发形霞水母触手提取物的蛋白稳定性及其溶血活性

目的探讨不同环境因素和处理方法对发形霞水母（Cyanea capillata）触手提取物（tentacle extract,TE）蛋白稳定性及其溶血活性的影响。方法结合蛋白浓度测定、溶血活性检测和SDS-PAGE分析等方法研究不同环境因素和处理方法对TE蛋白稳定性及其溶血活性的影响。结果 TE溶血活性呈明显的剂量依赖关系,其半数溶血分数HU50=226μg/ml;40℃水浴1 h,能去除TE中大量杂蛋白,但仍保持显著溶血活性;TE在4℃放置28 d,其溶血活性保持稳定,25℃下3 d内其溶血活性变化不明显;p H值对TE溶血活性的影响呈钟形曲线,在p H 6.0-11.0之间活性相对稳定,p H 8.0是TE保持溶血活性的最优p H条件;不同缓冲液对TE稳定性及其溶血活性影响显著,浓度大于26%的硫酸铵溶液对TE溶血蛋白具有良好的盐析作用。结论 40℃水浴1 h预处理可显著减少TE中非活性蛋白组分,并降低样品黏性;4℃和p H 8.0是TE保持蛋白稳定性和溶血活性的最适条件;浓度大于26%的硫酸铵盐析有利于溶血蛋白组分富集。     

葛根素注射液对不同物种红细胞体外溶血性比较

目的比较葛根素注射液对不同物种红细胞体外溶血的差异。方法将不同浓度葛根注射液与Beagle犬、人和家兔红细胞在温度为(37±0.5)℃的生化孵箱内孵育6 h,用分光光度计在波长540 nm处测定各管的吸光率,计算溶血率。结果葛根素注射液对Beagle犬、人及家兔红细胞体外最大溶血率分别为65.35%、81.89%和135.05%;对3种红细胞体外溶血的半效溶血浓度分别为2.79、3.96和5.47 mg/ml;对3种红细胞的毒-效反应关系的斜率分别为1.45、1.96和0.49。此外,溶剂丙二醇在0.25和0.5 ml对3种红细胞均无溶血性(溶血率5%)。结论葛根素注射液对犬、人和家兔红细胞均能产生体外溶血作用,并有物种差异(敏感性:犬人家兔);溶剂丙二醇对葛根素注射液致红细胞溶血作用无影响。     

蛋白酶抑制剂对霞水母毒素溶血活性的影响

目的研究蛋白酶抑制剂对霞水母毒素溶血活性的影响。方法首先制备霞水母刺丝囊细胞,再利用Mini-Beadbeater组织研磨器破碎细胞提取毒素,然后向获得的霞水母毒素中加入不同种类及剂量的蛋白酶抑制剂,如金属酶抑制剂EDTA、酸性蛋白酶抑制剂Pepstantin A、丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF和Aprotinin,巯基蛋白酶抑制剂Leupeptin,并且测定蛋白酶抑制剂对霞水母毒素溶血活性的影响。结果 EDTA和Pepstantin A能够明显抑制蛋白酶的活性从而增强霞水母毒素的溶血活性,1 mmol.L-1EDTA和4μg.ml-1 Pepstantin A使其溶血率分别从40%上升到93%和5%上升到78%;而PMSF、Aprotinin和Leupeptin却对霞水母毒素溶血活性的影响较小。结论金属蛋白酶抑制剂EDTA和酸性蛋白酶抑制剂Pepstantin A能有效地保护霞水母毒素的溶血活性,为深入研究霞水母毒素提供帮助。     

重组人干扰素β1b活性标准品的稳定性研究

目的 评价重组人干扰素β1b(recombinant human interferon β1b,rhIFN-β1b)活性标准品在不同贮存温度条件下的稳定性.方法 检测在不同贮存温度(37 ℃、室温、4和-20 ℃)条件下放置不同时间段的rhIFN-β1b活性标准品的外观、溶解性、水分、pH值及生物学活性.结果 活性标准品分别在4种温度条件下放置90周生物学活性都没有降低的趋势,并且没有明显差别,同时水分、pH值等都符合规定.结论 说明辅料配方合理,可有效保护rhIFN-β1b,减少其降解,活性标准品稳定性良好.     

活性炭影响甲硝唑注射液含量的考察

目的:探求甲硝唑注射液配制过程中适宜的条件及活性炭用量。方法:考察活性炭不同用量以及不同配制温度、放置时间、pH值对甲硝唑注射液含量的影响,并作统计分析。结果:甲硝唑含量下降程度与活性炭加入量呈正相关(P<0.01);放置时间越长,下降幅度越大;而温度与pH值对含量影响则较小。结论:甲硝唑注射液配制温度、放置时间、pH值、活性炭用量以分别控制在40℃～80℃、10min～15min、4.5～7.0、0.02%～0.05%为宜,超出此控制范围应适当调整甲硝唑的用量。     

红细胞溶血试验检测化妆品眼刺激性的初步研究

目的探讨红细胞溶血试验在化妆品眼刺激性检测中的适用性。方法选用9种化妆品产品进行眼刺激试验,确定家兔红细胞50%发生溶血时的化妆品浓度(HD50值)和血红蛋白变性指数(DI,%),计算刺激指数IP=HD50/DI,以IP=HD50/DI值作为评价标准,进行眼刺激性分级。将红细胞溶血试验刺激性分级结果与家兔眼刺激试验(Draize eye test)结果进行分级一致性比较,初步分析体外试验的适用性。结果红细胞溶血试验与动物实验结果比较中,9种样品中有7种结果一致,一致率为77.8%(相关性为0.4962)。结论虽然实验结果说明两者有一定的相关性,但多方面而言,红细胞溶血试验能否真正取代动物实验还有待商榷。     

提高血氧分压对不同储存期血液红细胞影响的探讨

目的探讨提高血氧分压在4℃保存条件下对不同储存期红细胞的影响。方法在无菌条件下,分别对采集0、71、4 d的库存血进行无菌氧处理,以提高血氧分压。分实验组和对照组(不加氧),测定血液红细胞在提高血氧分压后的血浆游离Hb浓度,血浆K+离子浓度,红细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性。结果与对照组比较,在4℃保存条件下,血液红细胞在提高血氧分压初期(1~2 d),血浆游离Hb浓度和血浆K+离子浓度无明显变化(P>0.05),红细胞SOD活性、红细胞GSH-PX活性有所提高(P<0.05);随着储存时间的延长,血浆游离Hb浓度增加,血浆K+离子浓度增高(P<0.01),红细胞SOD活性和红细胞GSH-PX活性降低(P<0.01)。结论(1)红细胞能保持较高血氧分压和血氧饱和度;(2)血液红细胞在提高血氧分压的初期没有明显的溶血反应和其它损伤,红细胞抗氧酶活性有所提高。随着储存时间的延长,红细胞抗氧化酶活性下降,溶血反应加重,存在红细胞膜氧化损伤作用,这与氧自由基攻击红细胞膜发生过氧化反应及红细胞抗氧化酶活性降低有关。     

注射用七叶皂苷钠体外溶血作用试验研究

目的：探讨不同种类实验动物血细胞对七叶皂苷钠体外溶血活性的影响以及比较国内外同类品种体外溶血活性。方法：参照《中国药典》2005年版一部“溶血与凝聚”检查法。结果：用兔血细胞考核的9批产品,其中2批出现红细胞微溶无凝聚,采用羊血细胞则均未出现红细胞溶血与凝聚;用兔、羊、牛血细胞分别测得本公司2批产品的溶血指数（完全溶血浓度）为1／20．8万、1／15．6万、1／15．6万以上;用成年黄牛血细胞测得七叶皂苷钠国家对照品溶血指数为1／10万,略高于德国Reparil（1／20万）。结论：应采用同一来源的一种常用动物--家兔血细胞检测药品体外溶血活性以及在相同条件下检测国内同类品种体外溶血活性不高于国外。     

不同输液配伍葛根素注射液对溶血的影响

目的:探讨葛根素注射液与临床上常用的2种输液配伍后对其溶血不良反应的影响。方法:采用分光光度法测定孵育1,3,6 h时,葛根素不同浓度、不同输液配伍时的溶血率;测定溶液pH值、渗透压值,明确pH、渗透压、Na⁺、Cl^-和葡萄糖分子在溶血中的作用。结果:葛根素注射液与不同输液配伍时,相同孵育时间、相同浓度的溶血率存在显著差异,组间pH值存在显著变化,而渗透压无显著变化,Na⁺、Cl^-、葡萄糖分子能显著影响溶血率变化。结论:葛根素注射液与不同输液配伍后的溶血存在显著差异,pH值、渗透压不是引起溶血差异的因素;葛根素注射液与0.9%氯化钠注射液和5%葡萄糖注射液输液配伍时,红细胞对溶质成分Na⁺、Cl^-、葡萄糖分子的膜通透性不同可能是引起溶血差异的主要原因。     

药用辅料中不同来源溶血磷脂酰胆碱含量限值的合理性分析

目的：通过比较蛋黄来源及大豆来源溶血磷脂酰胆碱对红细胞影响的差异来评价目前药用辅料中不同来源溶血磷脂酰胆碱含量限值的合理性。方法：采用体外红细胞溶血试验及红细胞渗透脆性试验考察两种不同来源溶血磷脂酰胆碱对红细胞的影响。结果：蛋黄来源及大豆来源溶血磷脂酰胆碱红细胞溶血IC₅₀分别为0.0427mg·mL^-1、0.0801mg·mL^-1;二者在0.65%、0.60%、0.55% NaCl低渗盐溶液中引起的溶血率亦具有显著性差异,蛋黄来源溶血磷脂酰胆碱的溶血率明显高于大豆来源溶血磷脂酰胆碱。但红细胞凝聚试验结果表明,二者均未见引起红细胞凝聚。结论：两种不同来源的溶血磷脂酰胆碱致溶血能力具有显著性差异,建议应分别制定不同来源磷脂类产品中溶血磷脂酰胆碱的含量限值,以保证临床用药安全。