雷公藤甲素抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的研究

目的：探讨雷公藤甲素对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞（cardi-acfibroblasts,CFb）增殖及α1（Ⅰ）型前胶原合成的影响。方法：建立AngⅡ诱导新生大鼠心肌纤维化细胞模型。采用四氮唑蓝（MTT）比色法测定细胞增殖;分别采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blot印迹法检测大鼠心肌成纤维细胞α1（Ⅰ）型前胶原mRNA及蛋白表达。结果：雷公藤甲素以剂量依赖性方式抑制心肌成纤维细胞增殖和α1（Ⅰ）型前胶原合成。结论：雷公藤甲素可以通过抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖和α1（Ⅰ）型前胶原合成从而抑制心肌纤维化。     

芦荟凝胶对人皮肤成纤维细胞的增殖作用及其机制研究

目的研究芦荟凝胶对人皮肤成纤维细胞增殖的影响及其作用机制。方法体外培养人皮肤成纤维细胞,MTT法测定芦荟凝胶作用后人皮肤成纤维细胞的增殖能力,用实时荧光定量PCR法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA水平,用免疫蛋白印迹法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果 MTT检测结果表明,芦荟凝胶对人皮肤成纤维细胞具有促增殖作用,且呈现时间依赖性和剂量依赖性。芦荟凝胶作用于人皮肤成纤维细胞72h后,Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA及蛋白的表达显著增加(P<0.05,P<0.01)。结论芦荟凝胶可通过促进人皮肤成纤维细胞增殖以及Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA和蛋白的表达加速创面愈合。     

苦参素对成纤维细胞增殖、形态学及转化生长因子β_1的影响

目的 :研究苦参素对成纤维细胞增殖、形态学及转化生长因子β1(TGF β1)表达的影响 ,阐明其抗肝纤维化的作用机制。方法 :用甲基噻唑基四唑MTT(methylthiazolyltetrazolium)比色法、HE染色及免疫细胞化学技术分别检测小鼠皮肤成纤维细胞(NIH3T3)增殖、形态学及TGF β1的表达。结果 :苦参素能明显抑制成纤维细胞增殖及TGF β1的表达 ,并呈剂量依赖性。结论 :苦参素可通过抑制成纤维细胞增殖及TGF β1的表达而起到抗肝纤维化作用。     

金雀异黄素和槲皮素对大鼠肝星状细胞增殖、胶原合成及Ⅰ型原胶原nRNA水平的影响(英文)

目的:研究金雀异黄素和槲皮素对HSC-T6大鼠肝星状细胞增殖和胶原合成及Ⅰ型原胶原mRNA表达的影响。方法:细胞增殖和胶原合成分别采用结晶紫染色法和[~3H]-脯氨酸掺入法。原胶原mRNA水平用RT-PCR法测定。结果:金雀异黄素(25-70μmol/L)和槲皮素(6.25-50μmol/L)浓度依赖抑制HSC-T6细胞增殖和胶原合成,对Ⅰ型原胶原mRNA表达也有抑制作用。结论:金雀异黄素和槲皮素抑制肝星状细胞增殖和胶原合成可能对肝纤维化有保护作用。     

丹酚酸B抗心肌纤维化的机制研究

目的:研究丹酚酸B(Sal B)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞增殖、Ⅲ型胶原分泌及基质金属蛋白酶9(MMP-9)、Smad2/3、Smad7蛋白表达的影响,探讨其抗心肌纤维化的作用机制。方法:将细胞分为空白对照组(培养液)、AngⅡ模型组和Sal B低、中、高浓度组(12.5、25、50μmol/L),用空白或含药培养液培养细胞1 h后,除空白对照组外的其余各组均加入1μmol/L的AngⅡ诱导细胞增殖,共同作用24 h。分别采用MTT法和苏木精-伊红染色法考察Sal B对细胞增殖的影响;采用Western blot法检测Sal B对细胞Ⅲ型胶原、MMP-9、Smad2/3、Smad7蛋白表达的影响。结果:与空白对照组比较,AngⅡ模型组细胞明显增殖,Ⅲ型胶原、MMP-9、Smad2/3蛋白表达明显增强,Smad7蛋白表达明显减弱,差异均有统计学意义(P<0.05);与AngⅡ模型组比较,Sal B各浓度组细胞的增殖均受到抑制,Ⅲ型胶原、MMP-9、Smad2/3蛋白表达均减弱,Smad7蛋白表达均增强,除Sal B低、中浓度组细胞Ⅲ型胶原与Sal B高浓度组细胞Smad2/3蛋白表达变化不显著外,其余各指标差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:Sal B抗心肌纤维化的作用可能与抑制心肌成纤维细胞的增殖,下调Ⅲ型胶原、MMP-9、Smad2/3蛋白表达和上调Smad7蛋白表达有关。     

牛磺酸抑制新生大鼠心肌重塑的体外研究

目的 通过牛磺酸对新生大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成及对I／Ⅲ型胶原比值的影响，从细胞水平探讨其在体外抑制心肌重塑的作用。方法 在培养的心肌成纤维细胞中加入不同浓度的牛磺酸，用羟脯氨酸法测定胶原量，MTT比色法检测细胞增殖情况，SDS-PAGE电泳测胶原I／Ⅲ型比值。结果 100mmol／L、200mmol／L牛磺酸用药24h和48h及50mmol／L用药72h后能明显抑制心肌成纤维细胞的增殖及胶原的合成，I／Ⅲ型胶原比值明显下降。结论 牛磺酸能通过抑制心肌成纤维细胞增殖和胶原合成，降低I／Ⅲ型胶原比值起到抗心肌重塑的作用。     

复方中药对肝星状细胞胶原合成与降解的影响

目的观察中药复方丹参对肝星状细胞胶原合成与降解的影响.方法选择肝星状细胞系作为体外研究对象,MTT法观察药物对细胞增殖的影响,ELISA法检测细胞上清液Ⅰ、Ⅲ、V型胶原含量,RNA-cDNA分子杂交检测细胞内Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原及TGF β1 mRNA稳态水平.逆转录多聚酶链反应检测间质胶原酶及金属蛋白酶组织抑制因子-1基因表达水平.结果中药复方丹参明显抑制肝星状细胞增殖且呈剂量依赖趋势,与对照组比较,中药组细胞上清液中Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原含量明显降低,细胞内Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原及TGF β1 mRNA稳态水平明显降低,间质胶原酶基因表达水平明显增强,金属蛋白酶组织抑制因子-1基因表达水平明显受到抑制(P＜0.01).结论中药复方丹参可能通过抑制肝星状细胞的增殖,抑制胶原的异常合成,促进异常沉积胶原的降解,从而起到抗肝纤维化的作用.     

牛磺酸对血管紧张肽Ⅱ诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖的抑制作用

目的：研究牛磺酸对血管紧张肽Ⅱ(AngⅡ)诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的抑制及对转化生长因子β_1(TGF-β_1)蛋白表达的下调作用,以探讨其对抗AngⅡ诱导的心肌纤维化的作用。方法：在AngⅡ诱导心肌成纤维细胞增殖前后加不同浓度的牛磺酸,并采用羟脯氨酸法、MTT比色法分别测定胶原量和细胞增殖情况、SDS-PAGE电泳测胶原Ⅰ/Ⅲ型比值、ELISA法测定TGF-β_1蛋白的含量。结果：(1) AngⅡ有促进心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的作用,其浓度在1×10~(-7)mmol·L~(-1)时达最大效应；(2)牛磺酸能抑制由AngⅡ诱导的Ⅰ/Ⅲ型胶原比值增高和TGF-β_1蛋白含量的增加,其中100,200 mmol·L~(-1)的牛磺酸可抑制AngⅡ诱导的细胞增殖和胶原合成。结论：牛磺酸可用于抑制由AngⅡ导致的心肌纤维化。     

苦参素治疗慢性乙型肝炎临床研究

苦参素主要成分为苦参碱及氧化苦参碱,能抑制成纤维细胞的增殖及Ⅲ型前胶原mRNA的表达,具有抗炎、抗病毒、免疫调节及抗纤维化等作用.近年广泛应用于慢性乙型肝炎（CHB）的治疗,取得了与干扰素近似的疗效.我们自2001年6月至2004年6月应用苦参素治疗CHB,现将结果报告如下.     

丹酚酸A对培养的大鼠肝星状细胞增殖与胶原生成的作用(英文)

目的:研究丹酚酸A对培养的大鼠肝星状细胞增殖与胶原生成的影响。方法:用链酶蛋白酶与胶原酶对肝脏进行原位灌流消化,Nycodenz密度梯度离心分离大鼠肝星状细胞,传一代培养。MTT法与[~3H]TdR掺入法测定细胞增殖。丽春红染色、图象分析法半定量细胞胶原沉积量,ELISA法测定细胞培养上清中Ⅰ型胶原分泌量,检测细胞层总蛋白量校正细胞数。RT-PCR法分析前胶原α_2(Ⅰ)基因的表达。结果:丹酚酸A 100μmol/L引起部分细胞脱壁与死亡,有一定毒性反应。丹酚酸A 0.1-10μmol/L对细胞形态无明显影响。丹酚酸A1-100μmol/L浓度依赖性抑制细胞增殖,降低胶原沉积量与Ⅰ型胶原分泌量。丹酚酸A1-10μmol/L对前胶原α_2(Ⅰ)mRNA表达均有明显抑制作用。结论:丹酚酸A抑制肝星状细胞增殖与胶原表达,是丹参抗肝纤维化的主要有效成分之一,抑制肝星状细胞活化是其抗肝纤维化的主要作用机制。     

染料木素和槲皮素体外抗肝纤维化作用

目的 研究染料木素和槲皮素对体外肝纤维化的保护作用。方法 细胞增殖和胶原合成分别用结晶紫染色法和3H-脯氨酸参入法。原胶原mRNA水平用RT-PCR法测定。结果 染料木素(25 ~ 70 mmolL-1)和槲皮素(6.25 ~ 50 mmolL-1)浓度依赖抑制PDGF促HSC-T6细胞增殖和TGFb1刺激的胶原合成及I型原胶原mRNA的表达。结论 染料木素和槲皮素抑制PDGF和TGFb1对星状细胞的作用可能对肝纤维化有保护作用。     

染料木素和槲皮素体外抗肝纤维化作用

目的　研究染料木素和槲皮素对体外肝维化的保护作用。方法　细胞增殖和胶原合成分别用结晶紫染色法和³H-脯氨酸参入法。原胶原mRNA水平用RT-PCR法测定。结果　染料木素(25 - 70 μmol·L^-1 )和槲皮素(6.25- 5 0 μmol·L^-1 )浓度依赖抑制PDGF促HSC-T6细胞增殖和TGFβ₁ 刺激的胶原合成及I型原胶原mRNA的表达。结论　染料木素和槲皮素抑制PDGF和TGFβ₁ 对星状细胞的作用可能对肝纤维化有保护作用     

壳聚糖对大鼠Ⅲ度烧伤创面EGF和PDGF表达的影响

目的研究壳聚糖对大鼠Ⅲ度烧伤创面表皮生长因子(EGF)和血小板源性生长因子(PDGF)表达的影响。方法W istar大鼠分为1%壳聚糖组(W/V)、2%壳聚糖组(W/V)、4%壳聚糖组(W/V)、成纤维细胞生长因子(贝复剂)组(阳性对照组)、自然愈合组(模型组),制备成大鼠Ⅲ度烧伤模型,采用免疫组织化学SABC法、原位杂交法及图像分析法检测大鼠Ⅲ度烧伤创面EGF和EGFmRNA的表达;PDGF的活性用L929细胞生物法测定。结果4%壳聚糖组(W/V)对烧伤后7、14 d创面EGF的表达、对烧伤后3、7 d创面EG-FmRNA的表达有明显的提高;对烧伤后3、7、14 d创面PDGF的活性有明显的提高,与自然愈合组相比,差异均有显著性(P<0.05)。结论壳聚糖对大鼠Ⅲ度烧伤创面的EGF表达和PDGF活性有促进作用。     

白藜芦醇通过TGF-β1/ADAMTS-1信号通路抑制肺纤维化

目的观察白藜芦醇(Res)对博莱霉素所致大鼠肺纤维化的影响,并探讨其是否通过转化生长因子-β1(TGF-β1)/含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶(ADAMTS-1)信号通路起作用。方法 90只SD大鼠随机分为对照组(n=10)、模型组(n=40)和Res组(n=40),后两组经气管内注入博莱霉素建立大鼠肺纤维化模型,d 2起Res组大鼠予100 mg.kg-1Res灌胃,其余两组相同条件下给予生理盐水,模型组和Res组分别于d 7、d 14、d 28、d 56随机处死10只大鼠,而对照组于d 56全部处死作为总体对照,取出肺组织行HE染色和Masson染色,用荧光实时定量PCR和Western blot分别检测肺组织中TGF-β1、ADAMTS-1、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)mRNA及蛋白表达,分离血清,并采用酶联免疫吸附法检测血清I型前胶原羧基端前肽(PICP)和Ⅲ型前胶原氨基端前肽(PⅢNP)浓度。结果 Res组大鼠肺泡炎症和肺纤维化程度明显轻于模型组(P<0.05)。与对照组比较,模型组肺组织ADAMTS-1 mRNA和蛋白表达量降低(P<0.05),而TGF-β1、ColⅠ、ColⅢmR-NA和蛋白表达量及血清PICP、PⅢNP浓度增加(P<0.05或0.01);相比于模型组同期,Res组各时间点ADAMTS-1mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05),而TGF-β1、ColⅠ、ColⅢmRNA和蛋白表达量及血清PICP、PⅢNP浓度则降低(P<0.05或0.01)。结论 Res通过TGF-β1/ADAMTS-1信号通路降解肺组织ColⅠ、ColⅢ发挥抗肺纤维化的作用。     

壳聚糖对大鼠Ⅲ度烧伤创面表皮生长因子的影响研究

目的:研究壳聚糖对大鼠Ⅲ度烧伤创面表皮生长因子(EGF)和EGFmRNA表达的影响及意义。方法:105只Wistar大鼠除5只作为正常对照组外,其余建立烧伤模型后分为壳聚糖低、中、高浓度(1%、2%、4%)组及贝复济组(阳性对照组)和自然愈合组(模型组),每日2次连续21d于受伤处喷以相应药物,采用免疫组织化学法、核酸分子杂交法及图象分析法检测烧伤后3、7、14、21d时大鼠Ⅲ度烧伤创面EGF和EGFmRNA的表达。结果:与模型组比较,壳聚糖各浓度组均可增强EGF和EGFmRNA的表达,并呈浓度依赖性,尤以4%壳聚糖组作用更强(P<0.01或P<0.05)。结论:壳聚糖对大鼠Ⅲ度烧伤创面有促愈合作用,其促愈合机制与增强创面EGF和EGFmRNA表达有关。     

Perifollicular fibrosis: pathogenetic role in androgenetic alopecia

Androgenetic alopecia (AGA) is a dihydrotestosterone (DHT)-mediated process, characterized by continuous miniaturization of androgen reactive hair follicles and accompanied by perifollicular fibrosis of follicular units in histological examination. Testosterone (T: 10(-9)-10(-7) M) treatment increased the expression of type I procollagen at mRNA and protein level. Pretreatment of finasteride (10(-8) M) inhibited the T-induced type I procollagen expression at mRNA (40.2%) and protein levels (24.9%). T treatment increased the expression of transforming growth factor-beta 1 (TGF-beta1) at protein levels by 81.9% in the human scalp dermal fibroblasts (DFs). Pretreatment of finasteride decreased the expression of TGF-beta1 protein induced by an average of T (30.4%). The type I procollagen expression after pretreatment of neutralizing TGF-beta1 antibody (10 mug/ml) was inhibited by an average of 54.3%. Our findings suggest that T-induced TGF-beta1 and type I procollagen expression may contribute to the development of perifollicular fibrosis in the AGA, and the inhibitory effects on T-induced procollagen and TGF-beta1 expression may explain another possible mechanism how finasteride works in AGA.     

高血压对大鼠心肌间质重构的影响及药物干预研究

目的:观察神经内分泌型高血压大鼠心肌间质重构在药物干预下的变化,探讨高血压心肌间质重构机制及抑制方法.方法:建立神经内分泌型高血压大鼠动物模型,34只Wistar大鼠随机分为哌唑嗪组(Hα)、抑平舒组(Hace)、己酮可可碱(pentoxifylline,PTX)组(Hptx)和高血压对照组(Hc).10只正常Wistar大鼠作为正常对照组(Nc).观察各组大鼠血压、血清Ⅲ型前胶原、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平及心肌胶原容积分数(collagen volume fraction, CVF)变化.结果:Hace组治疗后血压、左室质量、血清Ⅲ型前胶原和TNF-α水平、各项CVF均较Hc组明显降低(P < 0.05);Hα组治疗后血压、左室质量低于Hc组(P < 0.05),而Ⅲ型前胶原、TNF -α水平仍高于Nc组(P < 0.05); Hptx组较Hc组治疗后血压和左室质量无明显降低(P > 0.05),但血清Ⅲ型前胶原和TNF-α水平、各项CVF明显降低(P ＜ 0.05).结论:血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)逆转心肌纤维化的作用可能与抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)有关,PTX抑制和逆转心肌纤维化可能与拮抗TNF-α有关.     

汉防己甲素与秋水仙碱抗肝纤维化作用的比较

用ＣＣｌ４造成大鼠肝纤维化模型，用汉防己甲素进行抗肝纤维化治疗，并与传统抗肝纤维化药物秋水仙碱进行比较。结果显示，汉防己甲素对血清Ⅲ型前胶原与透明质酸、肝内炎症、肝胶原沉积、储脂细胞等均有明显抑制作用，与秋水仙碱作用接近，甚至在某些方面优于秋水仙碱。提示汉防己甲素可能具有治疗肝纤维化作用。