口服胸腺五肽乳酸-羟基乙酸共聚物纳米粒的制备及物理性质考察

目的制备供口服给药的胸腺五肽乳酸-羟基乙酸共聚物(thymopentin-poly lactic-co-glycolicacid;TP5-PLGA)纳米粒,并对纳米粒的物理性质进行考察。方法用复乳-溶剂挥发法制备TP5-PLGA纳米粒,以包封率为评价指标,用L16(45)正交设计优选纳米粒制备的处方工艺条件,用HPLC法测定胸腺五肽的含量,用激光粒度仪测定纳米粒的粒径,用透射电镜观察纳米粒的形态,用动态透析法考察纳米粒的体外释药特征。结果正交设计确定纳米粒制备的最优处方工艺条件为胸腺五肽质量浓度50 g.L-1,载体材料PLGA质量浓度100 g.L-1,乳化剂PVA质量浓度20 g.L-1;优化处方与工艺制备的纳米粒为规整的圆球形,平均粒径为(150.3±9.6)nm,载药量与包封率分别为(2.403±0.066)%与(28.12±0.60)%;体外释药结果表明,前5 h药物释放(31.27±1.5)%,存在一定突释,4 d累积释药量为(43.60±2.3)%。结论以乳酸-羟基乙酸共聚物为载体材料制备胸腺五肽纳米粒工艺简便,制剂具有良好的物理性质和体外释药特征。     

贝伐单抗介导的阿霉素白蛋白纳米粒的制备与优化

目的采用Box-Behnken效应面法优化贝伐单抗介导的阿霉素白蛋白纳米粒制备工艺。方法在采用去溶剂化-固化交联法制备出的阿霉素白蛋白纳米粒的基础上,用异型双功能交联剂NHS-PEG3500-MAL作为偶联剂,将贝伐单抗偶联到载药白蛋白纳米粒表面。以2-亚氨基硫烷盐酸盐用量、载药白蛋白纳米粒与贝伐单抗质量比、NHS-PEG3500-MAL用量为影响因素,以纳米粒粒径、载药量和包封率作为评价指标,用三因素三水平的Box-Be-hnken效应面法设计试验,并对免疫纳米粒的制备进行优化;考察制备出的免疫纳米粒的抗体活性保存率及稳定性。结果优化后的处方是2-亚氨基硫烷盐酸盐50μg、DOX-A-NPs与Bevacizumab质量比为27.5 mg.mg-1、NHS-PEG3500-MAL用量为8.8 mg,以此处方制得的免疫纳米粒粒径为(216.1±2.31)nm、载药量为(28.93±0.94)%、包封率为(80.39±2.83)%,测得值与预测值相差较小。结论采用Box-Behnken效应面法优化并制备阿霉素白蛋白免疫纳米粒是可行的。     

星点设计-效应面法优化PLGA-PEG纳米粒的处方工艺

摘要：目的:采用星点设计-效应面法优化载体基质为PLGA-PEG的siRNA纳米粒的制备工艺。方法:采用复乳法制备载药纳米粒,以二氯甲烷体积、吐温-80的质量分数和复乳的超声时间为试验因素,纳米粒的平均粒径、包封率和突释量为考察指标,根据星点设计原理安排实验和处方工艺优化。结果:成功制备了纳米粒。最佳工艺为二氯甲烷体积13 ml,乳化剂吐温-80的质量分数为3.1%,复乳的超声时间为2.8 min;按优化处方工艺制备的纳米粒的平均粒径（101.5±6.3）nm,包封率（57.6±4.8）%,体外48 h累积释放度高于80%。结论:星点设计-效应面法适用于PLGA-PEG纳米粒的工艺优化,所建立的数学模型预测性良好。     

洛伐他汀-PLGA纳米粒的制备及其性质

目的采用星点设计优化洛伐他汀-聚(乳酸-羟基乙酸)共聚物[poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA]纳米粒的制备工艺。方法采用纳米沉淀法制备纳米粒,以药物在有机相中的浓度、水相与有机相的体积比、PLGA与药物的用量比为自变量,以载药量、包封率和药物利用率为因变量,计算"总评归一值",根据星点设计原理进行试验安排,对结果分别进行多元线性回归和二项式拟合,效应面法选取最佳工艺条件进行预测分析。结果各指标与"总评归一值"的二项式拟合方程均优于多元线性回归方程,根据优化工艺制备的洛伐他汀-PLGA纳米粒的载药量、包封率和药物利用率分别为(1.70±0.09)%、(86.83±1.75)%和(17.48±0.52)%,纳米粒平均粒径为122 nm,各指标实测值与预测值偏差较小。结论星点设计可用于洛伐他汀-PLGA纳米粒制剂处方的优化,所建立的数学模型预测性良好。     

半乳糖化阿霉素白蛋白纳米粒的制备及其质量评价

目的:制备半乳糖化阿霉素白蛋白纳米粒,并考察了其形态、粒径、载药量、包封率和体外释药特性.方法:采用相分离法制备阿霉素白蛋白纳米粒,并在其表面偶联半乳糖苷,使之成为半乳糖化白蛋白纳米粒.激光扫描电子显微镜观察纳米粒的形态,马尔文激光粒度仪测定其粒径分布.采用紫外分光光度法测定纳米粒的载药量和包封率,并初步研究其体外释药特性.结果:电镜结果显示阿霉素纳米粒呈类球型,平均粒径为316.3 nm,纳米粒载药量为3.12%,包封率达91.82%,48 h体外累积释药率为55.71%.结论:本方法制备阿霉素纳米粒工艺简单且包封率较高.体外释药结果显示半乳糖化阿霉素白蛋白纳米粒具有明显的缓释作用.     

阿霉素磁纳米脂质体的制备研究

目的采用超小超顺磁纳米粒(USPIOs)作为内部磁性物质,制备阿霉素磁纳米脂质体,并探讨如何得到高效磁包封和药物包封的阿霉素磁纳米脂质体。方法采用逆相蒸发法,以USPIOs为磁核,制备阿霉素磁纳米脂质体,以透射电镜观察到的形态、磁纳米脂质体的粒径、其中包裹的铁含量、药物包封率为指标,考察阿霉素磁纳米脂质体制备时最佳的脂质和磁纳米粒比例。结果当USPIOs用量为1 mg·m L-1时,磷脂用量在6.5 mg·m L-1时,可形成包裹较完全的磁纳米脂质体。得到的磁纳米脂质体粒径为274.3 nm,包裹的铁含量可达(51.43±2.69)%,药物包封率可达(63.38±15.29)%。在4℃条件下放置1个月以内,形态仍较稳定。结论阿霉素磁纳米脂质体的形成与脂质体浓度和磁纳米粒浓度有很大关系,通过摸索条件,可得到最佳磁纳米粒包封率和药物包封率的磁纳米脂质体,这为下一步阿霉素磁纳米脂质体的性质考察奠定基础。     

星点设计-效应面法优化美斯地浓聚乳酸纳米粒处方

目的星点设计-效应面法优化美斯地浓聚乳酸纳米粒处方。方法以复乳液中干燥法制备美斯地浓聚乳酸纳米粒,以包封率和载药量为评价指标,在单因素试验的基础上,用星点设计对显著性因素进行优化,并进行二项式方程拟合,以效应面法选取较好的工艺条件进行预测。结果以效应面法优选出的最佳工艺为:美斯地浓投药量为49.20 mg,PLA浓度为3.31%,PVA浓度为3.41%。制备的美斯地浓聚乳酸纳米粒平均包封率和载药量分别为(51.98±1.28)%和(7.01±0.31)%(n=3),与二项式拟合方程预测值相差<2%。结论应用星点设计-效应面法优化美斯地浓聚乳酸纳米粒制备工艺,能够快速、准确的得到最佳制备工艺,预测性良好。     

芹菜素固体脂质纳米粒的制备

目的为芹菜素新型制剂的研究和开发提供实验基础。方法采用热熔超声法制备芹菜素固体脂质纳米粒;以包封率为指标,通过正交试验对处方进行优化。结果制备的纳米粒为类球形,包封率为63.11%,平均粒径为(135±18)nm,zeta电位为-18.90 mV,36 h体外累积释放95.74%。结论热熔超声法可用于制备芹菜素固体脂质纳米粒。     

Box-Behnken效应面法优化石杉碱甲纳米结构脂质载体处方

目的采用Box-Behnken效应面法筛选石杉碱甲纳米结构脂质载体最佳处方。方法采用熔融超声-高压匀质法制备石杉碱甲纳米结构脂质载体,分别以混合脂质(X1)、混合乳化剂(X2)和脂药比(X3)为考察对象,以粒径(Y1)、包封率(Y2)和载药量(Y3)为评价指标,利用三因素三水平Box-Behnken效应面设计法筛选石杉碱甲纳米结构脂质载体的最佳处方。结果按最优处方制备的纳米粒粒径为(121.67±3.21)nm、包封率为(89.18±0.28)%、载药量为(1.46±0.05)%,与预测值偏差均小于5%。结论采用Box-Behnken效应面法优化石杉碱甲纳米结构脂质载体处方是有效、可行的。     

N-琥珀酰壳聚糖纳米粒的制备及体外评价

目的制备N-琥珀酰壳聚糖纳米粒并对其进行体外评价。方法采用乳化溶剂挥发法制备N-琥珀酰壳聚糖纳米粒;以包封率、载药量及粒径为指标,采用正交设计法对处方进行优化;考察其理化特征及体外释药行为。结果纳米粒包封率及载药量分别为62.36%和18.98%,平均粒径及zeta电位分别为(206.6±64.7)nm和(-27.2±0.2)mV;1 h药物释放达到45%,随后药物的释药行为是一个缓释过程。结论作者采用乳化溶剂挥发法成功制得N-琥珀酰壳聚糖纳米粒。该方法制得纳米粒包封率较高,制备工艺简单。     

Preparation, characterisation and maintenance of drug efficacy of doxorubicin-loaded human serum albumin (HSA) nanoparticles

Human serum albumin (HSA) nanoparticles represent promising drug carrier systems. Binding of cytostatics to HSA nanoparticles may diminish their toxicity, optimise their body distribution and/or may overcome multidrug resistance. In the present study, doxorubicin-loaded HSA nanoparticle preparations were prepared. Doxorubicin was loaded to the HSA nanoparticles either by adsorption to the nanoparticles' surfaces or by incorporation into the particle matrix. Both loading strategies resulted in HSA nanoparticles of a size range between 150nm and 500nm with a loading efficiency of 70-95%. The influence on cell viability of the resulting nanoparticles was investigated in two different neuroblastoma cell lines. The anti-cancer effects of the drug-loaded nanoparticles were increased in comparison to doxorubicin solution. Based on these result a standard protocol for the preparation of doxorubicin-loaded HSA nanoparticles for further antitumoural studies was established.     

HPLC法测定人血浆中丁咯地尔的质量浓度

目的建立测定人血浆中丁咯地尔质量浓度的HPLC法,并应用该法研究盐酸丁咯地尔片在健康人体内的药动学。方法色谱柱为Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-50mmol.L-1磷酸二氢铵缓冲液-三乙胺(体积比25∶75∶0.05),检测波长为275 nm,内标为乌拉地尔。结果丁咯地尔质量浓度线性范围为20μg.L-1～6.000 mg.L-1,回归方程为Y=0.260 5ρ-0.904×10-3,r=0.999 5,提取回收率大于87%,日内和日间RSD均小于7%。18例健康志愿者分别经口给予盐酸丁咯地尔的受试制剂和参比制剂300 mg后,血浆中丁咯地尔的tmax分别为(1.56±1.26)和(1.19±0.84)h,ρmax分别为(2.458±0.887)和(2.595±0.725)mg.L-1,t1/2分别为(4.88±1.25)和(4.96±1.42)h,AUC0-24分别为(16.275±5.931)和(16.040±5.831)mg.h.L-1,AUC0-∞分别为(17.110±6.521)和(17.008±6.782)mg.h.L-1。结论此法简便、快速,适用于盐酸丁咯地尔药动学研究以及临床上血浆药物浓度监测。     

LC-MS法评价2种盐酸非索非那定制剂的人体生物等效性

目的建立LC-MS法测定人血浆中非索非那定浓度,评价盐酸非索非那定胶囊(受试制剂)与盐酸非索非那定片(参比制剂)的人体生物等效性。方法采用Kromasil C18(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相:甲醇-质量分数为1%的甲酸水溶液(体积比为88∶12);离子源:大气压化学电离源,扫描方式:选择离子监测,用于定量分析的离子分别为m/z502.15(非索非那定)和m/z383.00(内标氯雷他定)。本法用于健康受试者口服盐酸非索非那定受试制剂和参比制剂的生物等效性研究。结果非索非那定质量浓度在10.0~2000.0μg.L-1内线性关系良好,方法的定量下限(LLOQ)为10.0μg.L-1。受试制剂与参比制剂的主要药物动力学参数:tmax分别为(1.9±0.2)和(1.9±0.2)h;ρmax分别为(173±77)和(183±83)μg.L-1;t1/2分别为(5.6±2.6)和(5.8±2.4)h;AUC0-t分别为(982±583)和(1081±772)μg.h.L-1,AUC0-∞分别为(1 176±738)and(1 271±998)μg.h.L-1。盐酸非索非那定胶囊的相对生物利用度为(90.8±15.3)%(n=18)。结论 2种盐酸非索非那定制剂具有生物等效性。     

液质联用法测定人血浆中米格列奈的浓度

目的建立LC-MS/MS法测定人血浆中米格列奈的浓度,并研究其在健康男性受试者体内的药动学。方法血浆经液-液萃取。色谱柱:Agilent TC-C18柱,流动相:乙腈-水-甲酸(体积比为70.0∶30.0∶0.3),质谱检测采用多反应监测模式(multiple reaction monitoring,MRM),电喷雾离子源,分析时间:2.0 min。结果米格列奈线性为5.0～4 000.0μg.L-1,定量下限为5.0μg.L-1。日内、日间精密度(relative standard deviation,RSD)均不大于10.5%,准确度(relative error,RE)为-0.8%～-2.0%。健康男性受试者口服含米格列奈10 mg的受试制剂(规格:10 mg/片)和参比制剂(规格:5 mg/片)后主要药动学参数为:tmax分别为(0.375±0.079)和(0.396±0.166)h,ρmax分别为(887±292)和(902±298)μg.L-1,t1/2分别为(1.37±0.45)和(1.49±0.57)h,AUC0-t分别为(1047±379)和(1 067±430)μg.h.L-1,AUC0-∞分别为(1 070±394)和(1 092±433)μg.h.L-1。结论该法适用于米格列奈的药动学及生物等效性研究。     

制备工艺对多柔比星白蛋白纳米粒理化性质、体外释放及药动学的影响

分别采用去溶剂化法和乳化交联法制备多柔比星牛血清白蛋白(BSA)纳米粒,以BSA收率、包封率、载药量和粒径等为评价指标,优选处方工艺,并比较两种制备工艺所得制品的差异.结果表明,去溶剂化法和乳化交联法所得纳米粒外观均呈球形,差异不大,BSA收率、包封率、载药量、粒径及ζ电位分别为96.5％、92.9％,98.5％、97.4％,4.3％、3.6％,132.4、172.9 nm,-27.7、-19.9 mV.但制备工艺对体外释放行为和大鼠体内药动学行为影响较大,去溶剂化法和乳化交联法制备的多柔比星BSA纳米粒在生理盐水中48 h累积释放率分别为44.2％、63.8％;大鼠尾静脉给药后,去溶剂化法和乳化交联法所得制品的AUC分别是原药的1.5倍(P＜0.05)和1.1倍(P＞0.05),前法所得纳米粒在大鼠体内具有一定的缓释效果,而后法所得制品没有.     

新型鬼臼毒素衍生物的合成及抗肿瘤活性研究

目的通过对鬼臼毒素进行结构改造,寻找高效低毒的抗肿瘤先导化合物。方法运用拼合原理,将川芎嗪和天冬氨酸等结构片段引入鬼臼毒素结构中,通过1 H-NMR、13 C-NMR和HRMS确证结构;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法评价化合物对人肺癌细胞A549、人肝癌细胞HepG2和人乳腺癌细胞MCF-7的活性及对人正常肝细胞L-02的毒性,并采用4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色法观察优势化合物对细胞核形态的影响。结果得到3个新型鬼臼毒素衍生物,其中化合物P-02(IC 50=0.1998±0.08μmol·L^-1)对A549的抑制作用与阳性药阿霉素相当(IC 50=0.1881±0.06μmol·L^-1),较依托泊苷(IC 50=8.55±0.43μmol·L^-1)提高了40倍;该化合物对L-02的毒性(IC 50=0.6701±0.176μmol·L^-1)明显小于阿霉素(IC 50=0.04684±0.02μmol·L^-1);DAPI染色结果表明,化合物P-02通过诱发A549细胞核碎裂产生细胞毒性。结论与临床化疗药物依托泊苷和阿霉素相比,将川芎嗪和氨基酸片段引入鬼臼毒素后可增强抗肿瘤活性,降低毒性,为新型鬼臼毒素类先导化合物的发现提供了参考。     

甘草次酸长循环固体脂质纳米粒的制备与体外性能研究

目的:制备甘草次酸长循环固体脂质纳米粒(GA-LSLN),并对其体外性能进行考察。方法:采用乳化溶剂挥发-高压匀质法制备GA-LSLN,测定其粒径、Zeta电位、包封率和载药量,并对其体外释药进行研究;同时以地塞米松(DEXA)、游离甘草次酸(GA)和GA-LSLN作用于肝癌细胞SK-Hep-1和急性髓细胞白血病细胞MV4-11,采用MTT法考察细胞毒性。结果:GA-LSLN的平均粒径为130.1nm,Zeta电位为-36.2mV,包封率为94.6%,载药量为11.3%,其体外释放规律符合一级速率过程。DEXA、GA和GA-LSLN对SK-Hep-1细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为(199±10)、(32±7)、(141±5)μmol.L-1,对MV4-11的IC50分别为(25±3)、(20±5)、(63±4)μmol.L-1。结论:制备的GA-LSLN粒径、包封率和载药量均较理想,药物能达到缓释的作用,GA和GA-LSLN对肝癌细胞和白血病细胞均有较强的细胞毒性。     

载阿霉素介孔二氧化硅纳米粒的细胞毒性及细胞摄取

目的制备载阿霉素的介孔二氧化硅纳米粒(mesoporous silica nanoparticles,MSN),对其理化性质及细胞摄取行为进行初步研究。方法通过聚合法制备MSN,透射电镜表征纳米粒的形态,动态光散射粒径测定仪测定粒子的平均粒径及分布。紫外分光光度计测定阿霉素的负载行为,MTT比色分析法研究粒子的细胞毒性,激光共聚焦显微镜观察其人乳腺癌MCF-7细胞对载药粒子的摄取。结果纳米粒分布均一,平均粒径约70 nm(PDI<0.1),载药量质量分数达到20%。MCF-7细胞对载药粒子的摄取较快,空白纳米粒具有较低的细胞毒性。结论介孔二氧化硅纳米粒具有较高的药物载药量和良好的生物相容性,能较快地被对人乳腺癌MCF-7细胞摄取,有望成为一种新型的药物化疗载体。     

福辛普利和复方降压片对高血压患者胶原代谢的影响

目的本研究通过观察原发性高血压患者治疗前后胶原合成与分解的相关指标，探讨口服降压药物干预心肌基质胶原沉积的机制。方法原发性高血压患者83例，男35例，女48例，年龄30—70岁，平均（52．1±7．9）岁。健康对照组39例，男15例，女24例，年龄33～70岁，平均（53．4±7．6）岁。测量血压、心率、体重指数（body mass index，BMI）、腰臀比（waist／hipratio，WHR）等。高血压患者随机服用复方降压片或福辛普利，随访观察12—16个月。治疗前及观察结束时留取血清，酶联免疫吸附法（ELISA）检测金属蛋白酶-1（matrix metalloproteinase-1，MMP-1），放射免疫法检测Ⅲ型前胶原前肽（N-terminal propeptide of type Ⅲ procollagen，PⅢNP）。结果治疗前原发性高血压患者MMP-1显著低于健康对照组（5．35±4．17μg·L^-1vs6．40±3．55μg·L^-1，P=0．041），治疗前PⅢNP显著高于对照组（3．67±1．37μg·L^-1vs2．65±1．07μg·L^-1，P=0．001）。福辛普利组治疗前后MMP-1无统计学改变（P=0．626），PⅢNP无统计学改变（P=0．411）。用复方降压片组患者治疗后MMP-1升高（从4．87±3．76μg·L^-1到7．37±4．41μg·L^-1，P=0．001），PⅢNP下降（从4．07±1．13μg·L^-1到3．29±1．40μg·L^-1，P=0．021）。结论防止心肌基质胶原沉积除抑制RAAS系统和去甲肾上腺素等神经体液因素外，达到降压靶目标也是主要治疗方向。     

大鼠血浆中阿霉素HPLC-MS/MS测定法及其在药动学中的应用

目的建立大鼠血浆中阿霉素浓度的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)测定方法。方法色谱柱:Venusil ASB C18(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相:乙腈-5 mmol.L-1乙酸铵-甲酸(体积比为35.0∶65.0∶0.5),采用沉淀蛋白法,以多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)扫描方式检测,测定大鼠尾静脉注射阿霉素纳米胶束溶液后血浆中药物浓度。结果血浆中阿霉素质量浓度在1～1 000μg.L-1内线性关系良好,r=0.996 0;日内和日间精密度RSD≤13.2%;阿霉素的平均提取回收率为89.7%～95.7%;阿霉素在大鼠血浆中主要药动学参数为t1/2(30.5±5.2)h,ρmax(954.3±80.6)μg.L-1,AUC0-∞/(290.2±40.4)μg.h.L-1。结论该方法适用于阿霉素在大鼠体内药动学的研究。