2,3-吲哚醌抗肿瘤作用研究

目的研究2,3-吲哚醌的抗肿瘤作用及机制。方法观察2,3-吲哚醌对小鼠肉瘤(S180)、小鼠肝癌(H22)、小鼠艾氏腹水瘤实体型(EC)和腹水型(EAC)的抗肿瘤作用;免疫组化法测定药物对S180肿瘤组织中PCNA、Bcl-2蛋白表达的影响;核染色法(Hoechst33258染色)和MTT法观察2,3-吲哚醌对人神经母瘤(SH-SY5Y)细胞体外促凋亡和抗增殖作用。结果2,3-吲哚醌对3种小鼠移植性肿瘤有抑制作用,对荷瘤鼠血液白细胞水平无影响;2,3-吲哚醌可抑制S180肿瘤组织中PCNA,Bcl-2蛋白表达;2,3-吲哚醌可促进人神经母瘤细胞凋亡并抑制其增殖。结论2,3-吲哚醌有抗肿瘤作用,其机制与抑制肿瘤细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

半夏提取物抗菌抗炎及其抗肿瘤药理作用研究进展

半夏提取物对真菌、革兰阳性和革兰阴性细菌均有抗菌作用,其中有效成分半夏苷是其抗菌活性成分之一。半夏提取物对早期、增殖期炎症以及对变态反应性炎症均有抗炎作用,其抗炎作用机制可能与刺激糖皮质激素释放和抑制糖皮质激素消除代谢的糖皮质激素样作用有关。半夏提取物中生物碱、有机酸、苷、多糖等多种成分可能参与抗炎活性,经体外实验发现半夏提取物中的多种成分(包括蛋白类成分)具有抗肿瘤活性的作用,用半夏多糖给荷瘤小鼠灌胃,能抑制小鼠体内S180、H22、EAC等癌细胞的生长。综述半夏提取物的抗菌抗炎和抗肿瘤药理作用文献,并对其研究研进展做了分析。     

Netrin-1抑制受体Unc5H4诱导人神经母细胞瘤细胞凋亡

目的 研究依赖性受体Unc5H4诱导人神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)细胞系SH-SY5Y细胞凋亡而其配体Netrin-1抑制其凋亡诱导的作用。方法 人NB细胞系SH-SY5Y细胞中转染Unc5H4质粒,在有/无配体Netrin-1作用下进行平板克隆形成实验,探讨Unc5H4是否诱导细胞凋亡以及诱导细胞凋亡作用是否受Netrin-1蛋白作用的影响。进一步在SH-SY5Y细胞中表达Unc5H4,在阿霉素(ADR)刺激下,在有/无配体Netrin-1蛋白作用时检测Unc5H4蛋白条带的变化,即Unc5H4释放死亡结构域后的截断蛋白诱导细胞凋亡的变化。结果 Caspase-3活性检测结果显示,过表达Unc5H4可诱导SH-SY5Y细胞发生凋亡,其相对Caspase-3活性(180%±20%)明显高于对照组(100%),差异有显著统计学意义(P<0.01)。而加入Netrin-1组细胞的相对Caspase-3活性(112%±14%)明显低于无Netrin-1组(180%±20%),差异有统计学意义(P<0.01),与对照组(100%)相比差异无统计学意义。SH-SY5Y细胞中转染Unc5H4质粒,在同时受到ADR诱导的DNA损伤时,在无Netrin-1蛋白作用下,可以检测到Unc5H4截断蛋白(酶切死亡结构域,60 kDa)的表达,而Netrin-1能够阻止Unc5H4蛋白的截断,从而阻止其诱导凋亡的作用。结论 依赖性受体Unc5H4能够诱导人NB细胞凋亡,其配体Netrin-1能够通过阻止其发生蛋白截断而抑制其诱导凋亡的功能,从而使NB细胞获得增殖。     

蜗牛多肽混合物抗过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞损伤的作用

目的观察蜗牛多肽混合物对过氧化氢(H2O2)诱导SH-SY5Y细胞氧化损伤的抑制作用及其可能机制。方法用H2O2诱导SH-SY5Y细胞损伤,MTT法测定细胞存活率;39～1250 mg·L-1蜗牛多肽混合物处理后,Hoechst染色检测细胞凋亡;罗丹明123染色检测线粒体通透性;细胞免疫化学技术和Western blot技术分别检测增殖细胞核抗原(PCNA)和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达。结果 1.54 mmol·L-1H2O2可诱导SH-SY5Y细胞凋亡。用39～156 mg·L-1浓度的蜗牛多肽混合物处理后,H2O2诱导的SH-SY5Y细胞凋亡数量明显减少,同时可减少H2O2引起的线粒体通透性增加,升高PCNA与BDNF的表达(P﹤0.01)。结论蜗牛多肽混合物可抑制过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,其作用机制可能与其增加细胞PCNA与BDNF的表达有关。     

荔枝核对小鼠S180、EAC肿瘤细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的影响研究

目的:研究荔枝核对小鼠S180、EAC肿瘤细胞Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。方法:采用小鼠腋下接种瘤株的方法,复制EAC、S180及肝癌荷瘤动物模型。小鼠EAC、S180细胞与肝癌细胞混悬液分别用生理盐水按1∶1进行稀释,制成含瘤腹水混悬液。小鼠在给药前24h进行腋窝皮下接种,每只0·2mL,整个操作在无菌条件下60min内完成。连续给药10d,观察EAC、S180肿瘤和肝癌肿瘤细胞的生长情况。结果:荔枝核能够显著抑制EAC、S180肿瘤和肝癌肿瘤细胞的生长。结论:荔枝核具有抑制小鼠EAC、S180、肝癌细胞的作用;具有抑制小鼠S180、EAC体内、外细胞生长的作用;并能促进肿瘤细胞凋亡,从而发挥抗肿瘤的作用。     

黄精多糖抗肿瘤作用的实验研究

目的研究黄精多糖对H22实体瘤、S180腹水瘤的生长抑制作用和对荷瘤小鼠免疫调节作用。方法小鼠接种H22实体瘤或S180腹水瘤后随机分组,灌胃给予不同剂量[100、200、400mg/(kg.d)]的黄精多糖,以生理盐水和环磷酰胺为空白对照组和阳性对照组,计算黄精多糖对小鼠H22实体瘤生长的抑制率,脾脏指数和胸腺指数,以及S180腹水型荷瘤小鼠的存活时间。结果给予黄精多糖灌胃的荷瘤小鼠的脾脏指数和胸腺指数显著增加;低、中、高剂量的黄精多糖对H22实体瘤的抑瘤率分别是(34.93、43.44、56.25)%;中、高剂量的黄精多糖可以显著延长S180腹水型荷瘤小鼠的存活时间。结论黄精多糖有显著的抗肿瘤作用和免疫调节活性。     

羊栖菜多糖抗肿瘤作用及其作用机制的研究

目的观察羊栖菜多糖对6种不同组织肿瘤的抑瘤作用，并对其作用机制进行了讨论。方法通过对S180、H22荷瘤小鼠瘤重和生存时间的研究，观察了羊栖菜多糖的体内抗肿瘤作用，采用MTT法和集落形成实验法观察羊栖菜多糖的体外抗肿瘤作用。采用流式细胞仪观察羊栖菜多糖对肿瘤细胞周期及细胞凋亡的影响。结果羊栖菜多糖对人胃癌细胞SGC-7901和人直肠癌COLO-205有较好的疗效。羊栖菜多糖可阻滞SGC-7901人胃癌细胞内Go／G，期进入S期，升高细胞凋亡指数(APO％)。结论羊栖菜多糖对人胃癌细胞和直肠癌细胞效果较好，这一作用是通过诱导肿瘤细胞凋亡达到的。     

艾迪冻干粉抗肿瘤作用的实验研究

目的 研究艾迪冻干粉的抗癌活性，为临床应用提供实验依据。方法应用小鼠S180、H22肿瘤体内抗肿瘤试验和体外MTT法检测艾迪冻干粉对S180、H22、HepG2等3种不同来源肿瘤细胞的生长抑制作用；采用Hoechst 33342/PI双染法检测药物对人肝癌细胞株HepG2诱导凋亡的作用。结果艾迪冻干粉可以通过直接的细胞毒作用和诱导细胞凋亡对小鼠肿瘤细胞S180、H22 和人肝癌细胞HepG2 起到生长抑制作用；MTT法研究结果表明，该药物对S180、H22、HepG2细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为(0.521±0.272)，(0.801±0.333)，(0.588±0.376) mg·mL^-1。结论艾迪冻干粉具有抗肿瘤作用，可能成为临床治疗癌症的有效药物。     

熊果酸的抗肿瘤作用

目的 研究熊果酸的抗肿瘤活性.方法 体外用MTT比色法测定熊果酸对肿瘤细胞HepG2和S180的增殖抑制作用,再用DNA凝胶电泳法测定熊果酸对HepG2细胞凋亡的诱导作用;体内采用小鼠实体瘤模型,观察熊果酸对HepG2和S180实体瘤的抑制作用.结果 熊果酸对HepG2和S180的增殖有良好的抑制作用,48h内对细胞半数生长的抑制剂量(IC50)分别为12.5μg/ml和13.9μg/ml.同时熊果酸能够诱导HepG2发生凋亡.20.0μg/ml熊果酸对HepG2和S180实体瘤抑制率分别达到52.98%和44.41%.结论 熊果酸通过抑制增殖和诱导凋亡对肿瘤细胞株HepG2和S180表现出良好的抗肿瘤活性.     

FAC对L_(1210)荷瘤小鼠的肿瘤抑制作用及对免疫功能的影响

沙苑子具有补肝、益肾、固精、缩尿的作用[1].FAC(flavoroids of astragali complanali)是沙苑子的乙醇提取物,其主要成分是总黄酮.研究表明FAC具有体外诱导白血病细胞凋亡、体内抗S180、H22肿瘤生长的作用;其抗肿瘤同时能显著增加小鼠胸腺、脾脏湿重[2,3].本文探讨FAC对L_(1210)倚瘤小鼠腹水生长及相关免疫功能指标的影响.     

女贞子多糖抗肿瘤作用研究

目的探讨女贞子多糖(LLP)的抗肿瘤作用及机制。方法观察LLP对小鼠肉瘤(S180)、小鼠肝癌(H22)的抑制作用;采用MTT法观察LLP对人肝癌细胞(SMMC-7721)增殖的影响;ConA刺激T-淋巴细胞法研究LLP的免疫刺激作用。结果LLP对S180、H22实体瘤均有抑制作用(P<0.05);对SMMC-7721肿瘤细胞无直接杀伤作用,可提高Co-nA对T淋巴细胞刺激的转换率,提高由淋巴细胞YAC-1所致NK细胞的活性。结论LLP具有抗实体肿瘤的作用,LLP抗实体瘤的作用与其提高机体免疫,改善机体免疫能力而抑制肿瘤细胞生长有关。     

相思子蛋白P2抗肝癌作用及对端粒酶活性影响

目的研究相思子蛋白P2对肝癌细胞生长的抑制作用及机制。方法体外实验:MTT法检测相思子蛋白P2对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用。流式细胞仪检测对HepG2细胞周期和细胞凋亡的影响。TRAP-SYBR-Green染色法检测相思子蛋白P2作用前后细胞端粒酶活性的改变。体内实验:相思子蛋白P2 50、75、100μg.kg-1连续灌胃给药10 d,观察对小鼠肝癌H22移植性肿瘤的生长抑制作用。小鼠口服给药急性毒性观察。结果相思子蛋白P2可明显抑制HepG2细胞增殖,IC50值为5.172×10-3 mg.L-1。在5×10-5～1×10-3 mg.L-1剂量作用下,可引起HepG2细胞凋亡。相思子蛋白P2主要将细胞周期滞留在S期,从而抑制了肿瘤细胞增殖。同时可使细胞端粒酶活性明显降低,其下调端粒酶活性的作用随药物浓度的增加而明显增强。相思子蛋白P2对小鼠H22肝癌细胞生长有明显抑制作用,100μg.kg-1抑瘤率达62.47%,且对胸腺和脾脏指数的影响较环磷酰胺小。小鼠口服给药LD50值为6.77 mg.kg-1。结论相思子蛋白P2体内外均可明显抑制肝癌细胞的生长,其抗肿瘤作用可能与下调细胞端粒酶活性、改变细胞周期分布,诱导细胞凋亡有关。     

Proanthocyanidin from grape seeds enhances anti-tumor effect of doxorubicin both in vitro and in vivo

The purpose of this study was to investigate the synergistic anti-tumor effect of proanthocyanidin (PA) and doxorubicin (DOX) on K562, A549 and CNE cells in vitro and experimental transplantation Sarcoma 180 (S180) and Hepatoma 22 (H22) in vivo and to explore the mechanism of its action. PA 12.5 approximately 100 mg/l inhibited proliferation of K562, A549, and CNE cells in vitro in a time- and concentration-dependent manner as determined by the microculture tetrazolium (MTT) assay. A combination of PA 12.5, 25 mg/l with DOX 0.01 approximately 1 mg/l treatment synergistically inhibited proliferation of K562, A549, and CNE cells with decreased IC50 values. Under the confocal laser scanning microscope, intracellular DOX, Ca2+, and Mg2+ concentrations were greatly increased whereas pH value and mitochondrial membrane potential were markedly reduced in K562 cells after treatment with a combination of PA plus DOX. At the same time, K562 cells showed morphological changes of apoptosis following treatment with PA plus DOX, and the administration of PA 25 mg/l plus DOX 0.3 mg/l for 24 h resulted in a significant increase in the percentage of apoptosis by flow cytometry as compared with DOX 0.3 mg/l alone (p < 0.05). In vivo experiments showed that a combination of PA 200 mg/kg i.g. with DOX 2 mg/kg i.p. treatment displayed an inhibitory effect on the growth of transplantation tumor S180 and H22 in mice compared with the DOX only group (p < 0.01). Taken together, these results suggest that PA enhances the DOX-induced anti-tumor effect and its mechanism is attributed to the promotion of DOX-induced apoptosis through increasing intracellular DOX, Ca2+ and Mg2+ concentrations, and reducing pH value and mitochondrial membrane potential.     

牛樟芝水提取物抗过敏作用及其机制研究

目的 研究牛樟芝水提物的抗过敏作用并初步探讨其作用机制。方法 采用大鼠被动皮肤过敏模型、小鼠迟发型超敏模型、小鼠全身皮肤瘙痒模型、小鼠腹腔毛细血管通透性模型,观察牛樟芝水提物在体抗过敏作用。采用体外培养的RBL-2H3肥大细胞,观察牛樟芝水提物对细胞增殖及凋亡的影响,初步探讨其抗过敏反应的作用机制。结果 体内试验中,牛樟芝水提物显著降低大鼠被动皮肤过敏反应,明显降低小鼠耳肿胀度、胸腺指数及脾指数,提高右旋糖酐所致皮肤瘙痒阈值,减少小鼠瘙痒次数,抑制组胺所致血管通透性上升;体外试验中,其剂量相关性的抑制RBL-2H3细胞增殖,促进细胞凋亡。结论 牛樟芝水提取物有一定的抗过敏作用,其机制与促进RBL-2H3细胞凋亡有关。     

Activation of c-Jun N-terminal protein kinase is a common mechanism underlying paraquat- and rotenone-induced dopaminergic cell apoptosis.

Parkinson's disease (PD) is characterized by selective loss of dopaminergic neurons in the substantia nigra of the brain. Although the underlying causes are not well characterized, epidemiological studies suggest an elevated risk of PD with occupational pesticide exposure. Here, we utilized pheochromocytoma (PC) 12 and SH-SY5Y cells as well as rat primary cultured dopaminergic neurons to investigate mechanisms for dopaminergic cell death induced by paraquat and rotenone, pesticides that are used to model PD in rodents. Both paraquat and rotenone induce selective loss of dopaminergic neurons in primary cultures. We discovered that paraquat induces apoptosis in PC12 cells but not in SH-SY5Y cells, while rotenone exposure causes apoptosis in SH-SY5Y cells but not in PC12 cells. The selective ability of paraquat and rotenone to induce apoptosis in different cell lines correlates with their ability to activate c-Jun N-terminal protein kinase (JNK) and p38 mitogen-activated protein kinases. Furthermore, JNK and p38 are required for rotenone-induced apoptosis in SH-SY5Y cells (K. Newhouse et al., 2004, Toxicol. Sci. 79, 137-146) as well as primary neurons, and for paraquat-induced apoptosis in PC12 cells. However, JNK but not p38 plays a role in paraquat-induced loss of primary cultured dopaminergic neurons. Our data identify JNK activation as a common mechanism underlying dopaminergic cell death induced by both paraquat and rotenone in model cell lines and primary cultures.     

鱼藤素对非小细胞肺癌细胞体内外增殖的影响

目的探究鱼藤素(deguelin)对非小细胞肺癌细胞A549与裸鼠移植瘤增殖的影响。方法采用CCK-8法测定鱼藤素对A549细胞增殖的抑制作用;通过赫斯特染色和AnnexinV-FITC/PI双染实验探究鱼藤素对细胞凋亡形态以及细胞凋亡率的影响;流式细胞术测定鱼藤素对A549细胞周期的影响;此外,通过裸鼠移植瘤模型的体内实验和HE染色探究鱼藤素对裸鼠移植瘤的影响。结果鱼藤素呈浓度和时间依赖性抑制A549细胞增殖;赫斯特染色和AnnexinV-FITC/PI双染实验进一步证实了鱼藤素能诱导A549细胞凋亡;鱼藤素呈浓度依赖性阻滞A549细胞周期于G 2/M期;裸鼠移植瘤模型实验和HE染色实验发现,鱼藤素对A549裸鼠移植瘤的生长有明显抑制作用(P<0.01)。结论鱼藤素对肺癌细胞A549具有显著抑制作用,为鱼藤素的抗肿瘤活性提供新的基础。     

黄芩苷通过上调SIRT1保护SH-SY_5Y氧化应激的损伤

观察黄芩苷(baicalin,BL)对过氧化氢诱导SH-SY5Y细胞损伤的作用,并初步探讨SIRT1是否是其发挥作用的靶点及其可能机制。培养的人神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y细胞加入黄芩苷(25、50及100μmol·L-1)预孵育12 h,加入H2O2(150μmol·L-1)作用24 h诱导产生氧化损伤,应用MTT比色法检测细胞存活率,测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、一氧化氮(NO)含量;并采用流式细胞仪检测细胞凋亡及应用免疫荧光组化法检测Caspase-3的活性、RT-PCR检测SIRT1水平。结果表明,与H2O2模型组比较,黄芩苷(50和100μmol·L-1)组的细胞存活率增高(P<0.05、P<0.01),而LDH、NO的释放量及细胞凋亡数(P<0.05、P<0.01)、Caspase-3的表达量均减少;SIRT1 mRNA表达明显(P<0.05、P<0.01)。黄芩苷对H2O2损伤的SY5Y细胞具有保护作用,可减轻神经细胞的损伤、抑制细胞的凋亡,其作用机制可能是通过上调SIRT1水平而抑制Caspase-3表达实现的。