元成分含量的方法。方法:采用反相高效液相色谱法。色谱柱为Agilent Extend-C18(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(梯度洗脱),检测波长为276 nm,流速为1.0 ml/min,柱温为35℃。结果:去甲汉黄芩素、黄芩素、汉黄芩素、白杨素、千层纸素A的进样量分别在0.018 0⁰.108 0、0.378 00.108 0、0.378 0².268 0、0.094 52.268 0、0.094 5⁰.567 0、0.022 50.567 0、0.022 5⁰.135 0、0.035 40.135 0、0.035 4⁰.212 4μg范围内与各自峰面积积分值呈良好的线性关系(r分别为0.999 9、0.999 5、0.999 6、0.999 5、0.999 5);精密度、重复性、稳定性试验的RSD<3%;加样回收率分别为98.72%(RSD=2.5%,n=6)、101.80%(RSD=2.0%,n=6)、99.25%(RSD=2.3%,n=6)、98.71%(RSD=1.5%,n=6)、99.05%(RSD=1.2%,n=6)。结论:该方法操作简便、快速,结果准确,可用于黄芩中黄酮苷元成分的含量测定。     

HPLC测定黄芩中6个成分的含量

目的建立高效液相色谱法对黄芩中6个成分(黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、白杨素、千层纸素A)的含量分析方法。方法采用Agilent ZORBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.3%磷酸三乙胺(B)为流动相,梯度洗脱,检测波长为275 nm,流速1.0 mL.min-1,柱温30℃。结果黄芩中的6个成分黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、白杨素、千层纸素A进样量分别在0.416 7~4.167μg(r=0.999 2)、0.078 15~0.781 5μg(r=0.999 5)、0.053 21~0.532 1μg(r=0.999 3)、0.016 36~0.163 6μg(r=0.999 3)、0.001 160~0.011 60μg(r=0.999 1)、0.010 46~0.104 6μg(r=0.999 4)范围内呈良好线性关系;平均回收率(n=5)分别为99.4%、100.1%、99.9%、100.2%、100.4%、100.1%,RSD分别为1.9%、2.2%、2.3%、1.6%、2.2%、2.1%。结论该方法准确可靠、重复性好,为黄芩质量综合评价提供了科学依据。     

骨疏康胶囊联合利塞膦酸钠治疗绝经后骨质疏松症的临床研究

目的 比较黄芩酒炙前后化学成分变化,为建立全面的黄芩饮片质量评价方法提供参考。方法 HPLC法建立黄芩片、酒黄芩的特征图谱,并生成对照特征图谱,标定共有峰并进行相似度评价。采用UPLC-Q-TOF/MS定性分析黄芩酒炙前后化学成分,利用UPLC-TQMS对2种饮片中11种黄酮类成分（黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素、千层纸素A、千层纸苷、野黄芩苷、芹菜素、高车前素、木犀草苷、白杨素）进行定量分析,并以含量为变量进行多元统计分析。结果 建立了黄芩片、酒黄芩的特征图谱,标定9个共有峰,2种饮片相似度均在0.947以上。在黄芩饮片中,共发现50种成分,通过多级质谱数据分析,保留时间匹配,并结合对照品及数据库检索,鉴定了其中44种成分。UPLC-TQMS定量结果显示酒炙后黄芩中黄芩苷、汉黄芩苷等黄酮苷类成分含量略有下降,黄芩素、汉黄芩素等黄酮苷元类成分含量稍有增加。经多元统计学分析,2种饮片有明显的分离趋势,载荷图结果表明黄芩苷、汉黄芩苷、千层纸苷的含量差异可能是引起黄芩酒炙前后化学成分变化的主要因素。结论 黄芩酒炙后没有新增或消失成分,但成分含量有所变化。所建立黄芩饮片的定性、定量方法重现性好,分析快速、准确,可用于黄芩饮片酒炙前后的质量评价。     

半夏泻心汤水煎液的指纹图谱及共有峰归属分析

目的：采用高效液相色谱法（HPLC）建立半夏泻心汤水煎液的指纹图谱,并对其共有峰进行归属分析和指认。方法：使用Agllent公司ZORBAX Extend-C₁₈柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）;乙腈-0.05%三乙胺水溶液（磷酸调pH 2.1）;梯度洗脱;流速为1 mL·min^-1;检测波长280 nm;柱温30℃。结果：方法学考察表明,所用色谱方法符合指纹图谱技术定性研究要求;标定了45个共有色谱峰,并指认其中10个峰,分别为绿原酸、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、大黄素、盐酸药根碱、芦丁、党参炔苷、千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷。经《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》（2012版）对10批半夏泻心汤水煎液进行考察,相似度均在0.92以上。结论：该法灵敏度高、稳定性和准确性良好,体现了半夏泻心汤组分的整体特征,为半夏泻心汤水煎液质量标准的建立提供了可靠的科学依据。     

高效液相色谱法同时测定清肺抑火丸中13种成分的含量

目的:建立高效液相色谱法(HPLC)同时测定清肺抑火丸中芒果苷、栀子苷、盐酸小檗碱、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、芦荟大黄素、汉黄芩素、大黄酸、大黄素、白花前胡甲素、大黄酚和大黄素甲醚13种成分含量。方法:采用Dikma Platisil ODS (4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,乙腈-0.1%甲酸溶液梯度洗脱,检测波长分别为238 nm (栀子苷、盐酸小檗碱),254 nm (芒果苷、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚),280 nm (黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素),321 nm (白花前胡甲素);柱温:35℃;流速:0.8 mL·min^-1。结果:芒果苷、栀子苷、盐酸小檗碱、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、芦荟大黄素、汉黄芩素、大黄酸、大黄素、白花前胡甲素、大黄酚和大黄素甲醚线性范围分别为0.231 3~23.13,1.786 8~178.68,0.900 2~90.02,4.913 5~491.35,0.899 0~89.90,0.626 9~62.69,0.213 3~21.33,0.198 8~19.88,0.157 7~15.77,0.210 7~21.07,0.326 1~32.61,0.557 8~55.78,0.235 0~23.50 μg·mL^-1;精密度、稳定性、重复性试验的RSD小于2%;平均回收率(n=6)均大于90%。结论:该方法精确可靠、操作简便快捷,可用于清肺抑火丸中各成分的同时测定。     

黄芩抗乙酰胆碱酯酶活性部位的RRLC-DAD-ESI-MS/MS分析

目的：筛选黄芩体外抑制乙酰胆碱酯酶（AChE）的活性部位，并对其化学成分进行分析。方法：黄芩提取物经反相C₁₈填料进行固相萃取（SPE）制备不同浓度甲醇醇梯度洗脱部位，以体外抑制AChE能力评价其抗阿尔茨海默症（AD）作用，采用高分离快速液相色谱-质谱联用技术（RRLC-MS/MS）对黄芩抑制AChE活性部位化学成分进行分析。结果：黄芩提取物的50%甲醇洗脱部位的AChE抑制活性明显强于其他洗脱部位并存在明显的量效关系，为其体外抑制的活性部位，经液质联用分析共鉴定出15种化合物。结论：黄芩具有体外抑制AChE活性，其主要有效部位为50%甲醇洗脱部位，其主要有效成分为黄芩苷为代表的黄酮类成分。     

剂量配伍对泻心汤蒽醌类成分溶出率变化规律研究

目的:研究黄连、黄芩的剂量配伍变化对泻心汤蒽醌类成分在泻心汤中溶出率影响。方法:固定大黄的量不变,应用2因素5水平星点设计法设计泻心汤的剂量比例,用HPLC法测定不同剂量比例泻心汤的蒽醌类成分的含量,计算溶出率,建立数学模型,分析剂量配伍变化对泻心汤蒽醌类成分溶出率变化影响。结果:大黄的量不变,黄连的量与黄芩的量分别不同程度改变时,泻心汤蒽醌类成分的溶出率不同。黄芩的量改变对泻心汤蒽醌类成分的影响较大。得到蒽醌类成分有较好溶出率的剂量比例为大黄-黄连-黄芩=6∶0.17∶5.83。结论:将星点设计-响应面法应用于中药剂量配伍方面的研究,具有方法简便、精度高的优点。非线性回归分析比线性回归分析更适用于复方剂量配伍变化对其有效成分溶出率变化规律的研究。     

黄芩提取物中黄酮类成分血浆蛋白结合率的测定

目的建立同时测定黄芩总黄酮部位中4种黄酮类成分在大鼠血浆中药物浓度的方法,并测定其体外血浆蛋白结合率。方法平衡透析法测定黄芩黄酮类成分血浆蛋白结合率,以高丽槐素为内标,生物样本用甲醇沉淀蛋白进行预处理,采用HPLC法测定4种黄酮类成分在透析内、外液中的浓度。结果在低、中、高3种浓度下,黄芩苷(BL)和汉黄芩苷(WL)的血浆蛋白质结合率随给药浓度的增大而降低(BL:82.03%→77.25%→67.17%;WL:82.24%→76.08%→69.87%),而汉黄芩素(W)和千层纸素A(OA)则呈现非质量浓度依赖性,其平均血浆蛋白结合率分别为(89.66±1.19)%、(88.56±1.87)%。结论该文所建立的测定方法简便、灵敏、专属性强。4个黄酮类成分在大鼠体外均有较高的血浆蛋白结合率。     

Contents of major bioactive flavones in proprietary traditional Chinese medicine products and reference herb of Radix Scutellariae

A simple and efficient HPLC/UV method for the simultaneous determination of six bioactive flavones, namely baicalein, baicalin, wogonin, wogonoside, oroxylin A and oroxylin A-7-O-glucuronide, has been developed and applied for their content determination in reference herb and proprietary traditional Chinese medicine (PTCM) products of Radix Scutellariae. The chromatographic separation was carried out on a Thermo C₁₈ column and linear gradient elution was employed with a mobile phase containing acetonitrile and 20 mM sodium dihydrogen phosphate buffer (pH 4.6). All the analytes were detected by PDA detector at a wavelength of 270 nm. Contents of the analytes in Radix Scutellariae containing PTCM products in forms of capsule, soft capsule, tablet and dripping pill and the reference herb of Radix Scutellariae were analyzed by sonicator extraction with methanol and water mixture (80:20) containing 1 mM HCl for 30 min followed by HPLC analysis. Separation of the six analytes was achieved within 25 min with good linearity (R² > 0.99). The R.S.D. of both the intra-day and inter-day precision for all the six analytes was below 10.14%. The accuracy at different concentrations was within the range of −7.83 to 4.06%. The extraction recovery was within the range of 89.22–107.33% for all the analytes. Contents of the six flavones were found to vary significantly among different products with glycosides, such as baicalin, wogonoside and oroxylin A-7-O-glucuronide, in much greater quantity than their corresponding aglycones. In addition to baicalin (18.54 ± 0.71%, w/w), the commonly used marker compound for Radix Scutellariae, wogonoside (3.54 ± 0.18%, w/w) and oroxylin A-7-O-glucuronide (2.84 ± 0.14%, w/w) also existed in abundant amount in the reference herb. Our findings suggested that wogonoside and oroxylin A-7-O-glucuronide should also be served as the chemical markers together with baicalin for the quality control of herbs and PTCM products of Radix Scutellariae.     

In vitro activity of five flavones from <Emphasis Type="Italic">Scutellaria baicalensis</Emphasis>in combination with Cefazolin against methicillin resistant <Emphasis Type="Italic">Staphylococcus aureus</Emphasis> (MRSA)

The aim of this study was to investigate the in vitro activities of baicalein, baicalin, wogonin, wogonoside and oroxylin A in combination with cefazolin against Methicillin-resistant Staphylococcus aureus. The combination effect of flavones and cefazolin was evaluated by checkerboard method to obtain a fractional inhibitory concentration index. The anti-Methicillin-resistant Staphylococcus aureus effect of baicalein and baicalin were compared and the antibacterial process was presented by time–kill curves. It was found that these five flavones from Scutellaria baicalensis Georgi could strengthen the anti-Methicillin-resistant Staphylococcus aureus effect of cefazolin to varying degrees, and baicalein and baicalin have stronger effect. Baicalein have the lower minimum inhibitory concentration in combination with antibiotic and quicker antibacterial effect than that of baicalin. There was different buckling in the first time interval of time kill curve between baicalein and baicalin showing the different speed of action. In conclusion, this study showed these flavones could restore the activity of cefazolin against Methicillin-resistant Staphylococcus aureus.     

高效液相色谱法同时测定愈银片中5种指标性成分的含量

目的:建立高效液相色谱法(HPLC)同时测定愈银片中5种指标性成分的含量。方法:色谱柱为Inertsil ODS-3(250mm×4.6 mm,5μm);乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长为230 nm,柱温为30℃,流速为1.0 mL·min^-1。结果:芍药苷、芦丁、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖(PGG)、槲皮素和丹皮酚分别在0.132 3~1.323 0μg(r=0.999 8),2.001 6~20.016 0μg(r=0.999 8),0.076 4~0.764 0μg(r=0.999 8),0.050 86~0.508 6μg(r=0.999 8),0.112 28~1.122 8μg(r=0.999 8)线性关系良好,平均回收率分别为100.37%,100.71%,99.29%,100.81%,100.37%。结论:所建立的方法准确度高、重复性好、稳定可控,可为有效控制愈银片的质量提供依据。     

HPLC法同时测定黄芩、白芍药对提取物中8种指标成分的含量

目的:建立同时测定黄芩、白芍药对提取物中黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素、芍药苷、芍药内酯苷、没食子酸和12,,3,4,6-五没食子酰葡萄糖8种成分含量的HPLC方法。方法:Agilent ZORBAXSB-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm5,μm),流动相组成A:乙腈,B:0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱;流速:1.0 mL.min-1,检测波长:230 nm,柱温:30℃。结果:黄芩苷线性范围为186.4～932.0μg,定量下限为186.4μg(r=0.999 8),平均回收率为100.1%(RSD=2.0%,n=6);黄芩素线性范围为19.12～95.60μg,定量下限为19.12μg(r=0.999 7),平均回收率为99.3%(RSD=2.5%,n=6);汉黄芩苷线性范围为44.20～221.0μg,定量下限为44.20μg(r=0.999 5),平均回收率为98.6%(RSD=2.5%,n=6);汉黄芩素线性范围为10.30～51.50μg,定量下限为10.30μg(r=0.999 9),平均回收率为97.5%(RSD=1.4%,n=6);芍药苷线性范围为4.312～43.12μg,定量下限为4.312μg(r=0.999 6),平均回收率为98.4%(RSD=2.4%,n=6);芍药内酯苷线性范围为3.060～30.60μg,定量下限为3.060μg(r=0.999 5),平均回收率为98.2%(RSD=2.0%,n=6);没食子酸线性范围为9.994～199.9μg,定量下限为9.994μg(r=0.999 5),平均回收率为98.8%(RSD=2.1%,n=6);1,2,3,4,6-五没食子葡萄糖线性范围为8.800～44.00μg,定量下限为8.800μg(r=0.999 5),平均回收率为98.0%(RSD=2.2%,n=6)。结论:本方法可应用于黄芩、白芍药对提取物中黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素、芍药苷、芍药内酯苷、没食子酸和1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖8种成分含量的同时测定。