荧光探针定量PCR技术

PCR技术是通过对基因的选择性片段进行体外高效扩增,实现目的基因的检测。荧光探针定量PCR(FQ-PCR)是一种新的基因定量检测技术,国外文献多用“实时定量PCR(real time quantitative PCR)”或“TaqMan PCR(以美国PE公司商标命名)”。该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针,巧妙地把核酸扩增(PCR)、杂交及光谱技术结合在一起,从而实现了对目的基因的准确定量检测,正发展成为临床实验诊断的常规技术。     

荧光定量PCR技术在结核杆菌检测中的初步探讨

目的:探讨荧光定量PCR技术在结核病诊断中的价值。方法:应用荧光定量PCR技术对我院102例门诊及住院病人的痰、胸腔积液、尿等标本进行结核杆菌DNA检测,同时涂片镜检与培养,并对3种方法检测的阳性率进行比较。结果:荧光定量PCR阳性率为48%、涂片抗酸染色法阳性率为15%、结核培养法阳性率为14%。结论:荧光定量PCR技术较传统方法具有较高的敏感性与特异性,尤其对涂片染色与结核培养阴性的结核病具有更大的诊断价值。     

结核分枝杆菌荧光PCR试剂盒的研制及临床试验

目的：用荧光PCR(fluorescence PCR,F-PCR)方法研制结核分枝杆菌（TB）DNA检测试剂盒，通过临床试验评价其性能，并与其他方法进行比较。方法：F－PCR是PCR和荧光探针杂交技术结合所产生的PCR方法。由于采用完全闭管荧光检测，避免了PCR后处理导致的假阳性污染；又采用了荧光检测技术，可以提高检测的灵敏性。应用F－PCR检测了297份肺结核病人和249份非结核对照者的痰液标本，以改良罗氏培养法、金胺荧光染液涂片法、Abbott公司LCx试剂盒检测作为对照。结果：设计合成了TB F－PCR诊断试剂盒。检测阳性率49．1％，灵敏性89．2％，特异性98．8％，符合率93．6％。结论：F－PCR在灵敏上显著优于培养法和涂片法，与LCx试剂盒检测无显著差异。F－PCR试剂盒可以检测TB的真实感染情况，对于临床诊断和疗效考察有一定的指导意义。     

实时荧光PCR和RT—PCR方法检测登革病毒的比较研究

目的通过2种检测登革病毒方法的比较，以提高检测登革病毒的灵敏度和特异性。方法利用Taqman MGB技术，根据登革病毒3’端非编码区的一段高度保守序列，设计登革1～4型荧光PCR通用引物和TaqmanMGB探针，以登革热毒株作为标准，以乙脑毒株作对照，建立实时荧光PCR检测登革病毒的快速方法。并对10份ELISA法检测阳性的临床血清标本进行RT—PCR及荧光PCR扩增。结果RT—PCR检测10份临床血清标本，2份阳性，阳性率为20％。实时荧光PCR检测登革病毒与乙脑病毒无交叉反应，检测10份临床血清标本，5份阳性，阳性率为50％。从RNA提取到检测结果仅需4h。结论Taqman MGB实时PCR检测方法快速、敏感性高、特异性强，可作为登革病毒的快速检测方法，应用于登革热的临床早期诊断。     

实时荧光定量PCR在念珠菌研究中的应用

念珠菌作为院内感染的常见机会性致病菌,实时荧光定量PCR技术已应用于念珠菌临床快速诊断、基因分型、耐药等研究。实时荧光定量PCR技术以灵敏、快速、安全、准确、高通量等特性,不仅在分子生物学领域作为常规的分析检测方法,而且在医院临床标本病原体的检测、遗传性疾病的诊断、检疫、法医学标本的鉴定等领域也逐步得到了广泛运用。     

荧光定量PCR检测痰结核分枝杆菌DNA的应用价值

目的:评价荧光定量PCR技术在痰结核分枝杆菌DNA检测中的应用价值,为临床检测提供依据。方法:对2011年7月-2013年8月在我院住院治疗的78例结核病患者,采取荧光定量PCR、抗酸菌涂片染色和改良罗氏培养三种方法对患者的同一份痰标本进行检测,比较分析检测差异。结果:荧光定量PCR检测痰结核分枝杆菌的效果明显优于抗酸菌涂片染色和改良罗氏培养检测,荧光定量PCR检测的阳性率最高,为73.1%。结论:应用荧光定量PCR技术检测痰结核分枝杆菌DNA操作简单、诊断快捷、灵敏度较高,可作为结核病的常规诊断方法,值得在临床推广应用。     

荧光定量PCR在念珠菌性阴道炎诊断中的应用价值

目的探讨荧光定量PCR在念珠菌性阴道炎诊断中的应用价值。方法选取2017年8月至2019年8月禹州市妇幼保健院接收的62例疑似阴道炎患者,分别使用荧光定量PCR和细菌培养法检测患者阴道分泌物。对比两种方法的检测结果,分析荧光定量PCR的诊断价值。结果荧光定量PCR检出率与核酸杂交法诊断检出率相比,差异无统计学意义(P>0.05);荧光定量PCR检出率高于细菌培养法(P<0.05);荧光定量PCR检测的灵敏度、特异度、准确性均高于细菌培养法(均P<0.05)。结论荧光定量PCR诊断念珠菌性阴道炎效果较好,临床值得推广。     

荧光定量PCR检测结核分枝杆菌

目的比较荧光定量PCR与抗酸染色、结核抗体检测结核分枝杆菌的灵敏度和特异性,评价荧光定量PCR检测临床标本中结核杆菌的应用价值。方法对48例临床确诊的结核病患者和21例非结核呼吸系统疾病患者的痰标本应用荧光定量PCR法和痰涂片抗酸染色法检测,并分离患者外周血血清检测结核抗体,对3种检测方法的结果进行分析比较。结果抗酸染色法检测结核杆菌阳性率为22.9%,特异性为100%;血清结核抗体检测阳性率为77.1%特异性为85.7%;荧光定量PCR检测阳性率为52.1%,特异性为100%。结论荧光定量PCR是一种快速、防污染、敏感性高、特异性强的结核分枝杆菌辅助诊断方法,在临床上有重要应用价值。     

荧光定量PCR在结核菌快速检测中的应用分析

目的探讨荧光定量PCR在结核菌快速检测中的应用效果。方法选取安阳市结核病防治所2014年6月至2014年12月就诊的100例呼吸系统疾病患者(临床阳性痰分离株100份),应用荧光定量PCR技术检测。结果荧光定量PCR检测准确率为97%,菌种鉴定特异性实验符合率为100%。结论结核菌快速培养法如荧光定量PCR技术经济、简单,结果可靠,特异度和敏感性均居较高水平,鉴别诊断能力较强,实验室可据自体条件对不同的检测方法进行选择。     

应用荧光定量PCR法快速诊断柯萨奇病毒性脑炎

目的：采用逆转录PCR结合荧光探针对体外RNA扩增和检测技术即荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）方法测定脑脊液中柯萨奇病毒（CBV）的数量，诊断柯萨奇病毒性脑炎。方法：采用CBV FQ-PCR诊断试剂盒，以一种完全闭管式的PCR和荧光探针杂交技术相结合所产生的实时检测定量PCR法，检测了113例临床诊断为病毒性脑炎患儿的脑脊液标本。结果：46例脑脊液FQ-PCR CBV阳性患者中，CBV拷贝数与临床病情轻重呈正相关，在病程早期CBV阳性率较高。结论：FQ-PCR法可用于柯萨奇病毒性脑炎的早期诊断，对指导治疗和疗效观察有一定的临床意义。     

利用荧光定量PCR技术对人肠道乳酸杆菌进行定量检测

目的应用荧光定量PCR技术对人粪便内乳酸杆菌进行定量检测,建立乳酸杆菌的荧光定量PCR检测体系。方法依据人肠道乳酸杆菌16S rDNA序列设计属特异性引物,应用荧光定量PCR技术检测乳酸杆菌的16S rDNA,对粪便中的乳酸杆菌进行定量检测和分析,并与用传统方法所获得的结果进行比较。结果荧光定量PCR检测乳酸杆菌和传统方法检测乳酸杆菌获得的结果接近,差异无统计学意义(P>0.05)。结论荧光定量PCR技术比传统方法省时、省力,且敏感性和特异性更高。     

荧光定量PCR技术在结核分枝杆菌检测中的应用

目的探讨荧光定量PCR（FQ-PCR）技术在结核分枝杆菌检测中的应用价值。方法采用荧光定量PCR、抗酸染色和改良罗氏培养三种方法同时检测156例结核患者标本,对检测结果进行比较。结果荧光定量PCR、抗酸染色法、改良罗氏培养法检测结核分枝杆菌的阳性率分别为50%、25.64%、33.33%,以荧光定量PCR检测的阳性率最高。结论荧光定量PCR方法检测结核分枝杆菌具有灵敏度高、简便、快速的特点,可作为结核病诊断的常规方法,在临床上有重要应用价值。     

荧光定量PCR技术在淋病预后诊断中的作用

目的 探讨荧光定量PCR技术在性病预后诊断中的应用。方法 用荧光定量PCR法追踪检测25例性病门诊患者淋球菌(NG)。结果 荧光定量PCR法能够检测淋病的治疗效果。结论 荧光定量PCR技术具有高灵敏性、高特异性、高精确性、效率高和污染小等特点，是一种有效、快速和简便的检测方法，具有广泛应用价值。     

荧光定量PCR检测生殖道内沙眼衣原体感染的应用

目的 评价DNA定量测定技术在生殖道衣原体感染诊断中的应用价值.方法 比较荧光定量DNA测定与传统检测手段对衣原体感染的检测结果.结果 用荧光定量PCR法测定DNA来检测沙眼衣原体(CT)感染,其敏感性和特异性均比传统的方法高.结论 CT-DNA定量测定不宜用作短期判愈,在沙眼衣原体诊断中具有巨大的潜力.     

检测肺炎支原体的实时荧光PCR方法的建立

目的 采用Taqman探针技术,组建肺炎支原体荧光PCR基因检测方法.方法 对GenBank登录的肺炎支原体的基因序列进行生物信息学分析.针对16s核糖体蛋白基因的保守区域设计引物和探针,组建实时荧光PCR方法检测.采用流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒和腺病毒进行特异性评价.采用倍数稀释的方法进行灵敏度的评价.对来自南方医院的522份临床咽拭子样本进行检测.结果 用实时荧光PCR方法检测甲型流感病毒(甲型、乙型)、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、呼吸道腺病毒均无特异性反应.该方法可以检测出稀释浓度约为103/mL的肺炎支原体样本.对本院的临床样本检出39份.结论 实时荧光PCR检测肺炎支原体具有较高的特异性和灵敏度,可用于肺炎支原体感染的诊断.     

肺炎衣原体荧光PCR检测方法的建立和应用

目的采用Taqman探针技术,组建肺炎支原体荧光PCR基因检测方法。方法对GenBank登录的肺炎衣原体的基因序列进行生物信息学分析,针对保守区域设计引物和探针,组建实时荧光PCR检测方法。对来自本院的560份临床咽拭子样本和肺泡冲洗液样本进行检测。采用流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒和腺病毒进行特异性评价。结果本实时荧光PCR方法对甲型流感病毒(甲型、乙型)、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、呼吸道腺病毒无特异性反应。本院的临床样本检出26份,其中咽拭子9份,肺泡冲洗液17份。结论肺炎支原体荧光PCR检测方法可用于肺炎衣原体感染的辅助诊断。     

胎盘组织荧光PCR诊断早期先天梅毒的研究

目的评价胎盘组织荧光PCR(VQ—PCR)在先天梅毒早期诊断中的作用。方法对34例梅毒孕妇和30例非梅毒对照孕妇的胎盘和脐带组织进行梅毒螺旋体DNA的荧光定量PCR检测，并与常规临床及血清学综合诊断方法比较。结果34例梅毒孕妇的胎盘组织中，11例荧光PCR为阳性，阳性率为32．35％，30例非梅毒孕妇的胎盘和脐带样本荧光PCR均为阴性；以常规临床及血清学综合诊断方法为标准，则荧光PCR与常规方法结果的灵敏度为82％，特异性100％，约登指数0．82。显示在诊断先天梅毒新生儿时，FQ—PCR至少有不低于常规综合诊断方法的价值。结论与常规临床血清学综合诊断方法相比，荧光PCR均有明显的优势。     

应用荧光定量PCR检测前列腺炎沙眼衣原体的探讨

目的:探讨分析应用荧光定量PCR检测前列腺炎的沙眼衣原体(CT)的感染情况和荧光定量PCR检测在前列腺炎中的诊断价值。方法:采用荧光定量PCR(FQ-PCR)检测法,对256例前列腺炎患者前列腺液的CT进行检测。结果:256例前列腺炎患者检出CT63例,阳性率为24.5%。结论:前列腺炎患者与CT感染有着密切的关系,对指导临床在病原学的诊断与治疗具有其重要的应用价值。     

实时荧光定量PCR快速检测肠道病毒EV71

目的建立荧光定量PCR技术用于检测肠道病毒EV71。方法临床诊断或疑似为手足口病病例的咽拭子或肛拭子387份,采用荧光定量PCR技术检测EV71病毒的感染情况。结果 EV71病毒的感染率为50.90%。年龄为2个月～6岁,其中,男性为231例,感染率为51.95%（120/231）;女性为156例,感染率为49.36%（77/156）,最小感染者5个月,最大感染者6岁。结论实时荧光定量PCR技术可用于肠道病毒EV71的检测,有利于感染者的早发现并对患者治疗提供依据。     

荧光定量PCR在结核分枝杆菌快速诊断中的研究

目的 在痰液标本中,探讨荧光定量PCR技术快速检测结核分枝杆菌应用的诊断价值。方法 选取210例初诊的疑似结核病患者的痰液标本,分别进行痰涂片、MGIT960液体培养以及荧光定量PCR的检测,其中103例标本还进行了Xpert MTB/RIF检测,通过比较来分析荧光定量PCR在检测结核分枝杆菌方面的敏感度和特异性。结果 荧光定量PCR方法从痰液中检出结核分枝杆菌的阳性率高达28%,显著高于痰涂片15.2%的检出率,并且与结核培养的30.9%检出率相接近。以MGIT960液体培养为金标准,荧光定量PCR方法检测痰液标本中的结核分枝杆菌的敏感度和特异度分别为67.7%、 89.7%,阳性预测值和阴性预测值分别为74.6%和86.1%,两者之间差异没有统计学意义。将荧光定量PCR方法与Xpert MTB/RIF诊断方法相比较,分析发现荧光定量PCR方法的敏感度和特异度分别为85.9%、94.9%,阳性预测值和阴性预测值分别为96.5%和80.4%,两者之间差异没有统计学意义。结论 荧光定量PCR方法在检测结核分枝杆菌时具有较好的敏感度和特异度,效果优于传统的痰涂片方法,并且与Xpert MTB/RIF方法具有较好的一致性。荧光定量PCR检测成本较低,且结果准确,在快速检测结核菌方面具有比较好的应用前景。