川芎嗪对AngⅡ诱导的VSMCs增殖中CaM和CaN活性的影响

目的探讨不同浓度川芎嗪在不同作用时间内对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的VSMCs(VSMCs)增殖的抑制作用.方法建立AngⅡ诱导VSMCs增殖模型,用酶促反应定磷法观察不同浓度的川芎嗪在不同时段内对VSMCs中钙调蛋白(CaM)和钙调神经磷酸酶(CaN)活性影响.结果成功建立AngⅡ诱导的VSMCs增殖模型,川芎嗪各组CaM和CaN活性随川芎嗪的浓度和作用时间的延长而显著下降(P＜0.01).结论川芎嗪对AngⅡ诱导的VSMCs增殖的抑制作用有剂量和时间依赖性,其抑制机制可能与其干预CaN依赖的信号转导途径有关.     

脊髓钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ-NR2B信号通路参与小鼠骨癌痛的形成

目的 探讨鞘内注射钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ( CaMKII)抑制剂KN93对骨癌痛小鼠脊髓NR2B蛋白表达的影响及机制.方法 SPF级雄性C3 H/HeJ小鼠36只,采用随机数字表法分为3组:假手术组(S组n=8)、骨癌痛组(BP组n=8)和KN93组(K组n=20).BP组和K组采用股骨远端骨髓腔注射20μl含NCTC 2472纤维肉瘤细胞的α-MEM的方法制备骨癌痛模型,S组骨髓腔注入不含NCTC 2472细胞的同体积α-MEM.K组于接种肿瘤细胞后14d鞘内注射溶于20％ DMSO的KN93 60 nmol/5μl,BP组和S组鞘内注射20％ DMSO 5μl.分别于肿瘤细胞接种前1d、鞘内注射KN93或溶媒前1 h、注射后1,2,4,24h(T0～5)时各组随机取8只小鼠,采用von Frev丝测定机械痛阈,并于各时点随机取3只小鼠处死取脊髓L3～5节段,采用Western blot法测定NR2B蛋白的表达.结果 与S组[机械痛阈(1.78 ±0.31)g、NR2B(0.33 ±0.04)]相比,除K组T3时机械痛阈差异无统计学意义(P＞0.05)外,BP组[(0.50±0.11)g]和K组[ (0.52 ±0.10)g]机械痛阈均降低(P＜0.05),BP组(1.78±0 34)和K组T2～5[分别为(1.11±0.14)、(0.73±0.03)、(1.11±0 15)、(1.89±0.32)]脊髓组织NR2B蛋白表达均上调(P＜0.05);与BP组相比,K组T2～4机械痛阈升高,NR2B蛋白表达下调;与给药前T1相比,除K组T2～4机械痛阈升高外,各组各时点该指标差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 鞘内注射KN93缓解小鼠骨癌痛的同时降低小鼠脊髓NR2B蛋白表达,CaMKII-NR2B信号通路可能参与了骨癌痛的形成.     

鼻咽癌细胞培养上清对正常人淋巴细胞钙调蛋白、白细胞介素-2、白细胞介素-2受体活性及T淋巴细胞增殖的影响

观察鼻咽癌低分化细胞株(CNE-2)培养上清(CNE-2S)对正常人外周血淋巴细胞(PBL)的作用,结果表明:CNE-2S可明显抑制正常人T淋巴细胞的增殖,白细胞介素-2(IL-2)的产生及钙调蛋白(CaM)的活性。但对IL-2受体活性无明显影响。提示CNE-2S有可能是通过抑制淋巴细胞内CaM的活性,使细胞代谢改变,而阻碍T淋巴细胞增殖。     

肾上腺素β3受体调节大鼠逼尿肌舒张的机制

目的探讨肾上腺能β3受体(β3-AR)调节逼尿肌舒张的机制。方法应用激光共聚焦显微镜观察不同浓度β3-AR激动剂BRL37344A对氯化钾和咖啡因诱发的大鼠逼尿肌细胞钙荧光强度的变化,流式细胞仪测定β3-AR激活后细胞内CaM活性变化。结果较高浓度(1×10-6mmol/L及1×10-4mmol/L)的BRL37344A分别使氯化钾诱发的细胞内钙荧光强度的峰值下降了18.2%和28.3%,而低浓度BRL37344A对氯化钾诱发的细胞钙离子跨膜内流无显著影响;不同浓度的BRL37344对咖啡因诱发的细胞肌浆网内储存钙的释放均无明显影响(P>0.05)。β3-AR激活后细胞内活性CaM含量明显增加。结论 BRL37344A抑制电压门控钙通道的开放,减少钙离子跨膜内流。Ca2+-CaM信号传导途径参与了β3-AR介导逼尿肌细胞舒张调节过程。     

盐酸利多卡因神经毒性损伤大鼠脊髓钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ的表达

目的 观察大鼠鞘内注射盐酸利多卡因神经损伤后脊髓钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(calcium/calmodulin dependent protein kinase Ⅱ,CaMK Ⅱ)的表达变化.方法 鞘内成功置管的雄性SD大鼠48只,体质量(230±20)g,用随机数字表法将大鼠分成4组(n=12,其中行为学检测大鼠8只,免疫印迹实验大鼠4只):正常组(C组)、假手术组(S组)、溶媒组(D组)、10％利多卡因组(L组).分别于给药前、给药后2h、4h、8h、12h、1d、2d、3d、4d、5d等时点检测大鼠机械缩腿阈值(Mechanical withdrawal threshold,MWT)和热缩腿潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL).并于给药后12h取4只大鼠脊髓腰膨大,免疫印迹检测大鼠脊髓腰膨大CaMKⅡ的表达.结果 C组、S组和D组大鼠MWT的基础值分别为(11.2±3.1)g、(11.8±2.2)g和(11.4 ±2.4)g,其余各时间点与基础值比较差异无统计学意义(n=8,P＞0.05);L组大鼠MWT在给药后2h、4h、8h、12h、1d、2d、3d、4d时点显著增加(n=8,P＜0.01),分别为(22.0±6.6)g、(22.2 ±5.3)g、(20.5 ±5.8)g、(18.5 ±4.3)g、(16.7 ±3.2)g、(15.2 ±3.1)g、(15.5 ±3.5)g、(13.7±2.4)g.与MWT结果相似,C组、S组和D组大鼠TWL的各时间点比较差异无统计学意义(n=8,P＞0.05);L组大鼠TWL在给药后2h、4h、8h、12h、1d、2d、3d时点显著增加(n=8,P＜0.01).C组、S组、D组及L组大鼠脊髓CaMK Ⅱ表达分别为0.17±0.03、0.16 ±0.03、0.19 ±0.05、0.42 ±0.11,L组大鼠表达显著增加(n=4,P＜0.01).结论 鞘内注射盐酸利多卡因可致脊髓CaMK Ⅱ表达显著增加,提示CaMK Ⅱ可能与盐酸利多卡因所致的神经损伤有关.     

钙调蛋白的分子生物学

钙是机体重要的调节因子之一,它同CAMP一样可作为第二信使广泛参与生命活动的调控。现已证实,钙几乎都是与钙调蛋白(Calmodulin,CaM)结合成活性复合物而完成其调控功能。CaM的分布无所不在,且与钙平行,标志着它具有普遍的生物     

鞘内注射钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ抑制剂KN93对骨癌痛小鼠痛行为的影响

目的 探讨钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在骨癌痛发病机制中的作用.方法 雄性C3H/HeN小鼠40只分为5组:假手对照Sham组(S组n=8),癌痛模型对照Control组(C组n=8)和KN93 Treat组(T1组n=8、T2组n=8、T3组n=8).C组和T组(T1、T2、T3)小鼠左侧股骨远端骨髓腔接种溶于α-MEM的NCTC 2472纤维肉瘤细胞,建立骨癌痛模型;S组小鼠骨髓腔注入不含NCTC 2472细胞的α-MEM.在术后的第14天S组和C组鞘内注射20%DMSO 5μl,T1、T2、T3组分别鞘内注射溶于20%DMSO的KN93 15 nmol/5μl、30nmol/5μl、60nmol/5μl.各组于给药前及给药后的0.5 h、2h、4h、8 h检测小鼠的自发抬足次数、机械性缩足反射阈值(PWMT)和热缩足反射潜伏期(PWTL).结果 鞘内给予KN9315 nmol对骨癌痛小鼠痛行为无影响,鞘内给予KN93 30nmol、60nmol能剂量依赖性减轻小鼠痛行为反应,给药后0.5 h 2组小鼠自发抬足次数[(7.25±1.49)次、(4.12±1.36)次]比C组[(11.62±1.92)次]降低,PWMT[(1.28±0.14)g、(1.75+0.46)g]、PWTL[(14.64±2.12)s、(16.85±1.61)s]比C组[(0.47±0.16)g、(11.32±1.68)s]升高,差异有显著性(P＜0.05).作用2h达到高峰,维持到4h左右,8 h后基本消失.结论 CaMKⅡ在骨癌痛的发病中起重要作用,鞘内注射KN93能够剂量依赖性改善骨癌痛小鼠的痛行为.     

尼莫地平对癫痫大鼠海马Ca^2＋浓度及Ca^2＋/钙调蛋白依赖性蛋白激酶K表达的影响

目的探讨尼莫地平（nimodipin，NIM）对戊四氮（pentylenetetrazol，PrZ）点燃癫痫大鼠空间学习记忆能力及海马细胞内游离Ca^2＋浓度（[Ca^2＋]）、Ca^2＋／钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ。（calcium／calmodulin—dependent protein kinase Ⅱn，CaMKⅡα）蛋白表达的影响。方法将动物分为正常对照组、PTZ组和NIM＋PTZ组，采用P佗慢性点燃癫痫模型，应用Mor—ris水迷宫观察各组大鼠空间学习记忆能力，运用流式细胞仪检测海马细胞内[Ca^2＋]．变化，Western blot方法测定CaMKⅡα蛋白的表达。结果PTZ组大鼠空间学习记忆能力受损，其海马细胞内[Ca^2＋]．明显升高（P〈0．05），CaMKⅡα蛋白水平较正常对照组减少（P〈0．05）；与PrZ组比较，NIM＋PrZ组大鼠空间学习记忆能力好转，其海马细胞内[Ca^2＋]．下降（P〈0．05），CaMKⅡα蛋白水平升高（P〈0．05）。结论PTZ点燃癫痫大鼠海马存在钙超载及CaMKⅡα的表达异常，由此引起大鼠空间学习记忆能力受损；NIM可以降低细胞内[Ca^2＋]．，提高CaMKⅡα的表达，改善癫痫大鼠的学习记忆能力。     

钙调蛋白抑制剂(氯丙嗪)增敏热化疗的动物实验研究

本文介绍了钙调蛋白抑制剂(氯丙嗪)增敏热化疗治疗恶性肿瘤的动物实验。结果表明:单纯加热治疗对S180的生长有一定的抑制作用;氯丙嗪联合热化疗疗效明显优予热化疗,实验还探讨了氯丙嗪在热化疗前或后及前后均使用及使用长短的意义,结果显示疗效按前后处理、后处理、前处理逐步降低,作用时间长疗效增加。作者复习了有关文献认为,前处理仅为相加作用,后处理有增敏作用,前后同时处理则综合了这两方面的作用。氯丙嗪对热化疗的增敏作用是明显的,可望用于恶性肿瘤的综合治疗。     

人参皂苷Rb1、Re对Aβ25-35诱导SK-N-SH细胞损伤的保护作用

目的观察人参皂苷Rb1和Re对Aβ25-35诱导损伤SK-N-SH细胞的保护作用进而研究其内在机制。方法用Aβ25-35处理人神经母细胞瘤细胞(SK-N-SH细胞),模拟阿尔茨海默病的神经元损伤,并以适当浓度人参皂苷Rb1或Re处理。采用MTT法测定细胞存活率,荧光探针法检测细胞内ROS水平变化,Western blot法检测tau蛋白磷酸化水平及活性GSK-3β蛋白表达。结果培养基中添加Aβ25-35后SK-N-SH细胞存活率明显下降,而人参皂苷Rb1和Re均能显著提高损伤细胞的存活率,降低细胞内ROS水平,降低活性GSK-3β的表达,造成tau蛋白396位点的磷酸化程度下降,缓解tau蛋白的过度磷酸化。结论人参皂苷Rb1和Re对Aβ25-35诱导损伤的SK-N-SH细胞具有一定的保护作用。     

长时程增强形成机制的研究进展

突触传递的长时程增强 (LTP)现象 ,作为信息贮存的客观指标 ,已在中枢神经系统的多个区域进行了广泛的研究 ,对其形成机制的探讨也获得了大量实验资料。LTP的形成和维持是突触前和突触后机制的联合作用 ,而以突触后机制为主。关于LTP形成的突触后机制的研究主要集中在N 甲基 D 天冬氨酸 (NMDA)受体被激活后的细胞内级联反应。近年来 ,“寂静突触”[1] 概念的提出 ,使人们对LTP产生的突触后机制有了新的认识 ,使君子氨酸 (AMPA)受体功能和 /或数目的改变可能参与了LTP形成的突触后机制。1　 钙离子与LTP突触前和突触后神经元内…     

钙调神经磷酸酶在心肌缺血再灌注致凋亡中的作用

钙调神经磷酸酶（Calcineurin,CaN）是迄今发现的惟一受Ca2＋/钙调素（CaM）调节的丝/苏氨酸（Ser/Thr）蛋白磷酸酶,在分类上属于磷蛋白磷酸酶-2B（PP-2B）。20世纪70,80年代首先在猪脑中发现并纯化成功,由于它能和钙调蛋白（CaM）结合且在动物神经元中大量存在,Klee将其命名为Calcinurin,汉译为钙调神经磷酸酶。     

大鼠全脑缺血及灌注时不同脑区钙调蛋白含量的变化

本研究采用阻断大鼠四条血管的全脑缺血模型,用酶联免疫吸附测定法观察下丘脑、海马、额叶大脑皮层和小脑中钙调蛋白(CaM)含量的变化。结果发现缺血30min后,除额叶大脑皮层外,上述脑区的CaM含量都明显下降;缺血30min再灌注6h后,CaM含量又进一步下降。提示在急性全脑缺血所致脑细胞损伤的发生发展过程中,脑组织中CaM含量的降低可能起着重要作用。     

钙调磷酸酶Aα基因过表达在缺血/再灌注和肾上腺素能受体介导的心肌凋亡中的作用

目的研究腺病毒介导钙调磷酸酶Aα基因(AdCnAα)过表达对缺血/再灌注和肾上腺素能受体介导的心肌凋亡中的作用及p38MAPK的变化。方法体外培养乳鼠心肌细胞,分别给予Iso(10μmol/L) 缺氧24h/复氧4h(Iso H/R)及感染重组腺病毒(AdCnAα) Iso H/R处理,观察AdCnAα对Iso H/R诱导的心肌细胞凋亡的影响。用DNALadder法及流式细胞仪DNA含量测定法(PI标记)检测心肌细胞凋亡,用RT-PCR法和Westernblot法分别检测CaNmRNA及蛋白表达,用Westernblot法检测p38、p-p38MAPK的变化。结果CnAα过表达组(AdCnAα Iso H/R)的心肌细胞凋亡率比Iso H/R组明显增加(14.247±0.525vs10.763±1.554,P<0.01),且均高于正常对照组;同时p-p38MAPK的表达也比正常对照组增加(2.42±0.19vs1.60±0.22,P<0.01);p38MAPK的表达在干预前后同正常对照组比较无差异性变化(P>0.05)。结论腺病毒介导的CnAα过表达可使Iso H/R共同作用诱导的心肌细胞凋亡率增加,p38MAPK可能参与了CaN促进Iso H/R诱导心肌细胞凋亡的信号转导过程。     

钙调素拮抗剂亲脂区与亲水区之间连接链距离的研究

目的：研究钙调素拮抗剂亲脂区与亲水区之间连接链最佳的距离。方法：采用Fibonacci寻找法设计并合成了不同长度侧链的1，2－二苯乙烯类钙调素拮抗剂。结果：它们的拮抗活性表明，随着连接亲水部分氨基与亲脂苦环部分的碳链的增长，其活性增强。分子图形学研究显示，随着碳链的增长，氨基与钙调素Glu84，87的羧基的距离缩短，静电相互作用增强，拮抗剂与钙调素的结合能增加，并在碳链个数7左右达到一个极值。结论：在1，2-二苯乙烯类钙调素拮抗剂中，连接亲脂区与亲水区的脂肪链的碳原子的最佳个数在7左右。     

Ca^2＋／CaM在植物血凝素促淋巴细胞分裂中的分子调节机理：（一）Ca^…

实验材料为小鼠脾淋巴细胞，应用ＭＴＴ微量自动化色法判断细胞分裂状况，观察植物血凝素（ＰＨＡ）的促脾淋巴细胞分裂活性和Ｃａ＾２＋的影响。结果发现，加Ｃａ＾２＋的最大刺激组的吸光度（Ａ）值比对照组（未加Ｃａ＾２＋的ＰＨＡ组）提高了３５．４％（两组Ａ值分别为０．３９０和０．２８８），Ｃａ＾２＋的最大刺激浓度为４％葡萄糖酸钙。结果表明Ｃａ＾２＋参与细胞增殖的调节，并有增强ＰＨＡ的有丝分裂原活性的作用。     

钙调神经磷酸酶活性与皮层神经元轴突生长的相关性研究

目的研究钙调神经磷酸酶（calcineurin,CaN）与皮层神经元轴突生长的相关性。方法原代培养大鼠大脑皮层神经元。细胞分为正常对照组和环孢霉素A（Cyclosporin A,CsA）处理组。CsA处理组是在细胞更换无血清的NB培养基2h后加入10nmol/L CsA刺激。采用倒置相差显微镜和数码影像采集系统观察培养3、7、10d的神经元,并用SPOT软件测量神经元轴突长度。CaN活性采用酶底物显色的方法进行检测。结果10nmol/L CsA刺激后3d和7d的神经元轴突均能较显著地增长（P〈0.05）,而这种作用在10d更为明显（P〈0.01）;而所有时相点神经元CaN的活性均受到显著抑制（P〈0.01）。CsA处理组各时相点CaN活性与皮层神经元轴突的长度均呈显著负相关（r=-0.994,-0.990,-0.998,P〈0.01）。结论CaN活性与皮层神经元轴突的生长呈负相关。     

镉对细胞信号转导系统干扰作用研究进展

镉（Cd）是常见的环境和工业毒物，可通过食物与饮水摄入、吸烟及职业接触等途径进入人体．生物半衰期长达10～35年。Cd被美国毒物管理委员会（ATSDR）列为第6位危害人体健康的有毒物质。Cd具有多器官多系统毒性，不仅可引起骨骼、肾脏、肝脏的损伤．还具有明显的生殖内分泌干扰作用，而Cd作为高度可疑的具有雌激素样作用的物质已越来越受到关注。Cd的毒性机制问题一直是个难点、热点问题，近年来国内外开展了一系列Cd对细胞信号转导系统干扰作用的研究，并取得了一些进展，深化了Cd的毒性机制研究与认识。笔者就Cd对Ca^2＋相关信号通路、促丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路以及cAMP—PKA信号转导系统影响的相关报道作一综述。