大鼠认知障碍对糖代谢的影响及其与肝脏和骨骼肌糖原合成酶激酶-3β表达水平的关系

目的  探讨大鼠认知障碍对糖代谢的影响及其与肝脏和骨骼肌;糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）表达的关系,为糖代谢的神经调节机制研究提供新的实验依据。方法  Aβ1-42大鼠海马内注射构建认知障碍模型,血糖仪检测大鼠空腹血糖（FPG）,半定量反转录-聚合酶链反应法（RT-PCR）检测肝脏与骨骼肌GSK-3β mRNA的表达,蛋白印迹法（Western blot）检测肝脏与骨骼肌GSK-3β的表达。结果  ①实验组大鼠FPG为（7.99±0.15）mmol/L,与假手术组和对照组比较显著升高（P <0.05）。②实验组大鼠肝脏和骨骼肌GSK-3β mRNA表达水平分别为（0.47±0.03）和（0.26±0.02）,与假手术组和对照组比较均明显升高（P < 0.05）。③实验组大鼠肝脏和骨骼肌GSK-3β表达水平分别为（0.47±0.04）和（0.26±0.03）,均显著高于假手术组与对照组（P <0.05）。结论  大鼠认知障碍可引起血糖水平的升高,其机制可能与认知障碍大鼠肝脏和骨骼肌GSK-3β表达升高有关。

     

Notch1在肌成纤维细胞转化中的作用及表达变化

目的  探讨在成纤维细胞转化为肌成纤维细胞过程中,Notch1表达的变化规律,以及γ-分泌酶抑制剂（DAPT）抑制Notch信号后,对细胞转化的影响。方法  取新出生2～3 d SD大鼠的肺组织,用胰酶消化法分离肺成纤维细胞,再将培养至第3代的细胞分为3组：对照组、转化生长因子-β1（TGF-β1）组、TGF-β1+ DAPT组。对照组为空白对照,TGF-β1组加入5ng/ml TGF-β1,TGF-β1+DAPT组同时加入5 ng/ml TGF-β1及5μmol/L DAPT。采用免疫细胞化学法对α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达变化进行检测。同时通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及Western blot检测Notch1 mRNA和蛋白的表达变化。结果  α- SMA免疫细胞化学结果表明,对照组大部分细胞无染色,而TGF-β1组则可见大部分细胞内有黄色和棕黄色颗粒及条纹,DAPT组和对照组无明显差异。对照组、TGF-β1组、TGF-β1+DAPT组Notch1 mRNA表达量分别为（0.278±0.022）、（0.783±0.018）和（0.313±0.029）,对照组与TGF-β1组、TGF-β1组与TGF-β1+DAPT组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,对照组与TGF-β1+DAPT组比较差异无统计学意义（P >0.05）。对照组、TGF-β1组、TGF-β1+DAPT组Notch1蛋白表达量分别为（0.312±0.019）、（0.701±0.026）和（0.345±0.022）,组间比较结果同Notch1 mRNA。结论  Notch1可以促进成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化,进而促进肺纤维化。

     

2型糖尿病和糖调节异常患者胰岛α、β细胞功能的变化

摘要：目的  探讨2型糖尿病（T2DM）和糖调节异常（IGR）患者胰岛α、β细胞功能的变化。方法  选取2014年4月-2016年4月在该院就诊的T2DM和IGR患者120例。其中,T2DM患者68例（T2DM组）,IGR患者52例（IGR组）,同时选取健康体检者40例作为对照组,观察各组空腹状态下胰岛素稳态模型分泌指数（HOMA-β）、胰岛素稳态模型胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）水平。结果  T2DM组血糖、胰高血糖素和游离脂肪酸分别为（8.70±0.73）mmol/L、（210.11±40.14）nmol/L和（0.89±0.21）mmol/L,与IGR组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,T2DM组高于IGR组;T2DM组胰岛素水平与对照组比较,差异有统计学意义（P <0.05）;IGR组胰岛素水平与对照组比较,差异有统计学意义（P <0.05）;T2DM组HOMA-IR为0.83（0.42,1.10）,与IGR组、对照组比较,差异有统计学意义（P <0.05）;而HOMA-β为（3.61±0.72）,与对照组比较,差异有统计学意义（P <0.05）;各组空腹胰高血糖素与HOMA-IR水平呈正相关（P <0.05）,与HOMA-β呈负相关（P < 0.05）;T2DM组和IGR组空腹胰高血糖素与游离脂肪酸呈正相关（P <0.05）;口服葡萄糖耐量试验30、60、90和120 min时T2DM组胰岛素水平与IGR组、对照组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,IGR组与对照组比较,差异有统计学意义（P <0.05）;口服葡萄糖耐量试验30、60、90和120 min时T2DM组胰高血糖素水平与IGR组、对照组比较,差异有统计学意义（P <0.05）,IGR组与对照组比较,差异有统计学意义（P <0.05）。结论  T2DM和IGR患者胰岛α、β细胞分泌异常,其中胰高血糖素和游离脂肪酸水平升高,且与HOMA-IR和HOMA-β水平有相关性。

     

雌激素受体α、雌激素受体β、激活蛋白1、血管内皮生长因子在大鼠子宫内膜异位症模型中的表达及意义

目的  探讨雌激素受体α（ERα）、雌激素受体β（ERβ）、激活蛋白1（AP-1）、血管内皮生长因子（VEGF）在大鼠子宫内膜异位症（EMs）模型中的表达及意义。方法  采用皮下种植法建立大鼠EMs模型，选取建模成功的28只大鼠为模型组（n =28），观察大鼠EMs模型在位内膜及异位病灶的组织病理学改变，并通过免疫组织化学法检测对照组子宫内膜、模型组在位子宫内膜和异位病灶ERα、ERβ、AP-1、VEGF的表达情况。结果  ①大鼠EMs模型在位内膜及异位病灶腺体、间质血管明显增加；②大鼠EMs模型的异位病灶与对照组子宫内膜间ERα阳性率比较，差异无统计学意义（P =0.107），而其在位内膜中的表达较对照组比较，差异有统计学意义（P <0.01）。ERβ、AP-1（c-jun）蛋白、VEGF在模型组在位内膜及异位病灶中阳性率与对照组比较，差异有统计学意义（P <0.01），但其在位内膜及异位病灶中的表达比较，差异无统计学意义。结论  大鼠EMs模型在位内膜中ERα和ERβ均高表达，异位病灶中则仅表现为ERβ高表达，同时上调c-jun，VEGF的表达，ERβ可能在EMs的发生发展中起到较ERα更为重要的作用。

     

FOS样抗原2蛋白表达在新疆维吾尔族2型糖尿病中的应用

目的  比较FOS样抗原2（FOSL2）蛋白在新疆维吾尔族2型糖尿病（T2DM）及正常糖代谢（NGT）人群中的表达水平,并分析其表达与临床生化指标的相关性。方法  收取2013年10月-2014年10月新疆喀什地区维吾尔族T2DM及NGT对象各50例,测量并记录其一般临床指标,采集血液标本。生化分析仪测定空腹血糖（FPG）以及总胆固醇（TC）等糖脂代谢指标;全自动电化学发光分析仪及配套试剂测定空腹胰岛素（FINS）水平;高效液相色谱法（HPLC）测定糖化血红蛋白（HbAlc）;酶联免疫吸附法（ELISA）测定FOSL2蛋白表达水平。采用SPSS 19.0统计软件进行数据分析。结果  ①与维吾尔族NGT组比较,T2DM组的体重指数（BMI）[（25.02±3.19）vs（28.36±4.01）,P =0.000]、FPG[（5.45±0.69）vs（11.4±4.39）,P =0.000]、HbA1c[（6.21±1.30）vs（10.20±2.10）,P =0.000]、TC[（3.80±0.87）vs（5.16±0.87）,P =0.000]、TG[（1.48±0.85）vs（2.21±1.02）,P =0.000]、LDL-C[（2.26±0.83）vs（2.63±0.74）,P =0.018]水平较高,而HDL-C[（1.19±0.30）vs（1.03±0.34）,P =0.011]及FOSL2蛋白表达水平降低[（41.48±26.32）vs（18.09±9.48）,P =0.000];②与维吾尔族NGT组比较,T2DM组的FINS[（11.61±0.94）vs（16.13±1.61）,P =0.017]、稳态胰岛素评价指数（HOMA-IR）[（2.74±0.22）vs（7.81±0.75）,P =0.000]水平较高;③维吾尔族T2DM患者血清FOSL2蛋白表达水平与BMI（r =-0.44,P =0.005）、FPG（r =-0.39,P =0.013）、HbAlc（r =-0.34,P =0.044）、TC（r =-0.35,P =0.027）呈负相关。回归分析示BMI（β=-2.17,P =0.032）为FOSL2蛋白表达水平的影响因素。结论  FOSL2蛋白表达水平下调可能参与新疆维吾尔族胰岛素抵抗及T2DM的发生发展,BMI是维吾尔族T2DM的FOSL2蛋白表达水平的重要影响因素。

     

Ⅰ，Ⅱ期宫颈癌组织HIF-1α与COX-2蛋白共表达对预后的影响及机制

目的  探讨Ⅰ,Ⅱ期宫颈癌组织中HIF-1α与COX-2蛋白的共表达对预后的影响及可能的机制。方法  免疫组织化学法分析71例宫颈癌标本的HIF-1α和COX-2的共表达情况;RT-PCR法检测标本中HIF-1α mRNA和COX-2 mRNA的表达水平。χ2检验分析不同表达组患者1、2和3年存活率的差异;采用KM生存分析法了解不同表达组患者的存活时间的差异;采用相关分析了解蛋白及mRNA表达水平的相关性。结果  HIF-1α和COX-2共表达组患者的3年存活率低于非共表达组（P <0.05）;HIF-1α和COX-2共表达组患者的存活时间低于非共表达组（P <0.05）;在Ⅱ期患者中,HIF-1α的蛋白水平与COX-2 mRNA的水平正相关（rs  =0.594,P <0.05）。结论  在Ⅰ,Ⅱ期宫颈癌中,HIF-1α和COX-2共表达组预后较差;HIF-1α蛋白可能正向调控COX-2 mRNA的表达。

     

莲子心提取物对博来霉素致小鼠肺纤维化的干预作用研究

摘要：目的  比较莲子心提取物（LE）水洗脱（LEWW）和醇洗脱（LEAW）对博来霉素诱导小鼠肺纤维化（PF）的作用。方法  经气管一次性滴注博来霉素复制PF小鼠模型,给予2种LE灌胃21 d后,解剖肺脏,苏木精-伊红染色法观察小鼠肺组织炎症程度并进行炎症评分,Masson染色观察PF程度,计算肺系数,检测血清还原型谷胱甘肽（GSH）、一氧化氮NO,逆转录聚合酶链反应检测转化生长因子β1（TGF-β1）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白ⅢmRNA表达水平,酶联免疫吸附法检测肺组织匀浆TGF-β1、α-SMA及羟脯氨酸（HYP）的蛋白表达水平。结果  与模型组比较,LEWW和LEAW组GSH在血清中含量均升高,NO含量降低;肺组织匀浆中TGF-β1、α-SMA、HYP含量降低（P <0.05）。结论  LE对博来霉素所致PF小鼠有一定防治作用,其机制可能与LE抗氧化、抑制胶原蛋白形成及下调TGF-β1有关。

     

血清β2微球蛋白与2型糖尿病患者认知功能障碍的相关性研究

目的  研究血清β2微球蛋白与2型糖尿病（T2DM）患者认知功能障碍的相关性。方法  选取2015年6月-2015年10月在唐山市工人医院内分泌科住院的T2DM患者186例为病例组,同期体检健康者150例为正常组,收集其人口学资料及临床检验指标。采用放射免疫定量分析方法检测血清β2-MG水平,应用可重复的成套神经心理状态测量量表对所有人认知功能进行评定。结果  ①与正常组比较,T2DM组患者血清β2-MG水平明显升高（P <0.01）;②与正常组比较,T2DM组RBANS量表即时记忆、视觉广度、言语功能、注意力、延迟记忆、总分降低（P <0.05）;③在T2DM患者中,与低β2-MG水平组比较,高β2-MG水平组即时记忆、视觉广度、言语功能、注意力、延迟记忆评分以及总分更低（P <0.05）;④在T2DM患者中,β2-MG水平与即刻记忆、视觉广度、言语功能、注意力、总分成负相关（P <0.05）。结论  血清β2-MG水平上升是T2DM患者出现认知功能降低的危险因素之一。

     

白藜芦醇对人前列腺癌细胞株PC-3增殖及TGF-β1/Smad2信号通路影响研究

目的  探讨白藜芦醇对前列腺癌细胞株PC-3增殖及转化生长因子β1（TGF-β1）/Smad2信号通路的影响。方法  不同浓度白藜芦醇干预体外培养前列腺癌细胞株PC-3白藜芦醇不同时间。MTT检测白藜芦醇对PC-3细胞生长情况的影响,流式细胞术检测细胞周期的变化情况,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测细胞内TGF-β1和Smad2 mRNA和蛋白表达水平的变化情况。  结果  MTT结果显示白藜芦醇显著抑制了前列腺癌细胞的生长。流式细胞结果表明白藜芦醇明显降低了前列腺癌细胞S期含量而增加了G0/G1期含量。而TGF-β1和其下游因子Smad2的mRNA和蛋白水平的表达也明显受到白藜芦醇的抑制,且这种抑制作用呈浓度一时间依赖性。结论  白藜芦醇可能够通过阻断TGF-β1/Smad2信号通路抑制前列腺癌细胞生长前列腺癌。

     

血液透析合并慢性乙型肝炎患者血清β2-微球蛋白水平及其影响因素

目的  观察血液透析合并慢性乙型肝炎（简称慢性乙肝）患者血清β2-微球蛋白（β2-MG）水平,并探讨血清β2-MG的影响因素。方法  按照“慢性乙型肝炎防治指南（2010年版）”筛选行血液透析治疗的慢性乙肝患者,30例纳入研究。选择30例乙肝病毒（HBV）阴性的血液透析患者作为对照组;用t检验比较两组实验室指标,用多元线性回归分析法分析影响血清β2-MG的因素。结果  HBV阳性组血清β2-MG水平为（65.64±10.18）μg/ml,较HBV阴性组（44.90±12.81）μg/ml显著升高（P <0.010）。多元线性回归分析显示,血清β2-MG水平与血清清蛋白呈负相关（B=-0.001,P =0.015）,与HBV感染、透析龄及谷丙转氨酶呈正相关（B=14.127,P =0.000;B=0.421,P =0.001;B=0.077,P =0.032）。结论  血液透析合并慢性乙肝患者血清β2-MG水平较HBV阴性的血液透析患者显著升高,且与血清清蛋白、谷丙转氨酶、HBV感染及透析龄有关。

     

臭氧氧化后处理对肾脏缺血再灌注损伤的作用

摘要：目的  研究臭氧O3氧化后处理对大鼠肾脏缺血再灌注所致肾脏慢性纤维化的作用及相关机制。方法  将72例SD大鼠随机分为4组：假手术组（S组）、单纯缺血再灌注组（I/R组）、O3氧化后处理组（I/R+O3组）、氧气O2后处理组（I/R+O2组）,每组4只。每组在模型复制成功后2周检测血清肌酐（Scr）和血浆尿素氮（BUN）,2和10周取肾脏标本,进行苏木精-伊红染色法染色、Masson染色,以及免疫组织化学法检测转化生长因子β1（TGF-β1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达。结果  术后2周各组的血清Scr、血浆BUN基本恢复到正常范围,两组比较,差异无统计学意义（P >0.05）。术后10周Masson染色显示,肾纤维化程度,其他3组较S组重（P <0.05）,I/R+O3组较I/R组、I/R+O2组轻（P <0.05）,而I/R组与I/R+O2组比较,差异无统计学意义（P >0.05）。与S组比较,其他3组TGF-β1、α-SMA的表达增强（P <0.05）;与I/R组比较,I/R+O3组的表达减弱（P <0.05）;I/R组与I/R+O2组比较,差异无统计学意义（P >0.05）。结论  O3后处理可以减轻缺血再灌注损伤肾脏的慢性纤维化,其机制可能与O3后处理抑制转化生长因子-β1/Smad信号通路激活有关。

     

富生酮氨基酸饮食改善高脂诱导小鼠非酒精性脂肪肝

目的  探讨富生酮氨基酸（KAA）饮食对高脂诱导小鼠非酒精性脂肪肝的影响及机制。方法  C57BL雄性小鼠随机分4组,给予常规饮食（NC）、高脂饮食（HFD）、富生酮氨基酸高脂饮食（HFDKAAR）以及高脂喂养8周后改为富生酮氨基酸高脂饮食（HFD→HFDKAAR）喂养。每周测进食量、体重,16周后行腹腔内注射葡萄糖耐量实验后处死小鼠,测肝重量、内脏脂肪重量、肝脂质沉积、Kupffer细胞聚集及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素-1β（IL-1β）mRNA表达。结果  各组小鼠摄入热卡比较差异无统计学意义。与NC组比较,HFD组小鼠体重和内脏脂肪重量增加,伴随胰岛素抵抗,肝脂质沉积和Kupffer细胞数量显著增加,TNF-α和IL-1β mRNA表达增加（P <0.05）。与HFD组比较,HFDKAAR及HFD→HFDKAAR组小鼠体重、内脏脂肪下降,胰岛素抵抗均减轻（P <0.05）,肝脏Kupffer细胞的数量及脂质沉积减少,TNF-α和IL-1β mRNA的高表达均被逆转（P <0.05）。结论  高脂膳食能诱导出非酒精性脂肪肝小鼠模型,富生酮氨基酸饮食可抑制高脂诱导的肝脏Kupffer细胞的表达,显著改善高脂饮食诱导的肥胖、胰岛素抵抗、肝脂质沉积,减轻肝脏的炎症损伤。

     

Improvement of the function of islet beta and alpha cells by intervention against glucotoxicity: experiment with rats

OBJECTIVE: To investigate the effects of intervention against glucotoxicity on improvement of the function and pathological changes of islet beta and alpha cells. METHODS: Thirty-six male Sprague Dawley rats were randomly divided into four equal groups: normal control (NC) group, fed with standard chow, high-fat (HF) group, fed with extra high-fat chow; diabetes mellitus (DM) control group, fed with high-fat chow for 8 weeks followed by 30 mg/kg streptozotocin injection to establish DM models; and insulin (INS) group, treated with subcutaneous injection of long-acting insulin (glargine, 0.5 U x kg(-1) x d(-1)) for 4 weeks after the establishment of DM models. 48 h, 2 weeks, and 4 weeks after the STZ injection to the 2 DM groups oral glucose tolerance test (OGTT) was performed to all rats. Peripheral blood samples were collected from the caudal vein. Serum insulin level was assayed by radioimmunoassay. Total serum cholesterol (TC) and triglyceride (TG) were measured by enzyme-colorimetric method. By the end of experiment the rats were killed with their pancreases taken out. Immunohistochemistry was used to observe the morphological changes of the islet beta and alpha cells. Beta cell and alpha cell masses were calculated by the proportions of positive area in the islet. Proinsulin mRNA level was detected by RT-PCR. Insulin protein content in islets was detected by Western blotting. RESULTS: Four weeks after the insulin intervention against glucotoxicity, the fasting blood glucose and blood glucose 2 h after sugar-taking of the INS group were both significantly lower than those of the DM group (both P < 0.01). The relative beta cell mass of the INS group was 0.38 +/- 0.08, significantly bigger, 2.45 times, that of the DM group (0.11 +/- 0.05, P < 0.01). The relative alpha cells mass in islets of the INS group was 0.16 +/- 0.04, significantly lower, by 43%, than that of the DM group (0.28 +/- 0.15, P < 0.01). The insulin contents in beta cells of the INS group was 0.58 +/- 0.03, significantly higher, by 70.6%, than that of the DM group (0.34 +/- 0.14, P < 0.01). The proinsulin mRNA level of the INS group was 1.52 +/- 0.14, significantly higher, by 20.6%, than that of the DM group. CONCLUSION: The morphology of islet beta, alpha cells in diabetic rats was improved by four weeks of Intervention against glucotoxicity improves the pathology of islet beta and alpha cells in diabetic and insulin synthesis.     

孕期高糖饮食对血管紧张素Ⅱ介导的成年子代大鼠肠系膜动脉的影响

目的研究孕期母体高糖饮食对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）介导的成年子代大鼠肠系膜小动脉的影响。方法以孕期母鼠给予20％蔗糖水的成年子代大鼠为高糖组（HS）,孕期母鼠正常饮水的成年子代大鼠为对照组（C）;分离制备成年子代大鼠离体肠系膜小动脉,检测其对AngⅡ的反应,以及环磷酰胺（CTX）对AngⅡ介导的离体血管反应的影响;同步检测成年子代大鼠离体肠系膜小动脉中,AngⅡ介导的血管张力反应（血管直径变化）与血管细胞内游离ca2＋浓度的变化;以Western-blot方法检测成年子代大鼠肠系膜小动脉组织中BKct通道蛋白的表达。结果与对照组相比,高糖组中AngⅡ介导的肠系膜小动脉的收缩效应显著增强（P〈0．01）;CTX可明显降低由AngⅡ介导的高糖组肠系膜小动脉的收缩增强效应（P〈0．05）;高糖组中由AngⅡ介导的细胞内游离ca2＋浓度显著增加（P〈0．01）;高糖组肠系膜小动脉组织中BKα通道蛋白的表达显著低于对照组（P〈0．01）。结论孕期母体高糖饮食可对其成年子代大鼠AngⅡ介导的肠系膜小动脉的调控产生“印迹”效应。     

西妥昔单抗联合铂类化疗对人喉鳞癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤COX-2及MMP-7的影响

目的  探讨西妥昔单抗联合铂类化疗对人喉鳞癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤环氧化酶-2（COX-2）及基质金属蛋白酶-7（MMP-7）的影响。方法  选择BALB/c裸鼠24只为研究对象,均复制人喉鳞癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤模型,随机分为西妥昔单抗组、顺铂组、西妥昔单抗联合顺铂组及对照组,各6只。对照组腹腔注射0.9%氯化钠溶液0.2 ml,西妥昔单抗组腹腔注射1 036 μg/ml西妥昔单抗注射液,顺铂组腹腔注射3μg/ml顺铂注射液,西妥昔单抗联合顺铂组腹腔注射1 036 μg/ml西妥昔单抗注射液和3 μg/ml顺铂注射液,连续4周后,脱颈处理裸鼠。比较瘤体生长情况、COX-2与MMP-7表达及信使核糖核酸（mRNA）表达。结果  西妥昔单抗组、顺铂组、西妥昔单抗联合顺铂组瘤体体积及瘤重均低于对照组（P <0.05）,西妥昔单抗联合顺铂组瘤体体积、瘤重低于西妥昔单抗组与顺铂组,抑瘤率高于西妥昔单抗组及顺铂组（P <0.05）;西妥昔单抗组、顺铂组、西妥昔单抗联合顺铂组裸鼠肿瘤组织COX-2、MMP-7及mRNA表达均低于对照组（P <0.05）,西妥昔单抗联合顺铂组裸鼠肿瘤组织COX-2、MMP-7表达及mRNA表达低于西妥昔单抗组、顺铂组（P <0.05）。结论  西妥昔单抗联合铂类化疗有助于抑制喉鳞癌Hep-2细胞裸鼠移植瘤增殖生长,可能与抑制肿瘤组织COX-2与MMP-7表达有关。