肝癌患者锌指蛋白281的表达水平及其对肝癌细胞增殖凋亡的影响

目的探讨肝癌患者锌指蛋白281(ZNF 281)的表达水平,并分析其对人肝癌细胞Hep G2增殖和凋亡的影响。方法收集河南大学第一附属医院2014年1月至2017年1月经手术切除后病理切片证实的肝癌标本82例及癌旁正常组织标本50例,采用免疫组化法检测肝癌和癌旁正常肝组织标本中ZNF 281蛋白表达情况,并分析ZNF 281阳性表达与临床病理参数[性别、年龄、肿瘤直径、国际恶性肿瘤分期(TNM分期)、淋巴结转移、甲胎蛋白(AFP)]的关系;采用荧光定量PCR检测上述组织中ZNF 281mRNA的表达情况;采用沉默RNA(siRNA) ZNF 281转染人肝癌细胞Hep G2,根据转染情况分为空白对照组(正常培养的Hep G2)、阴性对照组[转染ZNF 281基因非特异性沉默RNA(siRNA)干扰组]、siRNA ZNF 281组[转染ZNF 281基因特异性siRNA干扰组],并用荧光定量PCR检测转染后Hep G2细胞中ZNF 281 mRNA的表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测转染后细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果肝癌组织中ZNF 281 mRNA的相对表达量高于正常肝组织(P <0. 05);肝癌组织ZNF 281蛋白阳性表达率为74. 39%,高于癌旁正常肝组织的18. 0%(P <0. 05),且ZNF 281蛋白阳性表达患者肿瘤直径> 5 cm,TNM为Ⅲ～Ⅳ期,淋巴结转移比例分别为65. 57%、73. 77%、45. 90%,高于ZNF 281蛋白表达阴性的38. 10%、38. 10%、14. 29%(P <0. 05)。siRNA ZNF281组Hep G2细胞中ZNF 281 mRAN表达量低于空白对照组和阴性对照组(P <0. 05); siRNA ZNF 281组细胞生长抑制率和细胞凋亡率均高于空白对照组和阴性对照组(P <0. 05);空白对照组和阴性对照组Hep G2细胞中ZNF 281 mRAN表达量及细胞生长抑制率和细胞凋亡率比较,差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论肝癌组织中ZNF 281蛋白及其RNA均呈高表达;沉默ZNF 281基因可抑制人肝癌细胞Hep G2增殖,诱导其凋亡。     

胃癌中肿瘤/睾丸抗原的表达研究及NY-ESO-1蛋白的自身抗体检测

目的:分析胃癌中11种CT抗原(cancer/testis antigen)基因的表达分布及NY-ESO-1蛋白引发的自身体液免疫应答,为胃癌的特异性肿瘤疫苗治疗提供依据.方法:利用RT-PCR方法,检测101例胃癌患者肿瘤标本和对应正常胃黏膜中11种CT抗原基因的表达.ELISA方法检测抗NY-ESO-1抗体.利用NY-ESO-1的单抗E978,应用免疫组化方法检测组织切片中NY-ESO-1抗原物质.结果:101例胃癌患者中,74.3%的患者至少表达1种检测的CT抗原基因.12例患者表达NY-ESO-1 mRNA,5例可以检测到NY-ESO-1抗原蛋白以及针对NY-ESO-1抗原的体液免疫反应.结论:胃癌中表达多种CT抗原基因,表达率较高的MAGE-3,SSX-4和NY-ESO-1/LAGE-1蛋白等可作为肿瘤疫苗的备选抗原,其中NY-ESO-1蛋白的免疫原性得到验证.CT抗原的多价肿瘤疫苗在胃癌治疗中具有一定的可行性.     

FSCN1蛋白在人上皮性肿瘤组织中的表达及其临床意义

目的 探讨FSCN1蛋白在上皮性肿瘤组织中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组织化学方法检测303例人类上皮性肿瘤组织标本及80例相应正常组织标本中FSCN1蛋白的表达,303例上皮性肿瘤包括26例肺癌、33例宫颈癌、22例卵巢癌、38例食管癌、24例胰腺癌、23例胃癌、29例喉癌、17例原发性肝癌、34例大肠癌、33例乳腺癌、24例鼻咽癌.结果 FSCN1蛋白在上皮组织中表达阳性率为6.3%(5/80),在上皮性肿瘤中表达阳性率为58.7%(178/303),在上述11种上皮性肿瘤中,FSCN1在宫颈癌、卵巢癌、食管癌、胰腺癌、胃癌、喉癌、大肠癌、乳腺癌及鼻咽癌中的表达明显高于其相应的正常组织,差异具有统计学意义(P<0.05).在胃癌和鼻咽癌中,肿瘤侵袭的边缘明显强于肿瘤内部的表达.结论 FSCN1蛋白在上皮来源性肿瘤中表达明显上调,FSCN1可能与肿瘤的发生发展密切相关.     

锌指蛋白217在胃癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨锌指蛋白217(zinc finger protein 217,ZNF217)在胃癌组织中的表达及临床意义。 方法 收集2013年3月—2014年7月间于浙江省台州市立医院胃肠外科行胃癌根治术的58例胃癌及对应癌旁组织,同期收集临床疑似诊断为胃癌但经活检病理证实为良性疾病的胃黏膜组织30例。采用qRT-PCR检测ZNF217 mRNA在胃癌及癌旁组织中的表达,免疫组织化学染色检测ZNF217蛋白表达。收集2组患者的临床病理资料,分析ZNF217蛋白表达与胃癌患者临床及病理特征间的相关性及诊断价值。 结果 ZNF217 mRNA在胃癌组织中表达水平(6.911±0.139)显著高于对应癌旁组织(1.372±0.205),P＜0.001;ZNF217蛋白在胃癌组织中也呈现异常高表达状态(χ2=39.910,P＜0.001),并且胃癌组织中ZNF217蛋白高表达与肿瘤体积增大(χ2=5.810,P=0.016)、淋巴结转移(χ2=5.778,P=0.016)及高TNM分期(χ2=4.806,P=0.028)呈显著正相关。ROC分析提示:ZNF217的表达作为诊断胃癌的价值较高,灵敏度和特异性均在0.8附近。 结论 ZNF217 mRNA及蛋白在胃癌组织中表达上调,高水平ZNF217蛋白表达与胃癌患者恶性临床及病理特征有关。ZNF217在胃癌早期诊断及分子靶向治疗方面具有一定的科研及临床研究价值。      

锌指蛋白703在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的 研究锌指蛋白703(ZNF703)在甲状腺乳头状癌中的表达(包括阳性率及相对表达量)及阳性率与临床特征的关系.方法 应用免疫组织化学法(pv9000法)检测组织芯片(包括36例甲状腺乳头状癌及14例癌旁正常组织)中ZNF703的阳性表达率,并分析癌组织中的阳性表达率与芯片包含的相关临床资料(年龄、性别、肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期)之间的关系.另收集20例临床新鲜甲状腺乳头状癌及匹配癌旁组织样本,应用Western blot及RT-PCR技术检测ZNF703在20对组织样本的蛋白和mRNA相对表达量.结果 免疫组化提示ZNF703在甲状腺乳头状癌的阳性表达率为66.7%,较癌旁组织的21.4%明显增高,差异具有统计学意义(P<0.05);癌组织阳性表达率与年龄、性别无关,与肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移有关(P<0.05).Western blot及RT-PCR提示ZNF703在20例甲状腺乳头状癌组织的蛋白相对表达量[(0.893±0.113)vs(0.510±0.072)]及mRNA相对表达量[(6.399±2.096)vs(1.285±0.354)]均高于匹配癌旁组织,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 ZNF703在甲状腺乳头状癌中的表达高于癌旁组织,并且在癌组织中ZNF703阳性率高低与患者临床分期、淋巴结转移及肿瘤大小有关,可见ZNF703在甲状腺乳头状癌的发生及进展中可能发挥促进作用.     

肝细胞肝癌中ZNF146蛋白的表达及意义

目的：探讨锌指蛋白146（ZNF146）在肝细胞肝癌（HCC）癌组织中的表达及其临床意义。方法：收集40例HCC肿瘤组织和癌旁组织,采用逆转录-聚合酶链式反应和免疫组化检测HCC肿瘤组织、癌旁组织ZNF146基因mRNA和蛋白的表达,分析ZNF146表达与临床病理因素的关系。结果：HCC肿瘤组织中ZNF146 mRNA及其蛋白的表达明显高于癌旁组织,差异有统计学意义（P＜0.05）,在不同分期及不同大小肿瘤中ZNF146表达的差异有统计学意义（P＜0.05）,肿瘤直径≥5 cm、Ⅲ/Ⅳ期肿瘤患者中ZNF146表达明显增加,而在患者年龄、性别、是否有HBsAg感染的不同组别中ZNF146表达差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：ZNF146在HCC组织中表达增高,可能参与与肿瘤发生和演进,ZNF146有可能是HCC潜在的生物标志物之一。     

CCN1在结肠癌中的表达及其临床意义

目的检测CCN1基因在结肠癌组织中的表达情况,探讨CCN1的表达与结肠癌患者临床病理特征的关系及意义。方法应用Real-time PCR及Western blot方法检测CCN1在4例结肠癌及相应癌旁正常组织中mRNA和蛋白表达水平的差异表达;采用免疫组化检测117例结肠癌石蜡组织中CCN1的表达情况,分析其与结肠癌临床病理特征的关系及预后意义。结果在4例结肠癌组织中CCN1基因在mRNA及蛋白水平的表达高于相应正常癌旁组织;免疫组化检测结果显示CCN1蛋白在结肠癌组织中的表达阳性率为87.2%(102/117),强阳性率为58.1%(68/117),CCN1蛋白在结肠癌组织中的表达水平高于相应癌旁组织;统计学分析结果显示,CCN1蛋白高表达与结肠癌临床分期、淋巴结转移及远处转移密切相关,而与性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤大小及分化程度无显著相关性。结论CCN1在结肠癌组织中高表达,其表达水平与肿瘤进展密切相关,提示CCN1在肿瘤发生和转移中可能起到重要作用。     

癌-睾丸抗原SSX基因在肝细胞癌中mRNA水平的表达及意义

目的观察癌-睾丸抗原SSX基因在肝癌组织和肝癌细胞株中mRNA水平的表达情况,探究该基因家族的表达与肝癌的诊断、治疗的关系,进而评价该基因家族作为肝癌免疫治疗靶点和多价肿瘤疫苗研制的可行性。方法对28例肝细胞癌和癌旁组织、3例肝硬化组织以及肝癌细胞株7404、HePG2、7721采用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）方法检测癌-睾丸抗原SSX基因在mRNA水平的表达情况。结果SSX-1、SSX-2、SSX-3在肝癌癌旁组织和肝硬化组织中均不表达。在收集的肝细胞癌组织中SSX-1、SSX-3基因表达阳性率较高（53．6％、57．1％）,SSX-2表达阳性率相对较低（35．7％）,其中SSX-1、SSX-2、SSX-3三种基因共同表达的有6例（21．4％）,至少有两种SSX基因表达的有23例（82．1％）。结论癌-睾丸抗原某些SSX基因在肝细胞癌中高频率表达与肝癌的发生、发展有关,同时基因的共同表达结果又为多价瘤苗的研究提供了实验方向。     

非小细胞肺癌中端粒酶催化基团mRNA表达的临床意义

目的 研究非小细胞肺癌(NSCLC)与正常肺组织穿刺标本中端粒酶催化基团(hTRT)mRNA表达与肿瘤分期与分级关系,探讨其在非小细胞肺癌早期诊断中的临床意义.方法 采用原位杂交技术检测非小细胞肺癌与正常肺组织中端粒酶催化基团mRNA表达.结果 30例非小细胞肺癌中25例端粒酶催化基团mRNA表达阳性,阳性率83.3%;对照组20例中无端粒酶催化基团mRNA阳性表达,阳性率0%.结论 端粒酶催化基团mRNA在非小细胞肺癌中有异常阳性表达,表达与肿瘤分期与分级有关.与肿瘤病理分型无关.     

黑素瘤抗原-3 基因及蛋白在非小细胞肺癌中的表达

目的 检测黑素瘤抗原-3(MAGE-3)mRNA及其编码的肿瘤抗原在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达,探讨以该抗原作为疫苗对NSCLC患者进行免疫治疗的可能性.方法 用RT-PCR方法和流式细胞术(FCM)对3种人肺癌细胞系和56例NSCLC标本及相邻正常肺组织标本MAGE-3 mRNA及蛋白的表达情况进行研究.结果 3种人肺癌细胞系均表达MAGE-3mRNA及蛋白;56例NSCLC标本中,30例表达MAGE-3 mRNA,26例表达MAGE-3蛋白,而相邻正常肺组织均不表达MAGE-3mRNA或蛋白.结论 MAGE-3 mRNA及蛋白在NSCLC中具有较高的表达频率,提示该抗原有望成为对NSCLC患者进行免疫治疗的适宜靶点.     

ZNF207在肝细胞癌中的表达及意义

目的：研究锌指蛋白207(zinc finger protein 207,ZNF207)在人肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中 的表达情况,分析其与HCC临床病理特征及预后的相关性。方法：选择10对新鲜的冰冻HCC组织及相应癌旁肝组 织标本,采取real-time PCR检测其中ZNF207 mRNA的表达;另随机选择135例有完整资料的HCC石蜡标本,采用免 疫组织化学检测其中ZNF207蛋白的表达;统计分析ZNF207的表达与HCC临床病理特征及预后的关系。结果：在新 鲜冰冻HCC组织中ZNF207 mRNA的表达水平明显高于相应的癌旁肝组织(P<0.01);免疫组织化学结果显示HCC组 织中ZNF207呈显著高表达;且ZNF207的表达与肝硬化、结节数目、肿瘤包膜、微血管侵犯以及TNM分期明显相关 (P<0.05);生存分析显示ZNF207高表达组HCC患者总生存率、无瘤生存率较ZNF207低表达组明显下降(P<0.01);单多因素回归分析显示ZNF207是HCC患者总生存率及无瘤生存率的独立危险因素(P<0.05)。结论：ZNF207在HCC中呈高 表达,与HCC不良临床病理特征密切相关,并预示不良预后。     

MACC1在肝细胞癌中的表达与临床意义

目的 探讨肝细胞癌组织结肠癌转移相关基因1 (metastasis-associated in colon cancer 1,MACC1)的表达及其临床意义.方法 采用免疫组化测定108例病理确诊肝细胞癌患者的肝癌组织和癌旁无瘤肝组织中的MACC1蛋白表达情况,实时荧光定量PCR检测30例肝癌组织、癌旁组织以及20例正常肝组织中MACC1 mRNA的表达,分析肝癌组织中MACC1的表达水平与临床病理因素及预后的关系.结果 免疫组化结果显示,肝癌组织中MACC1蛋白表达的阳性率为49.1％(53/108),高于癌旁肝组织34.2％(37/108,P=0.011);实时荧光定量PCR结果显示,MACC1 mRNA在肝癌组织中的表达高于癌旁肝组织及正常肝组织(P＜0.001).单因素方差分析表明肝癌组织中MACC1的表达与肿瘤大小、有无包膜及病理分型密切相关(P＜0.05).生存分析表明MACC1阳性患者的1年、3年和5年总体生存率分别为0.650、0.492和0.280,而MACC1阴性患者1年、3年和5年总体生存率分别0.799、0.684和0.566,差异有统计学意义(P=0.006).结论 肝癌组织中MACC1的表达与肝癌的恶性演变及患者的临床预后密切相关,MACC1有望成为判断肝癌患者临床预后的重要分子,且有可能成为肝癌分子靶向治疗的新靶点.     

卵巢肿瘤中基质金属蛋白酶-7及其组织抑制剂-3基因的表达

目的研究卵巢肿瘤组织中基质金属蛋白酶MMP-7及组织抑制剂TIMP-3基因的表达及与卵巢恶性肿瘤临床病理特征和预后的关系.方法应用RT-PCR方法检测48例恶性卵巢肿瘤、21例良性肿瘤及22例正常卵巢组织中MMP-7及TIMP-3mRNA的表达情况,进行阳性率及半定量的比较,并将其结果与临床及病理学资料进行统计学分析.结果 MMP-7及TIMP-3在正常卵巢组织中阳性率仅为9.09%与4.50%,在卵巢恶性及良性肿瘤中阳性表达率分别为83.3%、66.7%、68.7%、81.0%,明显高于正常卵巢(P＜0.000),其半定量表达亦明显高于正常卵巢(P＜0.000).它们在卵巢恶性肿瘤中的表达水平与患者的临床病理特征及预后无相关性.结论 MMP-7及TIMP-3可能与卵巢肿瘤的发生、发展有关.     

黑色素瘤抗原-1基因在肝细胞癌中的表达

目的 检测黑色素瘤抗原－１（ＭＡＧＥ－１）ｍＲＮＡ在肝细胞癌（ＨＣＣ）中的表达,为用ＭＡＧＥ－１基因编码蛋白作为疫苗对ＨＣＣ患者进行免疫治疗提供依据。方法 用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法对４５例ＨＣＣ患者组织和相应癌旁肝组织以及１６例肝硬化组织和１２例正常肝组织的ＭＡＧＥ－１ｍＲＮＡ表达情况进行了研究,对６例ＲＴ－ＰＣＲ扩增产物的目的基因片段进行ＤＮＡ序列测定,并以测序证实为ＭＡＧＥ－     

ZNF262在常染色体显性多囊肾病患者肾组织中的表达及意义

目的:检测锌指蛋白262(ZNF262)在正常肾组织及不同发病阶段多囊肾组织中的表达,并以增殖细胞核抗原(PCNA)为对照,初步探讨ZNF262在常染色体显性多囊肾病(autosomal dominant polycystic kidney disease,ADPKD)中的作用.方法:根据肾小球滤过率(GFR)大小对ADPKD(n=8)进行分期,观察其影像学、常规病理检查结果,采用半定量RTPCR方法检测人正常肾组织(n=8)、早期多囊肾组织(n=4)、晚期多囊肾组织(n=4)中ZNF262和PCNA的表达,并对上述组织中ZNF262和PCNA的表达进行相关性分析.结果:与正常肾组织相比,ZNF262和PCNA在早期、晚期多囊肾组织中的表达均显著增多(P＜0.01),且晚期多囊肾组织表达高于早期多囊肾组织(P＜0.05).ZNF262和PCNA在早期、晚期多囊肾及正常肾组织中的表达存在显著的相关性(r1=0.842 6,r2=0.902 1,r3=0.883 5,均P＜0.05).结论:与正常组织相比,ZNF262不仅在ADPKD高表达,并且随着病程进展表达逐步增高,这与PCNA的表达具有显著的相关性.提示ZNF262可以作为检测ADPKD的指标,并有助于临床进展分期的判别.     

UGT1A基因亚族在结肠粘膜及肝组织中的表达

目的:从mRNA水平及蛋白质水平分析葡萄糖醛酸转移酶UGT1A基因位点在结肠粘膜及肝组织中的表达。方法:结肠癌病例组25例,正常人肠道粘膜20例、正常肝组织12例。用逆转录聚合酶链反应分析结肠癌组、正常人肠道粘膜、肝组织中UGT1AmRNA的表达;用免疫印迹检测各组UGT1A蛋白的表达;用间接免疫荧光技术分析UGT1A蛋白的荧光定位及表达强度。结果:结肠癌组织中UGT1AmRNA表达低于其周围正常粘膜,而后者低于正常人肠粘膜的表达量,正常人群结肠粘膜中,UGT1AmRNA表达总体低于肝组织,P<0.01。结肠癌组、正常人结肠粘膜组织呈现个体差异性表达,而肝脏组织的表达较均质;结肠癌组织、癌周正常粘膜及正常人肠道粘膜中,UGT1A各同工型的表达例数均不相同。UGT1A1、1A3、1A4、1A6、1A9mRNA表达水平在癌组织低于周围正常粘膜,P<0.01,而UGT1A8、1A10在癌组织中mRNA表达量高于周围正常粘膜,P<0.01。肝组织中12例全部均质表达UGT1A1、UGT1A3、UGT1A4、UGT1A6、UGT1A9;UGT1A蛋白灰度比值在结肠癌组织显著低于其周围正常组织,后者又低于正常人肠粘膜,P<0.01。各组内蛋白表达的深浅度亦各不相同,而肝组织的蛋白表达较均质;UGT1A蛋白在结肠定位于粘膜层的上皮细胞,在肝小叶中可见整个肝小叶均质的荧光定位。两种组织的单个细胞内荧光强度等同可比,但单个癌细胞的荧光强度低于正常粘膜上皮细胞。结论:UGT1A基因位点的多态表达不仅存在于结肠癌组织及周围的正常组织,亦存在于正常人群肠粘膜,而肝脏呈均质性表达;结肠粘膜上皮UGT1A基因位点在转录水平及蛋白水平均存在着差异性,不同个体对致癌物的易感性不同可能是这种差异表达的结果。