抗8-AG和HGPRT缺失的人早幼粒白血病细胞突变株(HL-60-AR)的建立

用MNNG处理HL-60细胞和8-AG软琼脂集落形成方法,成功地筛选出一株抗高浓度8-AG和完全缺失HGPRT活性的人早幼粒白血病细胞突变株,命名为HL-60-AR。该株细胞能抵抗8-AG的毒性作用,对HAT选择培养基十分敏感,检测不到HGPRT活性,不能参入~3H-次黄嘌呤。HL-60-AR细胞基本上保持了野生型HL-60细胞的生物学特征。突变细胞已在体外培养11个月,传100多代,遗传标记仍然稳定。     

人宫颈鳞状上皮细胞癌克隆细胞系的研究 Ⅱ.HGPRT-突变型细胞系的建立及其生物学特性

用具有稳定遗传标记的突变型细胞进行体细胞杂交的技术,已被广泛应用。突变型细胞形式多样,次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶缺失(HGPRT-)的突变体细胞是常用的杂交亲本细胞类型。杂种细胞易于在HAT(含次黄嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶核苷)培养液中被筛选。本研究用N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)处理人宫颈鳞状上皮细胞癌克隆细胞系CC-801,诱发细胞突变,然后用8-杂氮鸟嘌呤(8-AG)进行筛选,成功地分离了几株抗高浓度8-AG的突变细胞株。经HGPRT酶活性检测和     

人胚胎胸腺细胞系HBT8810的建立和改造(简报)

据报道,人胚胎细胞及其提取物在临床上用于治疗肿瘤及某些危难病症,已取得较好疗效。本实验在体外建立了可供长期传代培养的人胚胎细胞系。经多次筛选培养,于1988年10月从1例经产妇人工流产的6月龄胎儿中取得胸腺,经分离培养获得1株人胎儿细胞,在体外连续传代培养已15个月以上,共传100余代,经液氮常规冻存复苏后细胞生长良好。该细胞经严格的8-AG诱变改造,在含20μg/ml 8-AG的培养液中能够生存繁殖;而在HAT选择培养基中则失去独立生存能力;已改造成为HGPRT酶缺陷型细胞     

抗8-AG和HGPRT酶缺失的人早幼粒白血病细胞突变株(HL-60-AR)的建立(摘要)

利用N-甲基-N-硝基-亚硝基胍处理HL-60细胞,再用含8-AG的软琼脂集落形成的方法,成功地筛选出一株抗高浓度8-AG(20μg/ml)和HGPRT酶缺失的人早幼粒白血病细胞突变株,命名为HL-60-AR。经过该细胞对8-AG抗性鉴定等一系列实验,结果表明该株细胞具有抗8-AG和HGPRT酶缺失的下列特征:(1)在含20μg/ml 8-AG的培养液中生长旺盛,其生长曲线与在普通培液中的生长曲     

HGPRT缺陷型T淋巴瘤细胞系的建立与鉴定

目的通过突变诱导次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)缺陷型的T淋巴瘤细胞系,为制备T细胞杂交瘤提供利于筛选的亲代细胞。方法通过乙基甲磺酸对Jurkat细胞进行突变,逐步提高培养液中6-巯基鸟嘌呤(6-TG)的浓度,筛选出对6-TG具有稳定抗性的单克隆细胞株Jur16-TG细胞。比较Jurkat细胞与Jur16-TG细胞在含6-TG培养液和HAT培养液中的生长情况。结果在含20μg/ml 6-TG的培养液中,Jur16-TG细胞能够稳定生长,而Jurkat细胞在培养1周后基本死亡。在HAT培养液中氨基喋呤的浓度为4×10-8mol/L或8×10-8mol/L时,Jur16-TG细胞4 d内基本死亡,而Jurkat细胞至少能存活7~10 d。Jur16-TG细胞与正常外周血淋巴细胞(PBL)的融合实验显示,35%的Jur16-TG细胞与PBL融合。结论突变筛选出的单克隆细胞株Jur16-TG具有6-TG抗性和在HAT培养液中不能生长的特性,证实该细胞为HGPRT缺陷型细胞株,并且该细胞株可有效地与原代淋巴细胞融合,从而为T细胞杂交瘤的制备提供了利于筛选的亲代永生化的T细胞。     

人肺巨细胞癌突变株HDM5和小鼠网织红细胞融合后珠蛋白基因表达的研究(简报)

为证实哺乳类红细胞调节因子对珠蛋白基因的调控作用,用人肺巨细胞癌突变株HDM5和小鼠网织红细胞进行细胞融合。亲代肿瘤细胞株HDM5是由人肺巨细胞癌细胞株PLA801—D95经N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)诱变,8-杂氮乌嘌呤(8-AG)筛选而获得的次黄嘌呤乌嘌呤磷酸核糖转移酶缺失(HGPRT~-)的突变株。亲代正常细胞网织红细胞由盐酸苯肼制造的昆明种小鼠获得。两者用聚乙二醇(PEG1000)促融,融和细胞经HAT培养基选择后获得数个杂种细胞克隆,定名为HDM5-MR     

双耐药淋巴母细胞株CKM的建立和特性研究

应用EB病毒转化技术,由人脐带血建立了3株淋巴母细胞株(CKM-c,CKM-1和CKM-8)。经1年余连续传代120次,细胞均保持良好的生长能力。3株细胞平均倍增时间为24.5～36h,电镜检查符合B淋巴细胞特征;EBNA、VCA-IgA,MA和EA4种EBV抗原均为阴性;染色体众数为48～50条。CKM-c在新城鸡瘟病毒诱导下,能产生高效价干扰素。CKM-8经6-硫代鸟嘌呤(6-TG)和乌苯苷双耐药培养,现已能耐受30μg/ml 6-TG和10~(-5)mol/L乌苯苷,成功地建立了1株对HAT敏感,HGPRTase缺损的双耐药淋巴母细胞,该细胞可作为亲本细胞,用于人-人杂交瘤研究工作。     

分泌脊髓灰质炎Ⅰ型单克隆抗体的杂交瘤细胞株E_(55)的建立(简报)

Kohler及Milstein创建的淋巴细胞杂交瘤技术,大大推动了生物医学的发展。在病毒学研究中,目前已用该技术制备出对多种病毒的单克隆抗体,并用于对相应病毒的抗原分析。但是,尚未见到脊髓灰质炎病毒单克隆抗体的报道。我们使用脊髓灰质炎Ⅰ型Branhilde株病毒感染猴肾细胞,以其组织培养液为抗原,免疫BALB/C鼠,以鼠脾制备成脾细胞悬液,并与NS-1瘤细胞混合,用聚乙二醇(PEG)作融合。融合后的细稀稀释于HAT选择     

人NKT细胞抗EB病毒的作用

目的:建立人胸腺重症联合免疫缺陷近交系(SCID)小鼠嵌合体模型并用此研究人NKT细胞的发育和分化及其抗EB病毒作用。方法:将人类胚胎胸腺细胞移植到SCID小鼠的胸腺建立人胸腺SCID小鼠嵌合体。用EB病毒感染已建立的人胸腺SCID小鼠嵌合体。检测嵌合体小鼠体内NKT细胞及EBV特异性NKT细胞的变化。结果:EB病毒有效的促进了NKT细胞以及EBV特异性CD8+NKT细胞的增殖,EBV感染嵌合体小鼠4周以后,每106嵌合体的胸腺细胞中可检测到3 000-3 500个EBV特异性NKT细胞,并且其中90%以上为CD8+。结论:成功建立人胸腺SCID小鼠嵌合体模型,并运用此模型发现人类EB病毒能特异性刺激NKT细胞增殖并且确定EBV特异性NKT细胞的存在。     

糖尿病B淋巴细胞株超微形态

电镜观察了8例 EB 病毒转化的糖尿病患者 B 淋巴细胞株和2例正常人 B 淋巴细胞。见糖尿病 B 淋巴细胞株的细胞与 PHA 刺激转化的淋巴母细胞以及 EB 病毒引起的 Burkitt 淋巴瘤细胞明显不同.而与文献报道的携带 EB 病毒的二倍体 B 淋巴细胞类似。但糖尿病 B 淋巴细胞株的细胞明显呈多形性.而且分裂增殖和运动更活跃,并具有吞噬活性.     

抗结核杆菌耐热抗原单克隆抗体杂交瘤细胞的建立及其特性的初步鉴定

目的：建立针对结核杆菌耐热抗原（Mtb-HAg）的单克隆杂交瘤细胞株,并对其产生的单克隆抗体的特异性和生物学活性作初步鉴定。方法：BALB/C小鼠用Mtb-HAg免疫3次后,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0以10∶1比例在50%PEG作用下细胞融合,随后在HAT培养液中进行选择性培养,常规有限稀释法筛选克隆和亚克隆化;用间接ELISA法测定单抗效价和特异性鉴定。结果：在细胞融合2次,筛选杂交瘤细胞3次和亚克隆化后,获得了3株杂交瘤细胞株,ⅠC12、ⅡE4、ⅡG8,效价分别为1∶32 000、1∶16 000、1∶16 000。其中ⅠC12杂交瘤株分泌的抗体仅与Mtb-HAg的蛋白峰Ⅰ有阳性反应,但ⅠC12单抗对Mtb-HAg激活人γδT细胞的活性没有明显影响。ⅡE4和ⅡG8杂交瘤株分泌的抗体与Mtb-HAg蛋白峰Ⅰ、峰Ⅱ、峰Ⅲ均无反应。结论：应用杂交瘤技术获得了三株能稳定分泌高滴度抗Mtb-HAg的单克隆抗体细胞株,其中ⅠC12对蛋白峰I有特异性。     

一株具有特殊生物学性状的EB病毒

作者分离出一株具有特殊生物学性状的EB病毒,H_(18)株。该株不同于其它EB病毒株,可转化人脐带血淋巴细胞,也能再感染Raji细胞,并诱导EA合成。它的形态与前已报道的EB病毒相同;H_(18)细胞株的核型为人型,男性。有关H_(18)株的生化和免疫学持征正在研究中。     

抗猪囊虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立和特性鉴定

目的：培养、筛选和克隆鼠源杂交瘤细胞株，生产相应特异的针对猪囊虫的单抗并用于临床。方法：用含有弗氏不完全佐剂和1单位IFN的猪囊虫下液皮下注射免疫7周龄小鼠3次后，无菌取出脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP^2/O，在含有50％PEG（分子量4000）的HAT培养液中进行融合，在37℃，含7％CO2的培养箱中培养，随后在正常培养液中进行筛选和克隆化。染色体分析用常规的中期染色体法，单抗类型的滴度测定用ELISA法。结果：用常规的有限稀释法对杂交瘤进行3次筛选和克隆化后获得3株杂交瘤细胞株2H10、5C2和5H6，分别有97、98、和106条染色体，均能稳定地分泌各自特异的单抗。2株单抗为IgG类，另1株为IgM类，滴度分别为1：1000、1：800和1：1600。结论：用杂交瘤技术，我们获得了3株杂交瘤细胞株，均能稳定地分泌高滴度的针对猪囊虫抗原的特异单抗。     

自发转化的人胚鼻咽部上皮细胞株的建立

近年来我们在研究鼻咽癌和EB病毒的相互关系中,发现人胚的鼻咽部细胞对EB病毒基因有激活作用并且对带EB病毒基因的类淋巴母细胞有吸附现象以及相互融合作用。在实验过程中,我们获得了一株自发转化的人胚鼻咽部上皮细胞株,并对其性状做了初步的研究。 1983年9月23日,取一个4个月龄的胎儿,按其解剖部位取鼻咽部细胞进行组织块培养。原代细胞中虽     

可表达EB病毒核抗原的鼻咽癌/淋巴瘤细胞杂交株

EB病毒作为鼻咽癌的病原因子之一,有充分的血清流行病学证据,在鼻咽癌组织中亦可检出EB病毒DNA和EB病毒核抗原(EBNA),但在以往从鼻咽癌组织建立的传代细胞系内未检出任何EB病毒标记。我们用细胞融合方法,建立了低分化鼻咽癌上皮细胞/淋巴瘤细胞的杂交株,能表达EBNA,对探讨EB病毒引起上皮细胞恶变的机制有一定意义。现简要报道如下: 一、材料和方法用作细胞融合的两个亲代细胞株分别为:(1)低分化鼻咽癌上皮细胞株CNE_2的     

抗EB病毒口服液对EB病毒抗原表达的抑制作用及其细胞毒作用

目的 观察抗EB(Epstein-Barr)病毒口服液对EB病毒抗原表达的影响及对鼻咽癌CNE2细胞的细胞毒作用。方法 用间接荧光法测定抗EB病毒口服液对Raji细胞早期抗原(early antigen，EA)表达及B95-8细胞病毒壳抗原(virus capsid antigen，VCA)表达的影响；用MTT法测定其对鼻咽癌CNE2细胞的细胞毒作用。结果 抗EB病毒口服液在无毒的浓度下，对Raji细胞EB病毒EA抗原表达有较强的抑制作用，其IC50值为0．667mg／mL：对B95-8细胞EB病毒VCA抗原表达有较强的抑制作用。其IC50值为0．89mg／mL；对正丁酸钠激发的B95-8细胞EB病毒VCA抗原表达亦有较强的抑制作用，其IC50为1．1mg/mL。抗EB病毒口服液对人鼻咽癌细胞CNE2的IC50为7．57mg／mL。结论 抗EB病毒口服液能抑制EB病毒抗原的表达,在较高的浓度下对鼻咽癌细胞CNE2具细胞毒作用。     

猴内皮细胞连续细胞株低密度脂蛋白受体的结合特性

本文用细胞-生物素-亲和素-酶联测定法(细胞-BA-ELSA)和生物素-亲和素-酶联免疫测定法(BA-ELISA)研究了RF/6A细胞(猴内皮细胞连续培养株)的低密度脂蛋白(LDL)受体结合特性.结果显示:这一内皮细胞株的LDL受体的离解常数(Kd)为9.6μg/ml,最大高亲和性结合量(Bmax)为211ng/mg细胞蛋白.当细胞生长至融合状态时,其LDL受体活性只有未融合时的三分之二.细胞在高脂培养液(254μg胆固醇/ml)、普通培养液(49μg胆固醇/ml)和无脂培养液中,其LDL受体活性分别是119±8ng/mg细胞蛋白、155±13ng/mg细胞蛋白和280±25ng/mg细胞蛋白,三组相互比较P<0.01,显然受体活性受培养液中胆固醇浓度的调节.     

间接免疫萤光法对鼻咽癌患者血清中EB病毒VCA-IgA抗体的测定

自从1964年印EpStein等报告从非洲儿童淋巴瘤(又称Burkittts淋巴瘤)中发现EB病毒以来,国内外学者对EB病毒与鼻咽癌关系的研究陆续有报导。我们于1979年共收集鼻咽癌等14种恶性肿瘤患者血清194份,应用间接免疫萤光法对血清内EB病毒壳抗原—免疫球蛋白A(VCA—IgA)抗体进行检测,并与酶标抗体法结果进行了比较。材料与方法靶细胞的制备:由中国医学科学院病毒研究所引进B_(95-8)细胞株(壳抗原阳性率为5——10％)用我室配制的RPMI1640培养液培养,培养液内含20％小牛血清及按常规加入抗菌素(青霉素100单位/ml、链霉素100微克/ml),于37℃温箱内培养3～4天后,收获细胞,将细胞滴在印有小圆孔的载玻片上,然后用丙酮在4℃下固定15分钟,此片密封存放于有CaCl~2的干燥器中备用。     

抗辣根过氧化物酶单克隆抗体的研制和鉴定

用国产辣根过氧化物酶(HRP)免疫BALB/C鼠,取免疫脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,获得了7株分泌HRP特异性抗体的杂交瘤细胞株,其培养上清液的效价为256～4096,腹水效价为1024×10~3～4 096×10~3.上述7株细胞株中的6株所产生的单克隆抗体均能制备出质量良好的鼠单克隆PAP复合物,用于免疫组织化学及血清学研究均取得较理想效果。将7株分泌HRP特异性抗体的杂交瘤细胞株适应于含8-氮杂鸟嘌呤培养基中,诱导出了对HAT敏感的突变细胞株,为研制双特异性单克隆抗体奠定了基础。     

核酸重组和标记新方法的建立及在EB病毒核酸研究中的应用

鼻咽癌病毒病因的研究是在大量血清流行病学的基础上,建立分子生物学手段检查癌上皮细胞中的EB病毒基因,用以阐明鼻咽癌与EB病毒的关系:(1)除人的B淋巴细胞外,在其他类型的细胞中EB病毒均不能复制,带EB病毒的淋巴母细胞株也只产生极少的病毒颗粒;(2)从病毒感染的细胞中制备病毒核酸,不可避免地会污染少量细胞DNA,而直接影响了反应的特异性,因此迫切需要用基因工程手段制备EB病毒核酸;(3)直接研究癌组织中的EB病毒核酸,需要更敏感而有效的探针,以用于原位核酸杂交技