大蒜素对人喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡的影响

目的 研究大蒜素(Allitridi)对人喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法 分别以不同浓度大蒜素(25、50、100 mg·L-1)和顺铂(1.8 mg·L-1)干预对数生长期人喉癌Hep-2细胞,药物干预24 h后经Hoechst染色后利用倒置显微镜观察细胞的形态,采用MTT比色法测定大蒜素对Hep-2细胞的增殖抑制作用,采用FCM测定细胞周期分布、检测细胞凋亡率;采用RT-PCR检测Bax、Bcl-2 mRNA表达水平,Western-blot检测caspase-3蛋白表达.结果 大蒜素各组和顺铂1.8 mg·L-1组人喉癌Hep-2细胞较空白对照组出现不同程度损伤,以大蒜素100 mg·L-1组损伤最为严重;大蒜素(50、100 mg·L-1)组和顺铂1.8 mg·L-1组人喉癌Hep-2细胞增殖抑制率显著升高,细胞周期G0/G1期显著增长、G2/M期显著缩短,细胞凋亡数量明显增多、凋亡率显著升高,凋亡相关基因bcl-2 mRNA表达显著下调而Bax mRNA显著上调、Bax/bcl-2表达比值显著升高,促凋亡蛋白caspase-3表达显著上调,上述均差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01).结论 大蒜素对人喉癌Hep-2细胞生长具有抑制作用,其机制可能与大蒜素能够阻滞人喉癌Hep-2细胞周期进程、抑制细胞增殖并促进其凋亡有关.     

1，25二羟维生素 D3诱导喉癌细胞 Hep-2细胞凋亡及其对Bax／Bcl-2蛋白表达水平的影响

目的：研究1,25二羟维生素 D3抑制人喉癌 Hep-2细胞增殖作用,诱导细胞凋亡及其凋亡相关机制。方法用不同剂量（10－8、10－7、10－6 mol／L）1,25二羟维生素 D3处理 Hep-2细胞24 h、48 h、72 h,四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测 Hep-2细胞的增殖情况,计算抑制率。流式细胞术检测 Hep-2细胞的凋亡率。Western blot 检测用药前后细胞中 Bax 和 Bcl-2蛋白的表达水平。结果1,25二羟维生素 D3可以抑制 Hep-2细胞增殖（P ＜0．05）,最高抑制率可达30．71％,在上述浓度内随着浓度增加、时间延长抑制作用逐渐增强,呈时间－剂量依赖性。10－7、10－6 mol／L 1,25二羟维生素 D3作用48 h 后,Hep-2凋亡细胞比例显著增加,凋亡率高于空白对照组（P ＜0．05）。1,25二羟维生素 D3处理48 h 后,Hep-2细胞 Bax 蛋白表达上升,Bcl-2蛋白表达水平下降。结论在一定浓度范围内1,25二羟维生素 D3能够抑制人喉癌 Hep-2细胞的增殖,呈时间－剂量依赖性,其抑制作用与诱导细胞凋亡有关;1,25二羟维生素 D3可通过上调 Bax 蛋白表达、下调 Bcl-2蛋白表达诱导 Hep-2细胞凋亡。     

MC002诱导人喉癌细胞Hep-2凋亡及其作用机制

目的与雷公藤内酯醇(PG490)进行比较,观察雷公藤内酯醇衍生物MC002对人喉癌Hep-2细胞体外增殖的抑制作用及其分子机制。方法以MC002和PG490分别处理人喉癌细胞Hep-2,采用噻唑蓝比色法(MTT)检测药物对Hep-2细胞的增殖抑制作用并计算IC50值;利用软琼脂克隆形成实验观察细胞的锚定非依赖性生长能力;选用Hoechst33258染色法观察细胞凋亡的形态学变化;用ROS检测试剂盒分析药物对细胞活性氧水平的影响;以实时荧光定量PCR技术(Realtime-PCR)检测细胞凋亡相关因子Bcl-2及Bax mRNA水平的表达变化。结果 MC002及PG490均对体外培养的人喉癌Hep-2细胞有增殖抑制作用,且具有剂量依赖性,IC50值分别为183.58nmol/L和119.35nmol/L,而且两种药物可以抑制细胞的锚定非依赖性生长能力;此外,MC002及PG490可以降低ROS水平,并且使凋亡相关因子BaxmRNA表达上调,Bcl-2mRNA表达下调。结论 MC002具有与PG490相同的作用,可以抑制人喉癌细胞株Hep-2的生长,诱导人喉癌Hep-2细胞凋亡,其机制可能与调节凋亡相关因子Bcl-2、Bax及ROS的表达有关。     

基于网络药理学及体外实验发现汉黄芩素介导膀胱癌细胞凋亡及细胞周期阻滞

摘要：目的:探究汉黄芩素抑制膀胱癌细胞活性的作用机制。方法:利用TCMSP和Swiss Target Prediction数据库对汉黄芩素的潜在靶标进行筛选。从GeneCards、DisGeNET和OMIM数据库中获取膀胱癌疾病靶点。通过STRING在线分析平台和Cytoscape 3.8.2插件获取靶标相互作用的蛋白-蛋白相互作用关系（PPI）网络。然后在Metascape在线平台上进行基因本体（GO）富集分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析,并通过Cytoscape 3.8.2软件制作“药物-疾病-核心靶点-通路”网络图。通过CCK-8和克隆形成实验观察汉黄芩素抗膀胱癌的作用;Hoechst 33342染色检测汉黄芩素诱导膀胱癌细胞的凋亡情况;流式细胞术检测汉黄芩素诱导细胞凋亡及周期阻滞的请况;蛋白免疫印迹（Western blot）法检测汉黄芩素对凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、Bcl-2关联X蛋白（Bax）、活化的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（Cleaved-PARP）、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸水解酶3（Cleaved-Caspase3）、细胞周期相关蛋白周期素B1（Cyclin-B1）以及核心基因P53蛋白表达情况的影响。结果:共获得汉黄芩素-膀胱癌相关靶点77个,并筛选出核心靶点26个,包括细胞肿瘤抗原P53（TP53）、细胞周期检查点激酶（CHEK1）、Bcl-2及Caspase3等。GO功能富集分析共获得43个条目（P＜0.01）,其中生物过程20条、细胞组成9条、分子功能13条。KEGG通路富集分析确定了24个具有代表性的信号通路（P＜0.01）,结果包括癌症通路、蛋白多糖与癌症、磷酸肌醇-3-激酶-蛋白激酶B（PI3K-AKT）信号通路、凋亡、P53信号通路、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路、细胞周期等。汉黄芩素对膀胱癌细胞活性具有抑制作用,呈时间及浓度依赖。通过流式细胞术及Hoechst 33342染色提示汉黄芩素可介导膀胱癌细胞凋亡。流式细胞术结果显示细胞周期阻滞在G2/M期。Western blot显示与对照组相比汉黄芩素组P53、Bax、Cleaved-Caspase3、Cleaved-PARP蛋白表达显著升高,Cyclin-B1、Bcl-2蛋白表达显著下降（P＜0.05或P＜0.01）。结论:汉黄芩素可通过促进凋亡和细胞周期阻滞抑制膀胱癌细胞活性。     

黄芩苷元选择性诱导人白血病K562细胞凋亡

目的研究黄芩苷元诱导人白血病细胞凋亡的作用及机理。方法MTT法测细胞毒活性，Hoechst 33258荧光染色法观察凋亡小体形成，流式细胞仪Annexin V FITC-PI法检测细胞凋亡发生率，PI染色法检测凋亡峰及细胞周期，同时流式细胞仪检测细胞Bcl-2，Fas和Caspase 3蛋白表达情况。结果黄芩苷元能选择性抑制人白血病K562细胞生长且呈浓度依赖关系，并能诱导细胞凋亡，细胞增殖被阻滞于S期；同时细胞Fas和Caspase 3蛋白表达增高，而Bcl-2蛋白表达不变。结论黄芩苷元能激活Caspase 3蛋白表达，诱导人白血病K562细胞凋亡且呈时效量效关系，此作用与Fas蛋白表达上调有关，与Bcl-2蛋白表达无关。     

干扰LOX基因对喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭及放疗敏感性的影响

目的 探讨抑制赖氨酰氧化酶（LOX）基因表达对喉癌Hep-2细胞增殖、侵袭及放疗敏感性的影响。方法 转染LOX干扰质粒的 Hep-2细胞株,RT-PCR 检测 LOX mRNA,Western blot检测喉癌Hep-2细胞中LOX蛋白及细胞增殖侵袭相关蛋白Ki-67、PCNA、MMP-2/9的表达情况;MTT法检测不同剂量射线对Hep-2细胞生存率的影响,流式细胞术（FCM）检测 Hep-2 细胞凋亡。结果 转染 LOX干扰质粒后 Hep-2细胞中,LOX蛋白和 mRNA 的表达水平下调;Western blot结果显示转染组细胞LOX、Ki-67、PCNA、MMP-2/9蛋白表达明显低于阴性对照组和空白对照组;同时不同剂量射线对Hep-2细胞生存率影响呈剂量依赖性,转染组细胞转染后联合放疗细胞凋亡率明显高于空白及阴性对照组。结论 LOX干扰可特异下调LOX表达,抑制细胞增殖侵袭,作用机制可能与Ki-67、PCNA、MMP-2/9蛋白表达下调有关,并且可增强放疗敏感性,为临床提供一个新的靶点,提高喉鳞癌治疗效果。     

蛇床子素通过PI3K/Akt通路诱导外阴鳞癌SW962细胞凋亡

目的探讨蛇床子素(osthole或osthol)能否通过PI3K/Akt通路诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖。方法体外培养外阴鳞癌SW962细胞,加入不同浓度蛇床子素,MTT法检测细胞存活情况,DAPI染色观察细胞形态学变化;流式细胞术检测SW962细胞凋亡情况; Western blot检测Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3、PI3K和p-Akt蛋白表达,及蛇床子素和IGF-1共作用下PI3K/Akt通路蛋白的变化。结果 MTT结果显示,蛇床子素呈浓度依赖性地抑制SW962细胞增殖;DAPI染色和流式细胞术结果显示,蛇床子素呈浓度依赖性诱导细胞凋亡。Western blot结果显示,蛇床子素能上调Bax和cleaved caspase-3蛋白表达,下调PI3K、p-Akt和Bcl-2蛋白表达。IGF-1诱导PI3K、p-Akt和Bcl-2蛋白表达增加,蛇床子素逆转IGF-1作用,3种蛋白表达下调。结论蛇床子素通过抑制PI3K/Akt通路,诱导外阴鳞癌SW962细胞凋亡,抑制细胞增殖。     

多纳非尼抑制胆管癌TFK-1细胞增殖、迁移和侵袭及促进凋亡的机制研究

目的 研究多纳非尼抑制人胆管癌TFK-1细胞增殖、迁移和侵袭及促进凋亡的机制。方法 将人胆管癌TFK-1细胞分为对照组（加入等量的二甲基亚砜处理）,2、5、10 μmol/L多纳非尼组。CCK-8法检测细胞增殖抑制率;平板克隆实验检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;蛋白质免疫印迹法检测通路蛋白Wnt、β-catenin、细胞周期蛋白-D1（Cyclin D1）、抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax的表达;免疫荧光实验检测β-catenin进入细胞核的变化。结果 随着多纳非尼浓度增加,TFK-1细胞增殖抑制率、凋亡率升高,平板克隆形成数、细胞迁移和侵袭数量逐渐减少,Wnt、β-catenin、Cyclin D1、Bcl-2表达均逐渐下降,Bax表达逐渐增高（P<0.05）;免疫荧光显示,与对照组比较,2 μmol/L多纳非尼组能够抑制β-catenin进入细胞核（P<0.05）。结论 多纳非尼可以抑制人胆管癌TFK-1细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin通路活化及促进细胞凋亡相关。     

紫杉醇对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响

目的:探讨紫杉醇在体外对肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:采用MTT法测定紫杉醇对A549细胞增殖的影响;Hoechst33258检测紫杉醇作用48h后细胞凋亡情况;流式细胞仪检测药物作用48h后的细胞周期和凋亡率;Western Blot检测的Bax和Bcl-2蛋白的表达。结果:紫杉醇抑制A549细胞增殖呈时效和量效关系;Hoechst33258检测紫杉醇作用48h后可见凋亡细胞;紫杉醇作用48h后药物组G2～M期细胞百分比均高于对照组(均P<0.01),药物组细胞凋亡率高于对照组(均P<0.01),且凋亡率随药物浓度增加而增加;Western Blot显示,不同浓度紫杉醇作用于A549细胞48h,Bax的表达随药物浓度增加而增加,Bcl-2的表达随药物浓度增加而减低。结论:紫杉醇能抑制肺腺癌A549细胞株的增殖,其抑制作用可能通过将细胞周期阻滞于G2～M期和通过上调Bax、下调Bcl-2的表达而诱导细胞凋亡来实现的,并且紫杉醇抑制A549细胞增殖和诱导凋亡作用随药物浓度增加而增加。     

RNAi沉默PCDGF基因对喉鳞癌Hep-2细胞生物学特性的影响

目的 研究RNAi沉默畸胎瘤细胞源性生长因子（PCDGF）表达对喉鳞癌Hep-2细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法 RT-PCR检测喉鳞癌组织中PCDGF的mRNA表达水平;Hep-2细胞分为空白对照组、阴性对照组和PCDGF-siRNA组,Western blot检测转染效果及Bcl-2、Bax、E-cadherin和MUC1蛋白表达;CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Transwell 小室检测细胞侵袭能力。结果 喉鳞癌组织中的PCDGF mRNA表达水平显著高于声带息肉组织（t=6.88,P=0.005）。PCDGF在喉鳞癌组织中高表达。PCDGF-siRNA组喉鳞癌Hep-2细胞中PCDGF、Bcl-2、MUCI蛋白表达显著低于空白对照组（P<0.05）,Bax、E-cadherin蛋白表达显著高于空白对照组（P<0.05）,细胞增殖率显著低于空白对照组（P<0.05）,细胞侵袭数显著低与空白对照组（P<0.05）,细胞凋亡率显著高于空白对照组（P<0.05）。结论 抑制PCDGF的表达能够抑制喉鳞癌Hep-2细胞的增殖和侵袭能力,诱导细胞发生凋亡。     

靶向沉默SSBP1基因对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭转移的影响

目的 观察靶向沉默线粒体单链DNA结合蛋白(SSBP1)基因对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭转移的影响.方法 设计并构建靶向SSBP1 基因的特异性siRNA,采用脂质体介导瞬时转染肝癌HepG2细胞,细胞分3组:对照组、空白转染组、转染组.Real time-PCR和Western-blot检测靶向干扰后SSBP1 mRNA和蛋白表达变化.CCK-8法检测细胞增殖.流式细胞仪检测细胞周期、凋亡率及线粒体膜电位.划痕实验及Transwell 侵袭实验检测细胞侵袭转移能力.Western-blot检测增殖、侵袭转移相关基因蛋白表达状况.结果 SSBP1 siRNA能够显著抑制SSBP1 mRNA和蛋白表达.与对照组和空白转染组比较,转染SSBP1 siRNA后HepG2细胞增殖能力、G2期和S期细胞比例、线粒体膜电位明显降低,G1期细胞比例、细胞凋亡率明显升高(P<0.05);同时细胞增殖相关基因PCNA、凋亡抑制基因Bcl-2、转移相关基因MMP-9蛋白表达显著下调,凋亡诱导基因Bax蛋白表达显著上调(P<0.05).结论 靶向沉默SSBP1基因能够通过线粒体途径抑制肝癌HepG2细胞增殖、侵袭转移,并诱导其凋亡.     

美洲大蠊多肽提取物对SMMC-7721细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的：研究美洲大蠊多肽提取物诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及其分子机制。方法：采用不同质量浓度的美洲大蠊多肽提取物作用于SMMC-7721,以Cell Counting Kit-8（CCK-8）法检测细胞抑制率;Hoechst33342/PI与Annexin V-FITC/PI双染法相结合检测SMMC-7721细胞的凋亡;蛋白免疫印迹（Western blotting）法检测细胞凋亡相关因子Bcl-2和Bax蛋白表达。结果：不同质量浓度的美洲大蠊多肽提取物可抑制SMMC-7721细胞的增殖,诱导其凋亡,呈一定的量效关系;Western Blot法显示Bax表达增多,Bcl-2蛋白表达减少,Bcl-2/Bax比值降低。结论：美洲大蠊多肽提取物可明显诱导SMMC-7721细胞凋亡,抑制其增殖,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,降低Bcl-2/Bax比值有关。     

芹菜素对子宫内膜癌HEC-1-B细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的　研究芹菜素对子宫内膜癌细胞HEC-1-B增殖、侵袭、迁移、凋亡的影响及其作用机制。方法　取对数生长期的HEC-1-B细胞,加入0、20、40和80 μmol/L的芹菜素,采用CCK-8法检测培养24、48和72 h后细胞的光密度,计算增殖抑制率。流式细胞术检测细胞凋亡水平,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力变化。Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2以及磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、磷酸化PI3K（p-PI3K）、蛋白激酶B（AKT）和磷酸化AKT（p-AKT）的表达水平。结果　20~80 μmol/L范围内,随着芹菜素干预浓度的升高,HEC-1-B细胞的增殖明显受到抑制,细胞凋亡率升高,同时促凋亡蛋白Bax表达增高,抗凋亡蛋白Bcl-2表达下降。0、5、10和20 μmol/L范围内,随着芹菜素干预浓度的升高,HEC-1-B细胞侵袭和迁移能力下降。Western blot结果显示,40 μmol/L芹菜素能够下调PI3K/AKT通路蛋白p-PI3K和p-AKT的表达。结论　芹菜素能够抑制HEC-1-B细胞增殖、侵袭、迁移并促进其凋亡,其作用机制可能与PI3K/AKT信号通路有关。     

维生素D对过氧化氢诱导MIN6细胞凋亡的保护作用

目的探讨维生素D(vitamin D,VitD)对过氧化氢(hydrogen peroxide,H 2O 2)诱导小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞凋亡的保护作用及机制。方法VitD预处理后,用H 2O 2处理MIN6细胞,分别运用CCK-8法、Hoechst 33258荧光染色法、流式细胞术检测MIN6细胞增殖、形态及凋亡百分率。Western blot检测增殖与凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Caspase-3以及Cleaved caspase-3的表达。结果H 2O 2呈时间和剂量依赖性抑制MIN6细胞增殖,诱导细胞凋亡,降低Bcl-2表达、增加Bax及Cleaved caspase-3表达,Bcl-2/Bax比值降低,Cleaved caspase-3/caspase-3比值增加;当用VitD预处理后,Bcl-2表达增加,Bax、Cleaved caspase-3表达降低,Bcl-2/Bax比值增加,Cleaved caspase-3/caspase-3比值降低,MIN6细胞活力增加。结论VitD预处理后,通过增加抗凋亡Bcl-2表达,降低促凋亡Bax和Cleaved caspase-3表达,减少由H 2O 2诱导的小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞凋亡。     

补肾养骨汤诱导多发性骨髓瘤细胞株 KM3 的 凋亡及机制探讨

目的 探讨补肾养骨汤对人多发性骨髓瘤细胞株 KM3 细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法 取对数生 长期 KM3 细胞,分别加入 5%、10%、20% 的补肾养骨汤含药血清培养,培养 12、24、48 和 72 h 后,采用 Cell Counting Kit-8（CCK-8）法检测补肾养骨汤对 KM3 细胞增殖的影响;KM3 细胞经过不同浓度含药血清培养 72 h 后,采用流式 细胞术检测补肾养骨汤对 KM3 细胞周期和凋亡作用;RT-qPCR 和 Western blot 检测 B 淋巴细胞瘤-2 基因（Bcl-2）、 Bcl-2 相关蛋白（Bax）和核转录因子（NF）-κB 的表达水平。结果 补肾养骨汤抑制 KM3 细胞株的增殖,诱导 KM3 细胞株呈剂量依赖性凋亡,使 KM3 细胞周期停滞在 G0/G1 期,导致 KM3 细胞株 Bcl-2、NF-κB 表达下调,Bax 表达 上调。结论 补肾养骨汤抑制 KM3 细胞的增殖,影响细胞周期,诱导其凋亡,此作用机制可能与 Bcl-2、Bax 和 NF- κB 表达异常有关。     

石榴皮鞣质对膀胱癌T24细胞增殖及凋亡的影响

目的：研究石榴皮鞣质对膀胱癌T24细胞增殖及凋亡的影响并探讨其作用机制。方法：采用CCK-8法测石榴皮鞣质对膀胱癌T24细胞的增殖抑制作用、计算半数抑制浓度（IC₅₀）并筛选浓度区间,Hoechst染色法观察石榴皮鞣质作用后细胞核形态变化,Annexin V/PI双染法流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率,JC-1染色标记后流式细胞仪测定线粒体膜电位水平的变化,蛋白免疫印迹法检测细胞色素C （Cyt-C）、Bcl-2、Bax、Caspase-3凋亡相关蛋白表达。结果：石榴皮鞣质抑制膀胱癌细胞增殖呈时间浓度依赖关系,24,48,72 h的IC₅₀分别是72.70,62.26,19.64 μg·mL^-1。Hoechst染色观察石榴皮鞣质作用24 h后,细胞核出现浓染和荧光碎片为典型凋亡细胞。流式细胞术结果表明石榴皮鞣质具有显著的诱导T24细胞早期凋亡,线粒体膜电位下降。蛋白免疫印迹实验证明石榴皮鞣质上调Cyt-C、Bax蛋白的表达、下调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达,并激活Caspase-3蛋白的表达。结论：石榴皮鞣质显著抑制膀胱癌T24细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与线粒体膜电位下降及调控线粒体凋亡途径相关蛋白的表达相关。     

hTERT 反义寡聚核苷酸对子宫内膜癌细胞Bcl-2蛋白含量的影响

目的：观察人端粒酶逆转录酶反义寡聚脱氧核苷酸对子宫内膜癌Ishikawa细胞株Bcl-2蛋白表达含量的影响。方法将2抖．5μmol／L、5μmol／L及10μmol／L人端粒酶逆转录酶反义寡聚脱氧核苷酸与Ishikawa细胞株共同培养,于24、48、72 h采用MTT法检测细胞增殖,于48 h使用流式细胞仪检测细胞凋亡和Bcl-2蛋白表达。结果人端粒酶逆转录酶反义寡聚脱氧核苷酸呈时间和剂量依赖性抑制Ishikawa细胞增殖,并可呈剂量依赖性诱导Ishika-wa细胞凋亡、降低Bcl-2蛋白表达量。结论人端粒酶逆转录酶反义寡聚脱氧核苷酸可以诱导Ishikawa细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖,该作用与降低Bcl-2蛋白表达量有关。