干扰素-α对慢性乙肝患者外周树突状细胞的影响

目的通过干扰素-α刺激体外培养的慢性乙肝患者外周血树突状细胞,检测树突状细胞CD80、CD86的表达,检测培养液中IL-12的浓度,以探讨干扰素对慢性乙肝患者外周血树突状细胞的影响,进而探讨干扰素治疗慢性乙肝的作用机理。方法抽取慢性乙肝患者外周血用Romani方法培养,对照组加入IL-4和GM-csf,实验组加入IL-4、GM-csf和干扰素-α培养;第9天时收集细胞应用流式细胞仪检测CD80、CD86;第12天时收集上清,用ELISA法检测IL-12的浓度。结果应用干扰素的试验组树突状细胞CD80、CD86的表达有所增加,上清中IL-12的浓度也较高。结论干扰素促进慢性乙肝患者外周树突状细胞表型成熟和功能增强。     

血液肿瘤自体造血干细胞移植后患者的DC/CIK培养及临床应用安全性观察

目的采用自体造血干细胞移植后完全缓解的血液肿瘤患者的外周血单个核细胞,经体外培养扩增出树突状细胞(dendritic cell DC)/细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine induced killer cell CIK),应用DC/CIK细胞免疫治疗自体造血干细胞移植后完全缓解血液肿瘤患者,观察其不良反应。方法采集10例血液肿瘤自体造血干细胞移植后完全缓解患者的外周血单个核细胞,在体外经GM-CSF、IL-4、TNF-α等诱导产生DC,经IFN-γ、抗CD3单抗、IL-2等诱导产生CIK,观察其细胞形态及临床应用的不良反应并分析其细胞免疫表型。结果培养产生形态学典型的DC/CIK。诱导成熟的DC经流式细胞仪分析显示CD80、CD83、CD86、CD1a等阳性细胞比率大幅上升。CIK随着培养时间的延长,CD3+CD56+、CD3+CD8+双阳性细胞的比率亦大幅度上升。在DC/CIK细胞免疫治疗过程中,3例患者DC注射部位出现轻微疼痛,可自行缓解。2例患者输注CIK后出现低热,持续时间2～6h,可自行消退。4例患者输注完CIK后出现乏力,约2h可自行缓解。结论自体造血干细胞移植后完全缓解患者的外周血单个核细胞对DC/CIK的培养不受影响。DC/CIK细胞免疫治疗自体造血干细胞移植后完全缓解的血液肿瘤患者,安全性好,不良反应少。     

树突状细胞/肿瘤细胞融合诱导的抗肺癌CTL作用的初步究

目的探讨人源树突状细胞/肿瘤细胞融合诱导的抗肺癌CTL作用。方法培养体系中加入rhGM-CSFrhIL-4rhTNF-α等细胞因子诱导人骨髓来源树突状细胞,并与原代培养的人肺癌细胞融合;以融合细胞诱导外周血产生CTL并测定其细胞毒性。结果骨髓单个核细胞在rhGM-CSFrhIL-4rhTNF-α等细胞因子存在下培养10～12d,出现典型的成熟树突状细胞。体外诱导的人骨髓来源树突状细胞（DC）表达较高水平HLA-DR、CD86。对照DC和肿瘤细胞表达相应检测的单种抗原,而融合细胞两种抗原的表达水平均较高。DC/肺癌细胞融合在体外能有效诱导CTL产生,后者对靶细胞产生较强的细胞毒作用。结论通过本课题的研究证实DC与肿瘤细胞融合技术制备的肿瘤疫苗代表一类更为有效的抗肿瘤免疫策略。     

树突状细胞在变应性鼻炎发病中的作用

目的 探讨树突状细胞(DC)在变应性鼻炎患者外周血中的变化及对Th1/Th2细胞诱导分化的效应.方法 用流式细胞术分析变应性鼻炎组(15例)、慢性鼻炎组(15例)及对照组(15例)患者外周血CD3-CD64+细胞和CD4+ CD3-CD11c-细胞.将培养成熟的两种细胞分别与CD4+ CD45RA+T细胞和抗CD3及抗CD28单抗共同培养,用ELISA法检测上清液细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)、IL-4、IL-5和IL-10的含量.结果 在变应性鼻炎组外周血中,以CD4+ CD3-CD11c-细胞百分率增高为特征,经IL-3和CD40L等细胞因子培养后分化成熟成淋巴样细胞来源的树突状细胞(DC2);而慢性鼻炎组外周血中以CD3-CD64+细胞占优势,经用粒细胞集落因子(GM-CSF)+CD40L培养后分化成熟成髓样细胞来源的树突状细胞(DC1).结论 变应性鼻炎组外周血中DC的前体细胞(pDC1)/(pDC2)的失衡可能是导致变应性鼻炎患者外周血Th1/Th2失衡的重要原因之一,可能与变应性鼻炎发生密切相关.     

鼻咽癌患者放射治疗对免疫功能的影响

目的研究鼻咽癌患者在放射治疗不同阶段免疫功能的变化及其与患者临床指标的关系,为制定鼻咽癌免疫治疗方案、提高疗效提供依据。方法流式细胞仪检测初治鼻咽癌患者放疗前、中、后血液中的CD3、CD4、CD8、CD4/CD8以及NK等相关免疫指标,分析各免疫指标在放疗前中后的变化。结果 CD3细胞和NK细胞在放疗前、中、后三组间均有显著性差别;CD4细胞在放疗前、中、后逐渐下降,其中放疗前、后两组间有显著性差别;CD8细胞与CD4/CD8仅在放疗中、后两组间有显著差异。结论鼻咽癌患者在放射治疗不同阶段不同免疫细胞的功能存在变化。     

树突状细胞疫苗注射治疗慢性乙型肝炎后外周血T细胞亚群的变化

目的研究轻度慢乙肝患者经树突状细胞疫苗治疗后外周血中T细胞亚群的改变。方法32例轻度慢乙肝患者,每次注射>106乙肝疫苗冲击树突状细胞,1次/月,共12次。于治疗前后利用流式细胞仪测定患者外周血中T细胞亚群。结果在树突状细胞疫苗治疗后有应答反应的20例患者中可见CD4+T细胞和CD8+CD28+T细胞明显增加,而CD8+T细胞和CD8+CD28-T细胞显著降低。结论树突状细胞疫苗有可能活化慢乙肝患者的免疫反应,对其治疗有一定疗效。     

恶性腹腔积液来源的树突状细胞与CIK共培养后对结肠癌细胞体外杀伤作用的研究

目的探讨恶性腹腔积液来源的树突状细胞（DC）与CIK细胞共培养后对SW620结肠腺癌细胞的体外杀伤作用。方法分离15例结肠癌患者的腹腔积液培养获得成熟DC,分离健康人外周血培养获得CIK细胞,DC细胞与CIK细胞共培养,流式细胞仪鉴定表型,MTT法检测各组对结肠癌细胞的体外杀伤作用。结果恶性腹腔积液中存在DC前体细胞,经体外细胞因子诱导培养后可获得成熟的DC细胞,高表达HLA—DR、CD80、CD83、CD86分子。DC与CIK共培养对SW620结肠腺癌细胞的杀伤作用较单独CIK组有明显差异（P〈0．05）。结论腹腔积液中存在DC前体细胞在体外诱导培养可获得功能正常的成熟DC细胞,与CIK共培养后可增强其体外杀伤毒性。     

急性有机磷农药中毒患者外周血树突状细胞的变化

目的：探讨急性有机磷农药中毒患者外周血树突状细胞的变化及意义,为急性有机磷农药中毒患者的抢救提供参考。方法回顾性总结分析本院在2009年1月-2013年1月期间收治的80例急性有机磷农药中毒患者的临床病例资料,根据患者入院时中毒程度分为轻度中毒、中度中毒和重度中毒三组,检测患者外周血树突状细胞水平,同时以30名健康志愿者作为对照,分析有机磷农药中毒患者外周血树突状细胞的变化。结果与健康对照组相比,三组不同程度中毒患者第1天外周血髓样树突状细胞和细胞样树突状细胞均有显著升高,差异具有统计学意义（P〈0.05）;中毒后第3天,轻度中毒患者外周血髓样树突状细胞和细胞样树突状细胞水平恢复正常,而中度中毒患者上述指标逐渐下降,重度中毒患者上述指标显著高于正常水平;中毒后第5天,中度中毒患者外周血髓样树突状细胞和细胞样树突状细胞水平接近正常水平,重度中毒患者上述指标仍显著高于正常水平。中毒后第7天,重度中毒患者外周血髓样树突状细胞和细胞样树突状细胞水平均有所下降,但仍高于正常对照组。结论急性有机磷农药中毒患者外周血树突状细胞的变化能较客观地反映不同中毒程度患者的病理变化过程,检测患者外周血树突状细胞的变化对病情判断以及临床治疗具有一定的指导意义。     

CIK细胞治疗乳腺癌的临床疗效评估

目的观察细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）体外细胞毒活性,并观察CIK细胞治疗乳腺癌的近期临床疗效、免疫学活性及副反应。方法35例乳腺癌患者经规范化治疗后,取外周血分离单个核细胞（PBMC）,体外诱导出CIK细胞培养后,观察CIK细胞表型,用MTT法测体外细胞毒活性;所有患者均接受一定剂量的CIK细胞过继免疫治疗,观察其近期临床疗效、免疫反应、不良反应。结果35例患者中,完全缓解24例,部分缓解6例,病情稳定1例,近期有效率为85．71％,疾病控制率为88．57％,无肿瘤进展时间为2～31个月,中位无肿瘤进展时间为15个月。细胞毒活性检测结果显示,当效靶比为16：1时,CIK细胞体外细胞毒活性为77．06±11．62。与CIK细胞回输前相比,患者CD3^＋,CD4^＋,CD8^＋均有明显的升高（P〈0．001）。35例患者在输注CIK过程中1例出现一过性发热（37．5℃）反应。结论CIK细胞在乳腺癌免疫治疗中能诱导机体产生特异性的免疫反应,亦是新的杀伤肿瘤细胞的效应细胞,结合传统的手术和化疗,有较好的临床疗效。     

慢性HBV感染者外周血淋巴细胞亚群的特征性研究

目的 分析慢性HBV感染者外周血T细胞亚群的特征及病程不同阶段的变化及意义.方法 采用流式细胞分析技术对75例慢性HBV感染者的外周血T细胞亚群进行检测,分析其差异及意义并与正常对照组相比较.结果 乙肝肝硬化患者的外周血白细胞及淋巴细胞绝对数低于慢性乙肝患者、携带者及正常对照组:与正常对照组比较,慢性乙肝、肝硬化患者的外周血CD4 T细胞、CD8 T细胞、NK细胞计数减少,并且随病情的进展逐渐降低.结论 HBV感染者体内存在T淋巴细胞亚群失衡和细胞免疫功能紊乱.外周血T淋巴细胞亚群随病情进展而减少,主要为CD4 T细胞、CD8 T细胞、NK细胞的减少.     

西罗莫司对小鼠树突状细胞CD（86）、I-Ab和Toll样受体4表达的影响

目的：研究西罗莫司（SRL）对小鼠骨髓源树突状细胞（DC）发育成熟和Toll样受体4（TLR4）mRNA表达的影响。方法：（1）用细胞因子定向诱导C57BL/6小鼠骨髓细胞分化为DC,在相差显微镜和扫描电镜下动态观察DC在分化发育不同阶段的典型形态。（2）用SRL处理DC,通过流式细胞仪测定CD11c、CD86、MHC-Ⅱ类分子（I-Ab）的表达及在脂多糖（LPS）刺激后各分子表达的变化。（3）实时定量PCR法检测SRL处理DCTLR4mRNA表达水平。结果：（1）在相差显微镜和扫描电镜下可以看到DC在分化发育不同阶段的典型形态。（2）SRL抑制LPS刺激后DC表面CD86和I-Ab表达的上调。（3）与常规培养的DC相比,SRL组DCTLR4mRNA表达水平明显增高。结论：SRL处理的DC可抵抗LPS的促成熟作用。SRL促进DCTLR4mRNA表达。     

黄芪多糖促进人树突状细胞体外分化成熟的实验研究

目的：研究黄芪多糖（APS）对人树突状细胞（DCs）体外分化成熟及存活时间的影响。方法：健康志愿者外周血单个核细胞培养2 h获得贴壁的单核细胞,加入含rhGM-CSF（1000 U/mL）r、hIL-4（500 U/mL）的无血清培养基,实验组再加入3种浓度的APS（1μg/mL,10μg/mL,100μg/mL）,对照组加入等体积生理盐水,一组细胞体外培养7 d,收集悬浮细胞获得普通DCs（Mo-DCs）及APS诱导的DCs（APS-DCs）,流式细胞仪测定细胞免疫表型,同种异体混和淋巴细胞反应检测DCs的免疫激活功能,另外一组细胞体外连续培养14 d,光镜下观察细胞形态及存活时间。结果：APS能够显著促进DCs表面免疫分子HLA-DR、CD83、CD80、CD86、CD40、CD54的表达,APS-DCs较Mo-DCs具有更强的T细胞体外激活能力,并显著延长DCs的体外存活时间达2～3 d。结论：APS可以促进DCs的成熟和延长DCs的存活时间,从而发挥增强机体免疫力的功能。     

热休克蛋白gp96-肽复合物体外对人肝癌细胞的抗肿瘤效应

目的研究热休克蛋白gp96-肽复合物修饰树突状细胞(DC)后对人肝癌细胞的体外特异抗肿瘤效应。方法从人原发性肝癌组织中提取gp96-肽复合物,用其修饰DC细胞后与T淋巴细胞共同培养,以MTT法检测该复合物介导的细胞毒性T细胞(CTL)对不同来源人肝癌细胞的抗肿瘤效应,并与粗提抗原修饰DC细胞组相比较。结果 gp96-肽复合物诱导的CTL对原代肝癌细胞杀伤效率为74.3%,明显高于粗提抗原组(42.5%)和未加抗原组(14.4%)(P<0.01),粗提抗原组对肝癌细胞杀伤效率高于未加抗原组(P<0.01)。且该复合物的抗肿瘤效应具有一定的组织特异性。结论 gp96-肽复合物修饰的DC细胞,在体外能刺激产生特异的抗肿瘤细胞毒性T细胞,因而热休克蛋白gp96在肿瘤免疫治疗中具有重要的实用价值。     

感染伯氏疟原虫的小鼠树突状细胞体外扩增培养及形态观察

目的:体外诱导和扩增感染伯氏疟原虫小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC),并探讨其与疟疾发病机制的关系。方法:感染伯氏疟原虫的BALB/c实验小鼠组与正常对照组小鼠各7只,将其股骨骨髓细胞分离。去除悬浮细胞,贴壁细胞中加入细胞因子(IL-4和GM-CSF)继续进行培养,2周后,诱导的DC经相差显微镜进行观察。结果:DC在体外经细胞因子的刺激可增殖,但实验组小鼠DC增殖速度和数量明显低于对照组小鼠(P<0.05)。结论:感染伯氏疟原虫的小鼠DC形态和数量的改变,可能由此导致其功能的改变,这可能是造成疟疾患者感染持续发展的原因之一。     

脐血浆培养的脐血树突状细胞对胃癌细胞的特异杀伤作用

目的尝试用脐血浆代替胎牛血清培养脐血树突状细胞（DCs）,并使之负载胃癌抗原,观察其对胃癌细胞的特异杀伤作用。方法分离脐血单个核细胞（CBMCs）并在含10％同源脐血浆的培养体系中诱导培养,部分细胞加入胃癌冻融抗原冲击。流式细胞仪检测细胞表面抗原CD1a和CD83表达,MTT法检测DCs体外刺激淋巴细胞增殖活性,LDH法检测DCs诱导的细胞毒T淋巴细胞（CTLs）对胃癌及肝癌细胞的细胞毒作用。结果CBMCs能分化为表型正常的未成熟DCs,并进而吞噬胃癌细胞冻融抗原成熟,刺激淋巴细胞增殖并诱导对胃癌细胞株特异的CTLs毒性。结论脐血浆培养的脐血DCs能有效捕获胃癌冻融抗原,激发针对胃癌细胞的特异杀伤效应。本实验采用的DCs制备方法具有方法简单、成本较低、瘤苗制备时间较短等优点。     

恶性肿瘤干细胞标记物CD44在鼻咽癌组织中的表达及临床意义

目的研究恶性肿瘤干细胞标记物CD44在鼻咽癌组织中的表达及与放、化疗疗效之间的关系。方法通过纤维鼻咽镜取30例鼻咽癌组织和10例声带息肉,通过Trizol法提取总RNA后,进行逆转录,SYBR方法进行实时荧光定量PCR反应检测各组织中CD44的表达,对20例初治鼻咽癌病人予诱导化疗加同步放、化疗治疗。结果鼻咽癌组织和声带息肉组织中均表达CD44;鼻咽癌组织CD44表达均高于声带息肉组织;CD44在鼻咽癌组织和声带息肉组织中表达具有明显差异(P<0.05)。鼻咽癌组织CD44表达与N分期的关系有明显差异(P<0.05);CD44表达和T分期、病理类型、性别、年龄、及近期疗效间的关系均无明显差异(P>0.05)。结论鼻咽癌肿瘤组织中有CD44表达,且高于声带息肉组织;CD44的表达与N分期相关;还需扩大病例数,进一步研究加以证明。     

树突状细胞联合细胞因子诱导的杀伤细胞体外抗肺癌的实验研究

目的探讨树突状细胞（DC）联合细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）在体内外能否有效的抗肺癌。方法正常人外周血单个核细胞经不同细胞因子作用后培养成DC和CIK细胞,单个核细胞经贴附塑料平皿获得单核细胞,加入GM—CSF,IL-4及TNF—a诱导获得DC,悬浮细胞加入IFN—g,24h后IL-1a,IL-2及CD3McAb诱导获得CIK,将A549制备成肿瘤细胞冻融物．作为肿瘤抗原刺激DC,并将DC与CIK细胞联合培养（DC＋CIK,负载抗原的DC＋CIK）,以CIK细胞单独培养作为对照。CytotoxicityTOX96体外杀伤实验测定体外细胞毒活性。结果在培养的第15d．与负载抗原的DC共同培养的CIK与CIK细胞单独培养细胞相比,增殖速率明显提高[（23．4±2．3）倍vs（16．7±2．7）倍,P〈0．05],CD3＋CD56＋细胞表达水平也明显提高,[（64．3±3．6）％vs（43．9±2．1）％,P〈0．05],同时负载抗原的DC的CIK对A549细胞的体外下细胞毒活性增强。结论DC与CIK细胞共培养后可提高CIK细胞的增殖速率,提高CIK细胞表型的表达水平,增强CIK抗肺癌的活性．将来可作为一种临床有效的过继免疫治疗策略。     

Analysis of the role of palmitoleic acid in acute anterior uveitis

PurposeTo study the role of palmitoleic acid (PA) in the pathogenesis of acute anterior uveitis (AAU).MethodsPA levels in feces from AAU patients were measured by gas chromatography coupled with a mass spectrometer (GC-MS) and compared with samples obtained from healthy individuals. Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and flow cytometry (FCM) were used to assess the effect of PA on dendritic cells (DCs) and CD4⁺T cells obtained from mice, AAU patients and healthy individuals. C57BL/6 mice were fed with PA or vehicle and experimental autoimmune uveitis (EAU) was induced with a human retinal IRBP651-670 peptide. Disease severity of EAU was evaluated by clinical manifestation and histology. Differentiation of splenic Type 1 helper T cells (Th1) and Th17 cells was evaluated by FCM. Tandem mass tag (TMT)-based proteomics analysis was used to identify differentially expressed proteins following incubation of DCs with PA.ResultsThe fecal concentration of PA was increased in AAU patients as compared with healthy individuals. In vitro, PA promoted apoptosis of DCs and inhibited the secretion of TNF-α from mouse bone-marrow-derived dendritic cells (BMDCs) as well as in DCs from AAU patients and healthy individuals. It only decreased DCs surface marker expression and IL-12p70 secretion in BMDCs and healthy individuals DCs but not in AAU patient DCs. PA-treated BMDCs inhibited Th cell differentiation from mouse naïve CD4⁺T cells and IL-17 and IFN-γ secretion in co-culture supernatants. PA also inhibited the differentiation of Th cells and secretion of IFN-γ and IL-17 in CD4⁺T cells from mice, AAU patients and healthy individuals. In vivo, PA-treated EAU mice showed milder clinical and histopathological intraocular manifestations as compared with the control group. PA feeding inhibited differentiation of splenic Th17 cells, whereas Th1 cells were not affected. Up to 30 upregulated and 77 downregulated proteins were identified when comparing PA-treated DCs with controls.ConclusionAn increased expression of fecal PA was observed in AAU patients. PA was shown to have immunoregulatory effects on DCs and CD4⁺T cells and attenuated disease severity in EAU mice.