环孢霉素A治疗哮喘的实验研究

目的 探讨环孢霉素Ａ对哮喘的治疗作用及机制,方法 ２１只豚鼠随机分为正常组,模型组及环孢霉素Ａ组。用卵白蛋白制作豚鼠哮喘模型,用环孢霉素Ａ２５ｍｇ／（ｋｇ．ｄ）连续腹腔注射３ｄ,检测外周血Ｔ淋巴细胞增殖反应,右侧肺脏做支气管肺泡灌洗液中细胞成分分析,左侧肺脏做组织学检查。结果 环孢霉素Ａ组Ｔ细胞增殖刺激指数显著低于模型组（Ｐ〈０．０１）;支气管肺泡灌洗液中细胞总数,嗜酸性粒细胞计数也显著低于模型组     

母牛分枝杆菌菌苗对哮喘豚鼠肺组织嗜酸性粒细胞凋亡的影响

目的 研究母牛分枝杆菌菌苗对哮喘豚鼠肺组织嗜酸性粒细胞凋亡的影响。方法30只豚鼠随机分为对照组、哮喘组及母牛分枝杆菌菌苗组各10只，应用卵清蛋白建立哮喘模型。最后一次激发豚鼠后，计数支气管肺泡灌洗液中炎症细胞，观察肺组织病理改变，应用末端标记法研究肺组织嗜酸性粒细胞的凋亡。结果母牛分枝杆菌菌苗组豚鼠支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞数量为(0.22±0.12)×108·L^-1，显著低于哮喘组的(1.18±036)×108·L^-1 (P＜0.01)；肺组织哮喘炎症反应明显轻于哮喘组；肺组织嗜酸性粒细胞凋亡指数为(23.8±5.4)%，显著高于哮喘组的(4.6±0.7)%( P＜0.01)。结论母牛分枝杆菌菌苗能减少哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞数量，减轻气道哮喘炎症反应，与其诱导哮喘豚鼠肺组织嗜酸性粒细胞凋亡有关。     

磷酸酰肌醇-3激酶抑制剂对小鼠气道炎症影响的实验研究

目的观察磷酸酰肌醇-3激酶（P13K）抑制剂LY294002对卵白蛋白诱导哮喘小鼠气道炎症的影响。方法Balb／c小鼠30只，采用随机数字表法分为3组，每组10只：LY294002处理组、卵白蛋白组、正常对照组。通过卵白蛋白多次腹腔注射致敏和反复雾化激发，建立哮喘小鼠模型。末次抗原激发后48h收集支气管肺泡灌洗液和骨髓标本，计数细胞总数和嗜酸性粒细胞，并行肺组织学检查。结果与卵白蛋白组比较，LY294002处理组支气管肺泡灌洗液中细胞总数及嗜酸性粒细胞绝对数明显减少（P〈0．05）：肺组织中细支气管、血管周围嗜酸性粒细胞浸润得到控制，气道黏液分泌减少。结论P13K特异性抑制剂LY294002对卵白蛋白致敏的哮喘小鼠气道炎症具有抑制作用。     

银杏内酯吸入剂对哮喘模型豚鼠气管嗜酸性粒细胞浸润的影响

目的:探讨银杏内酯吸入剂对哮喘模型豚鼠气道嗜酸性粒细胞浸润的影响。方法:将豚鼠随机分为7组,每组8只,分别为哮喘模型组,银杏内酯吸入剂低、中、高剂量组(剂量分别为5、10、20mg·kg-1),银杏内酯腹腔注射(ip)组(剂量为20mg·kg-1),地塞米松组(剂量为10mg·kg-1)和正常对照组,计数肺灌注液(BALF)和支气管中的嗜酸性粒细胞(EOS)数。结果:与正常对照组比较,模型组BALF中的EOS显著增多,银杏内酯吸入剂组可显著减少BALF和支气管中的EOS浸润数(P<0.05)。结论:银杏内酯吸入剂能对抗哮喘豚鼠气道嗜酸性粒细胞浸润,可作为治疗支气管哮喘的一种新方法。     

火把花根片对哮喘豚鼠气道炎症的作用

目的探讨火把花根片对哮喘豚鼠气道慢性炎症的作用。方法建立哮喘豚鼠动物模型 :将豚鼠 2 6只随机分为 3组 ,A组为火把花根组 (9只 ) ,B组为地塞米松组 (9只 ) ,C组为哮喘对照组 (8只 ) ,观测豚鼠支气管肺泡灌洗液 (BALF)细胞总数、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、中性粒细胞数量以及蛋白浓度和肺组织病理学的变化。结果A组BALF细胞总数、以嗜酸性粒细胞为主的炎性细胞数量及蛋白浓度均低于C组 (P <0 0 1) ,其肺组织气道慢性炎症表现亦较C组减轻。结论火把花根片可显著抑制哮喘豚鼠的气道慢性炎症     

银杏内酯B协同地塞米松对小鼠哮喘模型气道炎症和辅助T细胞亚群的影响

目的：探讨银杏内酯B协同地塞米松对支气管哮喘气道变应性炎症及辅助T细胞亚群的作用。方法：40只BALB/c小鼠随机分成正常对照组、哮喘对照组、地塞米松组、银杏内酯B组和联合干预组,每组8只。除正常对照组外,其余4组均造成哮喘模型,地塞米松组、银杏内酯B组和联合干预组给予相应的药物。收集支气管肺泡灌洗液（BALF）,行白细胞（WBC）及嗜酸性粒细胞（EOS）计数;应用EUSA法测定BALF中IFN-γ和IL-4水平。结果：BALF中WBC及EOS计数：3个用药组较哮喘对照组明显减少（P〈0．01）,联合干预组减少的程度大于地塞米松组、银杏内酯B组（P〈0．05或P〈0．01）。3个用药组小鼠BALF上清中IFN—γ和IL-4水平与哮喘对照组比较,银杏内酯B组、地塞米松组和联合干预组BALF上清中IFN-γ和IL-4水平分别增高和降低（P〈0．05或P〈0．01）,而联合干预组增高和降低的程度大于地塞米松组、银杏内酯B组（P〈0．05或P〈0．01）。结论：银杏内酯B能减轻小鼠哮喘模型BALF中炎性细胞浸润,并减少IL-4的水平;银杏内酯B与激素具有协同抗炎作用;同时具有更好的调节Th亚群失衡的作用。     

慢性轻度不可预见性应激对支气管哮喘大鼠的影响

目的 观察慢性轻度不可预见性应激对支气管哮喘大鼠哮喘病情的影响.方法 通过对哮喘组及实验组大鼠腹腔注射卵蛋白,并雾化吸入卵蛋白制备支气管哮喘模型.在雾化吸入卵蛋白后对实验组进行连续28 d的慢性轻度不可预见性应激.此后以无创小动物呼吸功能测量仪检测大鼠呼吸功能、HE染色观察肺组织病变、并支气管灌洗液中细胞数量及分类.结果 ①与正常组比较,哮喘组呼吸功能降低(P<0.05);与哮喘组比较,哮喘组大鼠呼吸功能进一步降低(P<0.05).②与正常组比较,哮喘组大鼠支气管灌洗液中白细胞总数及嗜酸性粒细胞均显著升高(P<0.05);与哮喘组比较,哮喘组大鼠支气管灌洗液中自细胞总数及嗜酸性粒细胞均显著升高(P<0.05).③与哮喘组大鼠比较,实验组大鼠支气管壁上皮细胞较哮喘组排列更加紊乱,部分结构破坏,白细胞浸润较哮喘组更加显著,肺泡失去正常形态.结论 慢性轻度不可预见性应激可以通过加重哮喘病情,临床工作中应注重对哮喘患者进行心理疏导、避免心理应激.     

秦氏循经敷贴对实验性哮喘豚鼠的作用

目的：探讨中药秦氏循经敷贴对哮喘豚鼠的作用。方法：30只健康豚鼠随机分为空白对照组（A组）、哮喘模型组（B组）和秦氏循经敷贴组（C组）,每组10只。以鸡卵蛋白攻击致敏。C组敷贴秦氏循经敷贴;B组敷贴含生理盐水的医用纱布。于末次敷药后检测豚鼠外周血嗜酸性粒细胞百分比、中性粒细胞百分比和白细胞总数,肺组织和支气管HE染色后观察病理改变。结果：与A组相比,B组外周血嗜酸性粒细胞百分比显著升高（P〈0.05）,C组较B组显著降低（P〈0.05）;中性粒细胞百分比和白细胞总数3组间无显著性差异（P〉0.05）。B组肺组织大量炎症细胞浸润,部分肺泡腔阻塞、实变,肺泡间隔明显增宽,支气管管壁血管扩张、管壁增厚;C组炎症细胞浸润较少,肺泡充气,无间隔增宽;A组炎症细胞浸润程度较轻,无支气管壁增厚。结论：秦氏循经敷贴能改善实验性哮喘豚鼠的肺及支气管的炎症反应,减少外周血嗜酸性粒细胞百分比,对哮喘豚鼠具有治疗作用。     

小儿止咳平喘露的平喘作用及其对外周血可溶性细胞黏附分子-1的影响

目的在小儿止咳平喘露平喘、镇咳、祛痰的实验基础上，观察其对哮喘动物模型肺泡灌洗液嗜酸性粒细胞计数及外周血可溶性细胞黏附分子-1（sICAM-1）的影响。方法①将预选合格的豚鼠30只随机分为3组，即正常对照组，细辛脑组，小儿止咳平喘露组，每组10只。采用豚鼠组胺引喘法观察小儿止咳平喘露的平喘作用。②采用豚鼠枸橼酸引咳法观察小儿止咳平喘露的镇咳作用，给药方式及剂量同平喘试验。③将ICR健康小鼠30只，随机分为3组，分组方式同平喘试验，采用小鼠气道酚红排泄法观察小儿止咳平喘露的祛痰作用。④将40只健康豚鼠随机分为4组，即正常对照组、模型组、细辛脑组、小儿止咳平喘露组，每组10只。建立卵蛋白致敏豚鼠哮喘模型，在肺泡灌洗液中计数白细胞总数和嗜酸性粒细胞数，并用ELISA法检测豚鼠血清sICAM-1的表达水平。结果小儿止咳平喘露能明显延长组胺诱导的豚鼠引喘潜伏期和枸橼酸引起的豚鼠咳嗽潜伏期，促进小鼠气道酚红排泄，降低哮喘豚鼠肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞计数和血清sICAM-1水平。结论小儿止咳平喘露具有平喘、止咳、祛痰作用，其作用机制可能与降低哮喘豚鼠肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞计数和血清sICAM-1水平有关。     

雷公藤内酯醇诱导哮喘豚鼠嗜酸性粒细胞凋亡的作用研究

本文研究了雷公藤内酯醇诱导哮喘豚鼠肺内嗜酸性粒细胞（EOS）凋亡的作用,结果发现,雷公藤内酯醇能诱导哮喘豚鼠支气管肺泡灌洗液中的EOS凋亡和EOS的数量减少,并抑制EOS的bcl-2表达,以上提示雷公藤内脂醇能改善哮喘豚鼠肺内的EOS浸润,具有潜在的临床应用价值。     

孟鲁司特对哮喘豚鼠气道嗜酸粒细胞炎症的抑制作用

目的　研究白三烯受体拮抗剂孟鲁司特 (mon telukast,MK )对哮喘豚鼠气道嗜酸性粒细胞 (Eosinophil,Eos)炎症的影响 ,探讨孟鲁司特拮抗哮喘气道炎症的可能机制。方法　以卵白蛋白致敏豚鼠制备哮喘模型。用密度梯度分离法分离并计数支气管肺泡灌洗液 (BALF)中不同密度的嗜酸性粒细胞 ;采用TUNEL技术原位检测嗜酸性粒细胞凋亡 ;通过ELISA法检测BALF中IL 5的含量 ;采用荧光酶标记法在PharmaciaUnicap 10 0System中测定BALF中嗜酸性粒细胞阳离子蛋白 (ECP)的水平。结果　孟鲁司特能降低哮喘豚鼠BALF中Eos的数量 ;在孟鲁司特治疗组 ,嗜酸性粒细胞凋亡指数明显升高 ,BALF中IL 5和ECP的含量降低 ,与模型组比较差异均有显著性。结论　降低气道IL 5和ECP的水平 ,促进嗜酸性粒细胞凋亡 ,减少嗜酸性粒细胞浸润 ,可能是白三烯受体拮抗剂孟鲁司特拮抗哮喘气道炎症的一个重要机制。     

孟鲁司特对哮喘豚鼠气道嗜酸性粒细胞凋亡及Fas mRNA表达的影响

目的研究白三烯受体拮抗剂孟鲁司特(montelukast,MK)对哮喘豚鼠气道嗜酸性粒细胞(eosinophil,Eos)凋亡和Fas mRNA表达的影响。方法以卵白蛋白致敏豚鼠制备哮喘模型。用密度梯度离心法分离并计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中的嗜酸性粒细胞；采用TUNEL技术原位检测嗜酸性粒细胞凋亡；通过逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)技术检测嗜酸性粒细胞Fas mRNA的表达。结果孟鲁司特能显著降低哮喘豚鼠BALF中Eos的数量；在孟鲁司特治疗组，嗜酸性粒细胞凋亡指数明显升高，Fas mRNA的表达显著增强，与模型组比较均有显著性差异。结论嗜酸性粒细胞凋亡与Fas mRNA表达增加高度相关；增强气道嗜酸性粒细胞Fas mRNA的表达，促进其凋亡，可能是孟鲁司特拮抗哮喘气道炎症的一个重要机制。     

雷公藤多甙对哮喘豚鼠嗜酸性粒细胞凋亡的影响

目的　探讨雷公藤多甙治疗哮喘的机制。方法　应用原位末端标记技术 (TUNEL)、形态学观察 ,观察雷公藤多甙对哮喘豚鼠体内嗜酸性粒细胞 (Eos)凋亡的影响。结果　 (1)哮喘豚鼠体内Eos凋亡率显著低于正常豚鼠 (P <0 0 5 )。 (2 )哮喘豚鼠应用雷公藤多甙治疗后 ,体内Eos凋亡率显著增加 (P <0 0 1) ,并伴随气道炎症和哮喘反应的减轻。结论　诱导哮喘体内Eos凋亡是雷公藤多甙治疗哮喘的重要机制     

卡介菌多糖核酸对哮喘小鼠胸腺活化调节趋化因子及mRNA表达的影响

目的观察卡介菌多糖核酸(BCG-PSN)对小鼠哮喘胸腺活化调节趋化因子(thymus and activation regulated chemo-kine,TARC)及mRNA表达的影响。方法以卵清白蛋白(OVA)致敏和激发建立小鼠哮喘模型。30只清洁级♂Balb/c小鼠随机分为3组,每组10只:正常对照组、哮喘组、BCG-PSN治疗组。末次激发24h后留取支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织。BALF行细胞计数及分类;应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定BALF中TARC、IL-4和IFN-γ蛋白的浓度;光镜观察肺组织病理变化;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定肺组织中TARC mRNA的表达;采用免疫组织化学法测定肺组织中TARC蛋白的表达。结果与正常对照组相比,哮喘组BALF中细胞总数、嗜酸粒细胞(EOS)绝对值及百分比、TARC和IL-4浓度、肺组织中TARC蛋白及mRNA的表达均增高,BALF中IFN-γ浓度低于正常对照组。经BCG-PSN干预后,BALF中细胞总数、EOS绝对数及百分比,TARC、IL-4浓度较哮喘组均下降,肺组织中TARC蛋白及mRNA的表达较哮喘组均下调,BALF中IFN-γ浓度较哮喘组增高。免疫组化显示TARC蛋白主要表达于支气管上皮细胞。BALF中TARC浓度与EOS绝对值、IL-4浓度呈正相关。结论卡介菌多糖核酸可降低TARC在肺组织中的表达,降低气道炎症。     

1,8-桉油精对卵白蛋白致哮喘豚鼠的气道高反应性和炎症的抑制作用

目的探讨1,8-桉油精(1,8-cineol)对哮喘豚鼠肺功能的改善作用及其机制。方法豚鼠第0天和第7天ip给予0.5ml含卵白蛋白(OVA)20μg的氢氧化铝凝胶致敏,28d后OVA攻击制备哮喘模型。观察豚鼠OVA攻击后1h,1,8-桉油精10,30和100mg.kg-1对豚鼠吸入OVA后1,2,3,4,10,20和30min时气道阻力(Raw)和肺顺应性(Cdyn)变化及支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞数和细胞分类的影响,并测量豚鼠肺组织中嗜酸细胞阳离子蛋白(ECP)、白细胞介素4(IL-4)、IL-8和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量。观察豚鼠OVA攻击后17h再吸入乙酰甲胆碱(MCh)后,1,8-桉油精10,30和100mg.kg-1对Raw和Cdyn及BALF中白细胞数和细胞分类的影响,并测量豚鼠肺组织中ECP,IL-4,IL-8和TNF-α的含量。结果与正常对照组比较,豚鼠OVA攻击后1h,在4min时模型组Raw达到高峰;与模型组比较,1,8-桉油精30和100mg.kg-1明显抑制Raw增加(P<0.05);在3min时模型组Cdyn达到高峰,与模型组比较,1,8-桉油精10,30和100mg.kg-1均能明显抑制Cdyn降低(P<0.05);模型组豚鼠肺组织ECP,IL-4和TNF-α含量明显高于正常对照组(P<0.05);1,8-桉油精100mg.kg-1组ECP,IL-4和TNF-α含量均明显低于模型组(P<0.05),模型组与正常对照组豚鼠肺组织IL-8含量无明显差异。与模型组比较,1,8-桉油精100mg.kg-1能明显减少BALF中白细胞数和嗜酸性粒细胞比例(P<0.05)。致敏豚鼠OVA攻击17h后,模型组豚鼠Raw与正常对照组比较显著升高(P<0.05),模型组豚鼠Cdyn与正常对照组比较有显著性差异(P<0.01),1,8-桉油精100mg.kg-1对MCh引起的Raw的增加有明显的抑制作用,1,8-桉油精10,30和100mg.kg-1对MCh引起的Cdyn降低有明显的改善作用;与模型组相比,1,8-桉油精100mg.kg-1能明显减少BALF中白细胞数和中性粒细胞比例,降低肺组织ECP,IL-8和TNF-α含量(P<0.01);模型组与正常对照组豚鼠肺组织IL-4含量无明显差异;1,8-桉油精30mg.kg-1也能降低哮喘豚鼠肺组织中ECP和TNF-α含量(P<0.01)。结论在哮喘急性发作时,1,8-桉油精通过减少嗜酸性粒细胞,下调嗜酸性粒细胞的活性,从而抑制了哮喘的急性发作。在哮喘迟发相阶段,1,8-桉油精可通过下调IL-8水平,降低TNF-α活性,从而抑制或改善由IL-8水平升高导致的中性粒细胞聚集于支气管肺泡而直接引起的哮喘加重和持续状态。     

CCR3 monoclonal antibody inhibits airway eosinophilic inflammation and mucus overproduction in a mouse model of asthma

AIM: To explore the effect of a rat anti-mouse CC-chemokine receptor-3 (CCR3) monoclonal antibody (CCR3 mAb) on airway eosinophilia and mucus overproduction in asthmatic mice. METHODS: An asthma model was sensitized and challenged by ovalbumin (OVA) in male C57BL/6 mice. Asthmatic mice were given dual administration (intraperitoneal injection and aerosol inhalation) of CCR3 mAb or nonspecific rat IgG (ns-IgG). The number of total and differential inflammatory cells in the bronchial alveolar lavage fluid (BALF) was counted. Eosinophils number, the goblet cell percentage (GCP) and airway mucus index (AMI) were measured in the lung tissues. Interleukin (IL)-5 levels in the BALF were examined. The expression of MUC5AC and the epidermal growth factor receptor (EGFR) mRNA in the lung tissues was detected by semi-quantitative RT-PCR. The results were compared among the groups. RESULTS: CCR3 mAb significantly suppressed the increased eosinophils in the BALF and lung tissues in OVA-challenged mice compared with ns-IgG-treated mice. IL-5 levels in the BALF in CCR3 mAb and ns-IgG administration mice exhibited no obvious changes relative to OVA-challenged asthmatic mice. CCR3 mAb reduced the increased GCP and AMI after OVA challenge and decreased the enhanced expression of MUC5AC and EGFR mRNA in lung tissues in asthmatic animals. CONCLUSION: CCR3 mAb can significantly inhibit airway eosinophilia and mucus overproduction in asthmatic mice. Blockage of CCR3 may represent a new strategy to asthma therapy.     

粉尘螨滴剂对豚鼠特异性哮喘反应的脱敏作用

目的建立粉尘螨提取蛋白诱导的豚鼠哮喘模型，观察粉尘螨滴剂的脱敏作用。方法粉尘螨蛋白致敏豚鼠在抗原静脉注射攻击后测定气道阻力和肺动态顺应性；甲酰胆碱气雾吸入激发气道高反应性，计数和分类支气管肺泡灌洗液中的炎症细胞，观察肺组织病理学的改变。治疗组用粉尘螨滴剂舌下给药治疗，模型组滴入等量的生理盐水，正常对照组不作任何处理。结果模型组豚鼠经抗原攻击后气道阻力明显增加，肺动态顺应性明显降低；甲酰胆碱气雾吸入能激发气道高反应性；嗜酸性粒细胞浸润明显增加。粉尘螨滴剂治疗组与模型组比较，哮喘反应明显改善。结论粉尘螨滴剂长期舌下给药对豚鼠哮喘反应有明显的脱敏作用，为临床治疗提供了实验依据。     

Inhibition of platelet-activating factor- and zymosan-activated serum-induced chemotaxis of human neutrophils by nedocromil sodium, BN 52021 and sodium cromoglycate.

1. Inflammatory cells such as eosinophils and neutrophils are thought to contribute actively to the pathogenesis of asthma since they infiltrate into the lung tissue. These cells are mobilized by lipid-like and protein-like chemotactic factors. As illustrative examples of both groups, platelet-activating-factor (Paf) and zymosan-activated-serum (ZAS) were used in this study. The inhibitory effects of nedocromil sodium, the Paf antagonist BN 52021 and sodium cromoglycate on Paf- and ZAS-induced neutrophil chemotaxis were evaluated. 2. All tested drugs inhibited Paf-induced neutrophil chemotaxis with approximately the same potency (IC50 approximately 1 nM). 3. Nedocromil sodium and sodium cromoglycate were equally potent in inhibiting ZAS-induced neutrophil chemotaxis (IC50 = 0.1-1 microM), whereas BN 52021 was considerably less potent (IC30 = 10 microM). 4. To find out whether the drugs tested could inhibit early events in cell activation, their capacity to inhibit Paf- and ZAS-induced cytosolic free Ca2+-mobilization was investigated. BN 52021, at a concentration of 100 microM, completely inhibited Paf-induced Ca2+-mobilization and inhibited ZAS-induced Ca2+-mobilization by about 50%. Nedocromil sodium and sodium cromoglycate were ineffective.