红霉素逆转入肝癌细胞BEL—7402多药耐药性的研究

目的 研究红霉素（ERY）对BEL－7402细胞（人肝癌细胞）多耐药性的逆转作用。方法 将BEL－7402细胞连续培养在含阿霉素（ADM）的培养液中诱导耐药细胞株BEL－7402／ADM,用cell-ELASA法检测细胞膜表面P－gp的表达,细胞毒试验采用MTT法,用荧光分光光度法测定细胞内ADM浓度。结果 BEL－7402／ADM细胞表面P－gp高度表达,除对ADM耐药外,对长春新碱（VCR）和丝裂霉素（MMC）也有不同程度的交叉耐药;ERY可增强ADM、VCR、MMC对BEL－7402。／ADM细胞的增殖抑制作用,可增加BEL－7402／ADM细胞内ADM的浓度而对细胞表面P-gp的表达没有影响。结论 ERY通过竞争性地饱和BEL－7402／ADM细胞表面P-gp通道,使细胞内药物外排减少、浓度增加,从而发挥对BEL－7402／ADM细胞多药耐药性的逆转作用。     

红霉素逆转人肝癌细胞BEL-7402多药耐药性的研究

目的　研究红霉素 (ERY)对BEL 740 2细胞 (人肝癌细胞 )多药耐药性的逆转作用。方法　将BEL 740 2细胞连续培养在含阿霉素 (ADM )的培养液中诱导耐药细胞株BEL 740 2 /ADM ,用cell ELASA法检测细胞膜表面P gp的表达 ,细胞毒试验采用MTT法 ,用荧光分光光度法测定细胞内ADM浓度。结果　BEL 740 2 /ADM细胞表面P gp高度表达 ,除对ADM耐药外 ,对长春新碱 (VCR)和丝裂霉素(MMC)也有不同程度的交叉耐药 ;ERY可增强ADM、VCR、MMC对BEL 740 2 /ADM细胞的增殖抑制作用 ,可增加BEL 740 2 /ADM细胞内ADM的浓度而对细胞膜表面P gp的表达没有影响。结论　ERY通过竞争性地饱和BEL 740 2 /ADM细胞表面P gp通道 ,使细胞内药物外排减少、浓度增加 ,从而发挥对BEL 740 2 /ADM细胞多药耐药性的逆转作用     

板蓝根高级不饱和脂肪酸对耐药肝癌细胞株BEL-7404/ADM逆转作用实验

目的:板蓝根高级不饱和脂肪酸对肝癌耐药细胞株BEL-7404/ADM耐药逆转作用及机制研究。方法:MTT法观察药物对细胞的生长抑制作用;免疫组化法检测细胞P 糖蛋白(P-gp)和多药耐药相关蛋白(MRP)的表达;采用高效液相色谱法(HPLC)测定细胞内ADM的浓度。结果:耐药肝癌细胞株BEL-7404/ADM对多种化疗药物产生多药耐药性,耐药细胞P-gp和MRP的阳性率显著高于亲本细胞(P<0.01) ;板蓝根高级不饱和脂肪酸在非细胞毒剂量时与ADM合用后能逆转BEL 740 4/ADM对ADM的耐药性;ADM与板蓝根高级不饱和脂肪酸合用时,其细胞内ADM的含量较单独使用明显增高。结论:肝癌细胞株BEL-7404/ADM对多种化疗药物具有多药耐药性,其多药耐药性与P-gp和MRP过量表达有关;板蓝根高级不饱和脂肪酸在非细胞毒剂量时能逆转BEL-7404/ADM对ADM的耐药性,其逆转作用可能与降低P-gp药物外排功能、增加细胞内药物浓度有关     

野木瓜果实总皂苷对BEL-7402/5 FU细胞多药耐药性的逆转作用

目的 研究野木瓜果实总皂苷对人肝癌耐药细胞BEL-7402/5 FU多药耐药(MDR)的逆转作用,并初步探讨其耐药逆转机制.方法 采用MTT法测定5-氟尿嘧啶(5-FU)、阿霉素(ADM)、丝裂霉素(MMC)和野木瓜果实总皂苷对BEL-7402细胞、BEL-7402/5 FU细胞的毒性及野木瓜果实总皂苷逆转MDR的效果;利用蛋白质印迹法检测P-糖蛋白(P-gp)的表达情况.结果 BEL-7402/5 FU细胞对5-FU、ADM、MMC的耐药指数分别为21.71,2.73,2.11;野木瓜果实总皂苷能有效抑制BEL-7402/5 FU细胞增殖,无细胞毒性剂量为5,10 μg/mL,逆转耐药倍数分别为1.36、1.93;野木瓜果实总皂苷联合5-FU作用BEL-7402/5 FU细胞,可降低P-gp蛋白表达.结论 野木瓜果实总皂苷能部分逆转BEL-7402/5 FU细胞MDR,其机制可能是通过下调P-gp的表达而实现的.     

黄芩苷逆转人肝癌细胞耐药株Bel-7402/ADM多药耐药性的相关机制研究

目的 考察黄芩苷对人肝癌耐药细胞Bel-7402/ADM 多药耐药性的逆转机制.方法 MTT法考察Baicalin对人肝癌多药耐药细胞的逆转作用.结果 Baicalin逆转Bel-7402/ADM多药耐药性的机制可能与抑制MDR1部分基因产物P-gp、MRP、GSH/GST的表达和诱导细胞凋亡有关.结论 Baicalin可能通过抑制MDR1部分基因产物P-gp、MRP、GSH/GST的表达和诱导细胞凋亡逆转Bel-7402/ADM的多药耐药性.     

美洲大蠊提取物逆转BEL-7402/5-Fu多药耐药性的作用及机制研究

目的 探讨美洲大蠊提取物 CⅡ-3和脱脂膏逆转耐5-氟尿嘧啶人肝癌细胞BEL-7402(BEL-7402/5-Fu)细胞多药耐药性的作用及可能的作用机制.方法 通过测定耐5-氟尿嘧啶人肝癌细胞BEL-7402细胞生长曲线和细胞凋亡率,以及P-糖蛋白(P-gp)的摄取情况,探索美洲大蠊提取物体外逆转耐5-氟尿嘧啶人肝癌细胞BEL-7402的作用.结果 CⅡ-3和脱脂膏对耐5-氟尿嘧啶人肝癌细胞BEL-7402的抑制率、逆转倍数及细胞凋亡率随浓度增加逐渐增大,且差异无统计学意义,说明CⅡ-3与脱脂膏对耐药细胞的逆转效果及诱导凋亡作用相当.CⅡ-3和脱脂膏能减弱P-糖蛋白的外排功能,且脱脂膏较CⅡ-3作用强,细胞内药物蓄积量较多.结论 美洲大蠊提取物CⅡ-3和脱脂膏能够有效逆转人肝癌耐5-氟尿嘧啶人肝癌细胞BEL-7402细胞的多药耐药性,其逆转作用机制主要通过诱导耐药细胞凋亡和抑制P-糖蛋白蛋白的表达.     

美洲大蠊多肽PAE2逆转BEL-7402/5-FU细胞多药耐药性的作用及机制研究

本研究探讨了美洲大蠊多肽PAE2逆转人肝细胞肿瘤耐药细胞株BEL-7402/5-FU的多药耐药性作用及机制。以人肝细胞肿瘤敏感细胞株BEL-7402、人肝细胞肿瘤耐5-氟尿嘧啶(5-FU)细胞株BEL-7402/5-FU和Balb/c-nude小鼠为研究对象,采用噻唑蓝比色分析法检测BEL-7402/5-FU细胞的多药耐药性和交叉耐药性,通过激光共聚焦显微镜观察阿霉素在BEL-7402/5-FU细胞中的累积。使用实时荧光定量聚合酶链式反应和免疫细胞化学染色法检测BEL-7402/5-FU细胞中P-糖蛋白1(P-glycoprotein 1,P-gp1)、多药耐药相关蛋白1(multi-drug resistance protein 1,MRP1)、肺耐药相关蛋白1(lung resistance protein 1,LRP1)以及乳腺癌耐药蛋白1(breast cancer resistance protein 1,BCRP1)的mRNA和蛋白的相对表达量,确定美洲大蠊多肽PAE2逆转多药耐药性的机制。此外,在Balb/c-nude小鼠中,建立BEL-7402/5-FU细胞的腋下移植瘤模型,观察美洲大蠊多肽PAE2对腋下移植瘤小鼠的免疫器官、肝肾功能、肿瘤抑制与诱导肿瘤细胞调亡、调节肿瘤组织多药耐药相关蛋白等环节的影响。结果显示,美洲大蠊多肽PAE2能有效逆转BEL-7402/5-FU细胞的多药耐药性和交叉耐药性,作用机制可能与下调多药耐药相关蛋白的表达水平有关,降低了多药耐药细胞对抗肿瘤药物的外排能力、影响抗肿瘤药物分子代谢,从而达到逆转人肝细胞癌多药耐药的作用。     

华蟾素对人乳腺癌细胞阿霉素多药耐药性的逆转作用

目的以耐阿霉素人乳腺癌细胞系MCF-7/ADM为对象,验证华蟾素(cinobufacine,Cino)能否逆转其对阿霉素(ADM)的耐药性。方法采用MTT法检测药物细胞毒性作用及耐药细胞逆转倍数,高效液相色谱法检测细胞内ADM的浓度,流式细胞术测定P-糖蛋白(permeability glycoprotein,P-gp)的表达。结果Cino15mg·L-1能增加MCF-7/ADM细胞对ADM的敏感性,使ADM的半数抑制浓度(IC50)由38.14mg·L-1降至12.93mg·L-1;能提高ADM在MCF-7/ADM细胞内的浓度,降低MCF-7/ADM细胞P-gp的表达。结论研究表明Cino能部分逆转MCF-7/ADM细胞的MDR,其机制与抑制P-gp的功能与表达,增加细胞内ADM的含量有关。     

洛美利嗪逆转K562/ADM细胞多药耐药性

目的研究洛美利嗪(lomerizine,Lom)逆转K562/ADM细胞多药耐药性的作用及机制。方法MTT法检测细胞毒作用,流式细胞仪研究Lom对ADM和长春新碱(vincristine,VCR)的K562/ADM细胞凋亡诱导作用的影响及对罗丹明123(rhodamine 123,Rh123)外排和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达的作用。结果Lom明显提高ADM对K562/ADM多药耐药细胞的细胞毒作用及ADM和VCR的凋亡诱导作用,3,10和30 μmol·L^-1 Lom使K562/ADM对ADM的IC₅₀值由79.03 μmol·L^-1分别降至28.14,8.16和3.16 μmol·L^-1。Lom增加胞内ADM的蓄积浓度并抑制Rh123外排;但作用72 h后对K562/ADM细胞P-gp表达无影响。结论Lom通过抑制P-gp的活性逆转K562/ADM细胞的多药耐药性。     

ZNF300基因在肝癌耐药细胞HepG2/VCR中的表达及功能初探

目的建立人肝癌HepG2/VCR耐药细胞株,检测ZNF300基因在HepG2/VCR中的表达并初步分析其在肝癌多药耐药(MDR)中发挥的功能。方法采用体外低浓度梯度递增的诱导方法建立长春新碱(VCR)获得性HepG2/VCR耐药细胞株。MTT法检测确定HepG2/VCR耐药细胞株对VCR的耐药性,用Western blot方法检测人锌指蛋白ZNF300基因编码的ZNF300及多药耐药基因编码的P糖蛋白(P-gp)在HepG2和HepG2/VCR细胞中的表达差异;在HepG2/VCR细胞中转染ZNF300基因正向或反向cDNA质粒后,MTT法检测VCR对耐药细胞IC50值的变化,Westernblot方法检测细胞内P-gp表达的影响。结果 MTT检测确认HepG2/VCR耐药细胞构建成功,Western blot检测发现耐药细胞中ZNF300及P-gp的表达相对于HepG2细胞明显增高。在HepG2/VCR细胞中转染正向ZNF300 cDNA质粒后,MTT和Western blot检测发现ZNF300过表达可使VCR对耐药细胞的IC50值增高,并使细胞内P-gp表达上调;在转染反向cDNA质粒Knockdown ZNF300基因表达后得到相反的结果。结论 ZNF300基因在HepG2/VCR耐药细胞中表达明显增高,并能通过上调耐药蛋白P-gp的表达促进肝癌细胞耐药性,可以作为逆转肝癌多药耐药的分子作用靶点。